Штамм т-1,n464-продуцент глюкоамилазы, используемый для осахаривания крахмалистого сырья

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕтКНИЯ ""75З897

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6 1 ) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 260778 (21) 2652580/28-13 (51) М. Кл.

С 12 N 15/00

С 12 С 7/04 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий

Опубликовано 070880. Бюллетень ¹ 29

Дата опубликования описания 100880 (53) УДК 6 6 3 . 14 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е. A. Двадцатова; Г. И. Комарова, Н. H. Воронцова и Э. И. Бурцева

Всесоюзный научно-исследовательский институт продуктов брожения (71) Заявитель (54) ШТАММ ASPERGILLUS AWAMORI Т вЂ” 1, 9 464-ПРОДУЦЕНТ

ГЛЮКОАМИЛАЗЫ, ИСПОЛЬЗУЕМЫИ ДЛЯ ОСАХАРИВАНИЯ

КРАХМАЛИСТОГО СЫРЬЯ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к получению нового штамма с высокой активностью глюкоамилазы, и может быть использовано в спиртовой и крахмалопаточной промышленности.

В .настоящее время для осахаривания применяют культуру плесневых грибов

Aspergillus batatae, обладающую срав- 1О нительно невысокой глюкоамилазной активностью от 5 до 20 ед/мл к.ж., что не позволяет интенсифицировать процесс спиртового производства $1) .

Наиболее близким к изобретению является штамм Aspergillus awamori 121.

Известный штамм обладает невысокой активностью глюкоамилазы и дли тельным сроком культивирования. фелью изобретения является получе-2О ние нового штамма со стойкими биохимическими свойствами, обладающего высокой способностью к образованию глюкоамилаэы и позволяющего интенсифицировать процесс гидролиза крахмала.

Полученный штамм Aspergillus awamo

r1 T — 1, нт 464 †продуце глюкоамилазы: имеет следующие морфологические, физиологические характеристики. ЗО

На сусло-arape образует мицелий размером 2,0 — 4,0 х 5,0 — 20,0 ммк. Мицелий ветвистый. Форма клеток вытянутая, иногда вздутая. Конидии круглые, без шипов.

Жидкие питательные среды

Солодовое сусло. Через 5-7 дней при 40оС образуется толстая складчатая пленка темно-коричневого цвета.

Без взбалтывания среда прозрачная.

Запах тиПичный грибной.

Видоизмененная среда Чапека с крахмалом и вытяжкой из солодовых ростков. Пленка образуется на 6-8 сутки при 40 С. Пленка складчатая, толстая, коричневого цвета. Без взбалтывания среда прозрачная.

Твердые среды

На сусло-агаре посев штрихом— рост хороший, поверхность белая, плотная. На 2 сутки роста поверхность становится коричневатой, а на 5 сутки — темно-коричневой. Вся поверхность культуры очень складчатая, край штриха волнистый.

На солодовом агаре

Посев уколом — рост на поверхности обильный. По уколу — очень слаб я.

753897

Гигантская колония на среде Чапека с различными источниками углерода на 5 сутки роста имеет следующее строение: 1

íа глюкозе — колония круглая, складчатая, центр светло-коричневый, приподнятый. Обильное конидиесбраэсвание в центре. Размер колонии 2021 мм. В центре колонии с обратной стороны образуется пигмент коричневокрасного оттенка; на мальтозе — характеристика колонии аналогична предыдущей. Размер колонии 23-25 мм; на сахарозе — колония круглая, складчатая, образование конидий слабее, чем на глюкозе и мальтозе. Центр колонии выпуклый, желтовато-коричневого цвета. Пигмент образует слабо.

Размер колонии 17-19 мм; на крахмале — гигантская колония пушистая, не образует складок, плоская. Образование конидий в центре.

Центральная часть колонии темно-оливкового цвета, с обратной стороны колонии образуется пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии

24 — 25 мм. Вокруг колонии наблюдается зона гидролиза крахмала.

Отношение к источникам углерода

Культура гидролизует крахмал, декстрины, паннозу, иэомальтозу, мальтозу с .образованием глюкозы. Потребляет без выделения газа сахарозу, глюкозу, маннит, ссрбит. Слабо растет на лактозе и ксилозе.

Отношение к источникам азота

Хорошо ассимилирует аммснийные соли неорганических кислот. Потребляет пептон, каэеин, гидролиэат казеина, аминокислоты. Пептонизирует молоко.

Температурный оптимум роста 4042оС, рН 5,5-7,5, азроб. Не обладает токсическими свойствами.

Штамм Asperillus awamori Т вЂ” 1, Р 464-продуцент глюкоамилазы получен в результате 4-ступенчатой селекции.

В результате 3-кратной обработки конидий Aspergillus awamori на первой ступени УФ-лучами и этиленимином(ЭИ); на второй — УФ-лучами и ЭИ; на третьей — высокой температурой

100 С получен активный мутант — продуцент глюкоамилазы.

На четвертом этапе применен метод поддерживающей селекции с целью ныбора и сохранения наиболее активного проду ента — Aspergillus awamori

T — 1, Ф 464.

