Среда для разбавления спермы

 

(i ц 67030!

ОП И САНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05.01.78 (21) 2565504/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.06.79. Бюллетень № 24 (45) Дата опубликования описания 30.06.79 (51) М. Кл

А 61D 7/02

Государственный комитет (53) УДК 591.463.1:

:636.082.453. .5 (088.8) ло делам изобретений н открытий (72) Авторы изобретения

В. М. Столбов и В. И. Ершов (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт разведения и генетики сельскохозяйственных животных (54) СРЕДА ДЛЯ РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных.

Защитные среды или разбавители, применяемые в искусственном осеменении животных, используются как для увеличения обьема полученной спермы, так и для поддсржания многих ее биологических свойств, в том числе удлинения срока жизни сперматозоидов, повышения»х активности, поддержания процессов гликолиза и дыхания, повышения оплодотворяющей способности и т. д. (1). С этой целью в разбавители вводится ряд веществ органического и неорганического происхождения, должных обеспечивать оптимальные условия для жизнедеятельности сперматозоидов.

В настоящее время создано значительное количество защитных сред для разбавления и замораживания спермы, в том числе и среды для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в гранулах об.ьемом 0,1 — 0,2 мл. На станциях искусственного осеменения для оттаивания и дополнительного разбавления спермы, замороженной в виде гранул объемом 0,1—

0,2 мл, используются среды, состоящие из лимоннокислого натрия и глюкозы, растворенных в дистиллированной воде (2).

Эти среды обеспечивают в основном хорошее качество спермы после ее оттаивания, однако не являются биологически оптимальными для сперматозоидов и требу5 ют совершенствования.

Учитывая исключительную важность набора компонентов, входящих в состав разбавителя, и их влияние на качество спермы после оттаивания, за основу была взята среда, рекомендуемая инструкцией по искусственному осеменению для оттаивания гранул объемом 0,1 — 0,2 мл 13). Среда имеет следующий состав компонентов; на

100 мл дистиллированной воды 3,1 г нат15 рий лимоннокислый, 1 г глюкоза медицинская. Эта среда обеспечивает активность спермы быков после оттаивания 4 — 5 баллов и живучесть при 37 С в течение 4 — бч.

Недостатком указанной среды для разбавления семени является ее отрицательное влияние на биологическую активность спермиев.

С целью увеличения живучести сперматозоидов и их оплодотворяющей способности, а также активности в состав среды для оттаивания и разбавления гранул спермы объемом 0,1 — 0,2 мл введен экстракт ткани, содержащей большое количество гиалуроновой кислоты и пировиноградно670301 кислый натрий (ТУ 6-09-483 — 70), отвечающий формуле СзНзОзИа при следующем соотношении компонентов, вес. %:

Лимоннокислый натрий 2,78 — 3,07

Глюкоза 042 — 1,15 5

Пировинограднокислый натрий 0,09 — 0,24

Экстракт животной ткани 5,75 — 12,46

Вода Остальное

При добавлении гиалуроновой кислоты к 10 сперме происходит связывание воды, в результате чего увеличивается концентрация осмотически активных веществ — сахаров, солей, увеличивается вязкость жидкостей.

Это способствует повышению устойчивости 15 сперматозоидов к колебаниям температуры, большей их сохранности и живучести после оттаивания и препятствует быстрому вытеканию разбавленной спермы из шейки матки при осеменении коров, что ведет к повышению оплодотворяемости яйцеклеток.

По данным (1) введение в разбавитель экстракта животной ткани, являющегося биостимулятором, способствует увеличению 25 сроков переживаемости сперматозоидов и повышению оплодотворяющей способности спермы, Предполагается, что при добавлении биостимулятора вносятся коферменты, которые будучи неспецифичными могут вос- 30 станавливать в сперматозоидах необходимый уровень течения реакций, в основном реакции гликолиза.

В качестве источника животной ткани в предлагаемой среде для получения экст- 35 ракта взята водянистая влага глаза вместе со стекловидным телом. Экстракт готовят из свежей ткани.

Добавление в разбавитель пировинограднокислого натрия удлиняет исходный уро- 40

Таблица 1

Персжнваемость замороженной оттаянной спермы прн 37 С, ч

Активность спермы после оттаивания

Количество определений

Депрессия точки замерзания рН

Среда

m (1!т

m llm

m 11т

lim

7ч 55 мин — 10ч

0,61 — 0,63

0,6 †. 0,62

7,78 — 8,28

7,71 — 8,36

8,09

4,96

4 — 5,5

8 ч 54 мин

5ч 48мин

Предлагаемая

0,62

7,96

Зч53мин 6ч

22 мин

Прототип

0,61

4,46

Использование предлагаемой среды позволит повысить оплодотворяемость скота

45 и получить от 1000 коров дополнительно 60 телят в год. Кроме того, за счет сокращения сервис-периода на 20 — 30 дней будет получено дополнительное количество молока от новотельных коров. Общая экономи50 ческая эффективность в расчете на 1000 коров составит сумму 20 — 25 тыс. руб.

