Способ выделения альбумина

 

ОПИСАЙЙЕ.

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Савв Саввтекнк

Свцивлистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 11.10.74 (21) 2066407/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.01.80. Бюллетень № 4 (45) Дата опубликования описания 30.01.80 (51) М. Кл, А 61К 35/16

Гасударственный комитат

СССР ав,йелаы изсвретений и вткрытий (53) УДК 615.45;612..398 (088.8) (72) Авторы изобретения

К. А. Лобунец и В. Н. Куненко

Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ АЛЪБУМИНА

Изобретение относится к технологии получения белковых препаратов и может быть использовано в медицинской промышленности.

Известен способ выделения альбумина из плацентарной крови человека, заключающийся в том, что к исходному сырью добавляют ацетатный буфер до рН 4,6 — 4,8, понижают температуру смеси до (— 8)— (— 10) С, центрифугируют после 12 ч от- lp стоя, растворяют осадок и добавляют каприлат натрия до концентрации 0,18%, выдерживают смесь при 0 С в течение 12 ч, центрифугируют и фильтруют надосадочную жидкость для осветления белкового 15 раствора, доводят рН раствора до 6,6 — 7,0 с последующей пастеризацией при 60 С для инактивации вирусов гепатита и, наконец, дважды фракционируют белки этанолом с установлением рН 4,8 — 5,2 и ионной силы, 20 равной 0,1, и выделяют альбумин (1).

Известный способ выделения альбумина обладает тем недостатком, что многократные переосаждения и фильтрации в процессе фракционирования белков приводят к 25 потере альбумина и уменьшают выход целевого продукта. Кроме того, пастеризация перед стадией фракционирования белков этанолом не обеспечивает требуемую для терапевтических целей чистоту препарата, 3п всксоючн я

7JQ0 89 а только инактивирует вирус гепатита. Многостадийность и большой расход этанола делают технологию изготовления альбумина малоэкономичной.

Известен также способ выделения альбумина из крови человека, включающий осаждение балластных белков в присутствии 0,02 — 0,15 моль/л каприлата натрия при температуре 62 — 70 С; и рН сначала

8,0, а затем 5,6 при охлаждении смеси до комнатной температуры (2). Однако нагревание белковой смеси до 62 — 70 С при указанных значениях рН приводит к потере альбумпна и его частичной денатурации и, кроме того, требуется дополнительная очистка от каприлата натрия с помощью ионообменных смол, не обеспечивающая, однако, эффективное освобождение от примесей, присутствующих в плацентарной и абортной крови человека.

Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта и повышение производительности процесса.

Поставленная цель достигается путем осуществления стадии осаждения балластных белков в присутствии 25 — 26% этанола и 0,33% каприлата натрия при рН 6,8 — 7,2 прп нагревании до 50 — 52 C в течение

30 — 40 мин.

712089

Формула изобретения

Составитель T. Шмелева

Редактор Н. Хубларова Техред А. Камышникова

Корректор О. Данишева

Заказ 2792/4 Изд Ro 120 Тираж 673 Подписное

НПО «Г1оиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1!3035, Москва, М(-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр.

Пример. Центрифугат 4 — отход производства гамма-глобулина из ретроплацентарной и абортной сывороток, содержащий

25 — 26 этанола, загружают в реактор, набженный рубашкой и мешалкои, и добавляют каприлат натрия из расчета 3,3 г на 1 л центрифугата. После растворения каприлата ph смеси доводят до 6,8 и нагревают при оО С в течение 30 мин. Затем смесь постепенно охлаждают при перемешивании до +3 С и центрифугируют. Ocaaîê отбрасывают, а центрифугат помещают в реактор и при перемешивании охлаждают до +i Ñ, доводят рН до 5,8 с помощью

l н. соляной кислоты и добавляют охлажденный до (— 15) — (— 20) С 96 -ный этанол до его концентрации 40% в конце осаждения. Выпавший осадок, содержащий а- и Р-глобулины, гемопнгменты и незначительное количество альбумина, отделяют центрифугированием, а центрифугат загружают в реактор, в котором поддерживают температуру — 7"С, и добавляют при перемешивании охлажденный 1 н. раствор уксусной кислоты в 40 /о-ном этаноле, доводя рН смеси до 4,8. Смесь выдерживают 10—

l2 ч и отделяют осадок центрифугированием. Выход сырого альбумина составляет

4 — 5 кг на 100 л центрифугата А.

Для дополнительной очистки от глобулинов и гемопигментов осадок сырого альбумина растворяют 2 ч в апирогенной дистиллированной воде, предварительно охлажденной до +2 С из расчета 1,6 л на 1 кг осадка и отделяют нерастворившуюся часть центрифугированием. Центрифугат осветляют, фильтруя на нутч-фильтре через бумажную мезгу или тесто. Затем к раствору альбумина добавляют охлажденную апирогепную дистиллированную воду из расчета 3 л на каждый килограмм осадка сырого альбумина, учитывая ранее добавленное количество воды (1,6 л на 1 кг) . Полученный прозрачный раствор альбумина разливают по 200 мл во флаконы емкостью 500 мл и помещают в ванны охлаждающего устройства сублимационного аппарата при температуре — 40 С и замораживают в горизонтальном положении флаконов при медленном вращении вокруг оси так, чтобы раствор альбумина не попал в горло флакона. о

1О

Продолжительность замораживания составляет 40 мин. Затем лиосрильно высушивают сначала при температуре не выше — 25"1, а через 10--16 ч постепенно повышают температуру так, чтобы температура сухого альбумпна не превышала (+35)— (+40) С.

Выгрузку производят в асептических условиях, флаконы быстро закрывают прооками и извлекают из сублиматора. Герметически закупоренные флаконы можно хранить до растворения в течение 3-х месяцев в темном месте при комнатной температуре, Растворение альбумина проводят в асептических условиях, добавляя апирогенную дистиллированную воду. После растворения проводят стерилизующую фильтрацию через керамические фильтры Ф-7, асбестовые пластины или через пластины «/1иллипор». Раствор стерильно разливают во флаконы, укупоривают резиновыми пробками, закатывают алюминиевыми колпачками и пастеризуют при температуре 60 С в течение 10 ч для инактивации вирусов инфекционного гепатита, после чего препарат альбумина готов к терапевтическому применению.

Способ выделения альбумина из плацентарной и абортной сыворотки крови человека, включающий осаждение балластных белков с использованием каприлата натрия и дополнительную очистку альбумина известными приемами, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и производительности процесса, осаждение балластных белков осуществляют путем введения 25 — 26% этанола и 0,33 /о каприлата натрия и нагревания до

50 — 52 С в течение 30 — 40 ми при рН

6,8 — 7,2.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 215428, кл. А 61К 37/02, 1966 (прототип).

2. Патент США № 2705230, кл. 260 — 122, опублик. 1955 (аналог).