Основное отличие нового штамма состоит в том, что его продуцирующая способность в 1,5 раза выше, чем у исходного штамма. Штамм обладает повышенной в 1,5-2,0 раза активностью глюксамилазы -и является термостабильным.

Пример использования предлагаемого штамма

Для глубинного культивирования штамма применяют питательную среду следующего состава:

Растворимый крахмал 6,0Ъ

NaH0 0,91%

КС! 0,05% gS0Ä 0,05%

КН <Р04 0,1%

FeS0p 0,001%

Солодовые ростки 1,0%

Выращивание проводят при 40оС в колбах на качалке с 180-210 об/мин.

Максимальное накопление фермента наблюцается на третьи сутки и состанляет 45 — 50 ед/мл, т.е. выше на 40 — 50% по сравнению с исходной культурой.

15 Для осахаривания используют выращенную культуру из расчета б ед ГлА на 1 г крахмала сырья.

Активность глюкоамилазы определяли по методу определения ГлС(ГОСТ 20264Щ 64, 4-74, с. 7) с использованием ферроцианида калия, основанному на определении глюкозы, образующейся при гидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой. Активность фермента выражали в микромолях глюкозы, освобожденной за 1 мин при 50 С.

Штамм сохраняет высокую активность глюкоамилазы более днух лет, т. е. является стабильным по отношению к синтезу фермента.

Таким образом, штамм Aspergillus

awamori Т-1, Р 464 представляет собой культуру со стойкими биохимическими и морфологическими свойствами, проявляющимися н повышенной способности к образованию глюкоамилазы. Активность глюкоамилазы нового штамма при выращивании его на видоизмененной среде

Чапека с солодовыми ростками на 4050% выше активности исходного штамма

40 и составляет 50-52 ед/мл.

Формула изобретения

Штамм Aspergi,llus awamori Т вЂ” 1, Р 464-продуцент глюкоамилазы, используемый для осахаривания крахмалистого сырья, хранится в коллекции музея чистых культур Всесоюзного научноисследовательского института продук50 тов брожения.

Морфологические признаки

На сусло-агаре образует м:-целий размером клеток ?,0-4,0 х 5,0-20,0 ммк.

Мицелий ветвистый. Форма клеток вытянутая, иногда вздутая. Конидии круглые, без шипов.

Физиологические признаки

Жидкие питательные среды

Солодовое сусло. Через 5 — 7 дней при 40 С образуется толстая складча50 тая пленка темно-коричневого цвета.

Без вэбалтывания среда прозрачная.

Запах типичный грибной.

Видоизмененная среда Чапека с крахмалом и вытяжкой иэ солодовых " 5 ростков. Пленка образуется на 6 †сут

753897

Составитель Л. Пашинина

Редактор И. Ахмедова Техред Н,Бабурка Корректор Е Папп

Тираж 522

Заказ 4846/22

Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Х вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,, 4 ки при 40 С Пленка складчатая, толстая, коричневого цвета. Беэ взбалтывания среда прозрачная.

Твердые среды

На сусло-агаре посев штрихом— рост хороший, поверхность белая, плот- 5 ная. На 2 сутки роста поверхность становится коричневатой, а на 5 сутки— темно-коричневой. Вся поверхность культуры очень складчатая, край штриха волнистый. 10

На солодовом arape

Посев уколом — рост на поверхности обильный. По уколу — очень слабый.

Гигантская колония на среде Чапека с различными источниками углерода на

5 сутки роста имеет следующее строение: на глюкозе — колония круглая, складчатая, центр светло-коричневый, приподнятый. Сильное конидиеобраэова- 20 ние в центре. Размер колонии 20-21 мм.

В центре колонии с обратной стороны образуется пигмент коричнево-красного оттенка, на мальтоэе — характеристика юолонии аналогична предыдущей. Размер 25 колонии 23-25 мм; на сахарозе — колония круглая, складчатая, образование конидий слабее, чем на глюкозе и мальтоэе. Центр колонии выпуклый, желтовато-коричневого цвета. Пигмент 30 образует слабо. Размер колонии 17—

19 мм, на крахмале — гигантская колония пушистая, не образует складок, плоская. Образование конидий в центре.

Центральная часть колонии темно-оливкового цвета, с обратной стороны колонии образуется пигмент с коричневато-бордовым оттенком. Размер колонии

24-25 мм. Вокруг колонии наблюдается зона гидролиза крахмала..

Отношение к источникам углерода

Культура гидролизует крахмал, декстрины, паннозу, иэомальтозу, мальтоэу с образованием глюкозы. Потребляет без выделения газа сахарозу, глюкозу, маннит, сорбит. Слабо растет на лактоэе и ксилоэе.

Отношение к источникам азота: хорошо ассимилирует аммонийные соли неорганических кислот. Потребляет пептон, казеин, гидролиэат казеина, аминокислоты. Пептониэирует молоко.

Температурный оптимум роста 40—

42оС, рН 5,5-7,5 аэроб. Не обладает токсическими свойствами.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент СССР 9 355217, кл. С 12 К 1/02, 1972.

2. Авторское свидетельство СССР

Р 488858, кл. С 12 К 3/00, 1974 (прототип).