Оплодотворяемость коров по первому осеменению составила 69,3%, что на 15,9% выше, чем при использовании среды прототипа, В табл. 2 приведены результаты осеменения скота с предлагаемой средой и средой — прототипом (контроль).

Предлагаемая среда превосходит среду прототипа по активности сперматозоидов после оттаивания на 0,5 балла, по переживаемости на 3 — 4 ч и по оплодотворяющей способности на 10,5 — 31,6%. вень дыхания сперматозоидов и способствует более длительной их переживаемости.

Пример. Сперму животных (быка) разбавляли лактозо-желточным разбавителем (11,5 r лактозы растворяется в 100 мл дистиллированной воды и добавляется

20 мл яичного желтка и 5 мл глицерина или берется 63 мл 11%-ного раствора лактозы, добавляется 30 мл желтка и 7 мл глицерина) и замораживали в форме гранул, объемом 0,1 — 0,2 мл на фторопластовой пластине. После этого замороженную сперму размораживали путем разбавления в предлагаемой среде следующего состава, вес. %:

Лимоннокислый натрий 2,97

Глюкоза 0,96

Пируват натрия 0,19

Экстракт животной ткани 11,02

;: Вода до 100

Для размораживания одной гранулы брали 0,9 — 1 мл предлагаемой среды и определяли активность и выживаемость спермы и производили осеменение коров. Телята, полученные от коров, осемененных спермой с предлагаемой средой, рождались нормальными, никаких отклонений в состоянии половых органов или заболеваний у коров не наблюдалось.

Использование предлагаемой среды, включающей экстракт животной ткани с большим количеством гиалуроновой кислоты и пировинограднокислый натрий, обеспечивает активность спермы после оттаивания 4 — 5,5 баллов, переживаемость при

37 С вЂ” 9 — 10 ч, тогда как при использовании среды прототипа была активность

4 — 5 балла, переживаемость при 37 С

4 — 6 ч, В табл. 1 представлена биологическая полноценность испытуемых сред.

670301

Таблнца 2

Среда — прототип

Предлагаемая среда

° и

f о о ж

° О

Ф (»

О

f» о о

И

О

Q)

v Xo о

CC

GROAN ж .а >

" о

И у QJ а - - о оооо

Ф о И о ж

<2оо лжи

A +ID

" о и

Ю CLI а, о оооо

Наименование хозяйства о

X и. о о о.

v o о х

° О (» с.) о

И

С0 с0 о, о

Ж

Ф жд о фа

3 о о

227

57,4 — 89,6

65,4 — 72,2

50,4

450

44,4 — 58

69,2

+ 18,8

308

Гослемзавод, Лесное.

383 53

722

47,6 — 57,5 +14,3

485

67,3

720

Гослемзавод, Петровский

Колхоз .Заречный"

76,2

+12,5

+15,9

88,7

80

57,4 — 89,6

1252

53,4

671

44,4 — 58

69,3

864

1245

По всем хозяйствам

Формула изобретения

Составитель А. Макаров

Техред Н. Строганова

Редактор Н. Суханова

Корректор Л. Орлова

Заказ 1302/3 Изд. № 397 Тираж 680 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Среда для разбавления спермы преимущественно быков, состоящая из лимоннокислого натрия, глюкозы и воды, о тл и ч аю щ а я с я тем, что, с целью повышения биологической активности спермиев, она дополнительно содержит пировинограднокислый натрий и экстракт животной ткани при следующем соотношении ингредиентов, вес. %:

Лимоннокислый натрий 2,78 — 3,07

Глюкоза 0,42 — 1,15

Пировинограднокислый натрий 0,09 — 0,24

Экстракт животной ткани 5,75 — 12,46

Вода Остальное

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

5 1. Увеличение сроков хранения спермы и повышение оплодотворяемости животных путем применения биостимуляторов. Харьков, «Прапор», 1965.

2. Семаков В. Г. Совершенствование ме10 тодов замораживания спермы быков. М., ВНИИТЭИСХ, 1977.

3. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок. М., «Колос», 1969.