Способ количественного определения хлорхолинхлорида

 

ф, 3 е,асяс ъсд.. . p,ú, 1

„l

О Й-И С--А Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социалистических

Республик р>767639

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61} Дополнительное к авт. свид-ву (51)М. Кл. (22) Заявлено 14.0678 (21) 2627548/23-04 с присо динением заявки ¹

G 01 и 31/08

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 300980. Бюллетень ¹36

: Дата опубликования описания 300980 (53) УДК 543.544 (088.8) (72) Авторы изобретения

В.П.Тучков, И.К.Блиновский и К.М.Розина

Центральная экспериментально-исследовательская конструкторско-технологическая лаборатория химизации сельского хозяйства (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОРХОЛИНХЛОРИДА

Изобретение относится к области. аналитической химии, а именно, к способам количественного определения хлорхолинхлорида (ХХХ).

- -Известен способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы органическим растворителем, хроматографировании органического слоя и отделении ХХХ с последующей обработкой реактивом Драгендорфа и фотоколориметрирования полученного окрашенного продукта (1 .

Недостатком способа является низкая точность и чувствительность .определения 0,2 мг/кг.

Известеи также наиболее близкий к изобретению по технической сущности и достигаемому результату способ количественного определения хлорхолинхлорида, заключающийся в обработке анализируемой пробы этанолом, упаривании растворителя и пропускания остатка через колонку с окисью алюминия с последующим элюированием хлорхолинхлорида, обработкой элюата дипикриламином спектрофотометрированием окрашенного .раствора l2) .

Недостатком способа являетоя его длительность — 5-6 рабочих дней и

2 низкая точность, не достигается полное отделение хлорхолинхлорида, что приводит к завышению результатов определения. 5 Цель изобретения — сокращение времени и повышение точности определения.

Поставленная цель достигается описываемым способом количественно10 го определения хлорхолинхлорида, заключающимся в обработке анализируемой пробы этанолом, упаривании растворителя и пропускании остатка через колонку с окисью алюминия с элюированием хлорхолинхлорида„ выпаривании элюата, растворении сухого остатка в воде и хроматографировайии в тонком слое катионита с последующей обработкой полученной хромато20 граммы 21-25%-ным раствором сер ной или 3-5В-ным раствором соляной кислоты и последовательной обработке высушенной хроматограммы 10-12в-ным раствором фосфорномолибденовой кис25 лоты и 0,8-1,2%-ным раствором двухлористого олова и просветлении полученной хроматограммы 65-75%-ным раствором иммерсионного масла в гексане или петролейном эфире и спектрофоЯ тометрировании хроматограммы.

7676

Сйосо б осуществляют следующим образом.

Навеску измельченного образца заливают этанолом. Выпаренный до

1-2 мл этанольный экстракт пропускают однократно через колонку с окисью алюминия с последующим элюи рованием хлорхолинхлорида раствором этанола в ацетоне. Полученный элюат выпаривают досуха, а сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды и 0,05 мл с помощью микропипетки наносят на © прозрачную хроматографическую пластийку с тонким слоем катионита.

Через пластинку пропускают восхОдящий ток 23%-ной серной кислоты или

4%-ной соляной кислоты ее обрабаты- 1$ вают 11%-ным водным раствором фосформолибденовой кислоты. Затем пластинку промывают проточной водой в течение 30 мин, обрабатывают 1%-ным водным раствором двухлористого олова, .;щ ополаскивают в водопроводной воде,сушат до воздушно-сухого состояния под; феном, просветляют 70%-ным иммерсионным маслом в гексане или петролей-. ном эфире, измеряют оптическую плотность полученной хроматограммы в проходящем свете при 730 10 нм на спектрофотометре (например, СФ-16) и по калибровочному графику определяют количество хлорхолинхлорида на пластинке и затем в анализируемом образ- 39 це.

Пример. 100 г измельченного образца экстрагируют 300 мл 80%-ным этанола в течение 3 ч. Экстракцию повторяют трижды. Суммарный объем 35. экстракта выпаривают до 1-2 мл на ротационном испарителе и остаток количественно переносят в колонку с окисью алюминия (диаметр 12 мм,высота набивки 250 мл), Через колон- @ ку пропускают 20%-ный этанол в ацетоне со скоростью 2-3 мл/мин. Первые

20 мл элюата отбрасывают,а затем собирают 100 мл элюата, который выпаривают досуха на ротационном испарите= ле. Сухой остаток растворяют в дистил- лированной воде.

На прозрачной пластинке размером

100х70 мм с закрепленным тонким слоем катионита проводят мягким карандашом стартовую линию вдоль одной из меньших сторон и на расстоянии

15 мм от йее. На стартовой линии отмечают зоны нанесения шириной 5 мм и интервалами 10 мм (4 зоны). В намеченные зоны микропипеткой наносят 5$ по 0,05 мм полученного водного раствора сухого остатка в двухкратной повторности (по 2 образца- на"пластйн«-„, ку). -: Несколько хроматографических плас-, О тинок с нанесенными экстрактами ставят ребром, вдоль которого проведена бортовая линия, на дно стеклянно го сосуда, в который предварительно йалит 21%-ный раствор серной кислоты

39 или 3%-ный раствор соляной кислоты слоем 5-8 мм и закрывают крышкой.

После того, как фронт растворителя поднимется на высоту 80 мм от стартовой линии, пластинки вынимают, сушат в течение 1-2 мин под феном и проявляют

Проявление проводят путем опускания в 10%-ный водный раствор фосфорномолибденовой кислоты на 2-3 с, последующего выдерживания на воздухе в течение 1-1,5 мин для стекания избытка реагента, промывки в проточной воде в течение 30 мин, просушку нод феном в течение 2-4 мин, опуска- ния в 0,83-ный водный раствор двухлористого олова (аналогично первой операции), ополаскивания в водопроводной воде и просушки под феном до воздушно-сухого состояния. На светло-голубом фоне проявляются темносиние пятна фосфорномолибденового комплекса хлорхолинхлорида на расстоянии 14-15 мм от стартовой линии и еще выше на 7-8 мм ХХХ,а над ним хлоргидрата триметиламина.

Проявление хроматограммы просветляют 65%-ным иммерсионным маслом в гексане или петролейном эфире и измеряют оптическую плотность участков, содержащих пятна хлорхолинхлорида, Относительно соответствующих участков пластинки под пятнами при длине волны 730+10 нм на спектрофотометре (СФ-16). Полученную величину оптической плотности переводят в количество мкг ХХХ по калибровочному графику, предварительно построенному по результатам фотоколориметрирования хроматограмм стандартных растворов чистогоХМХ.

Град(уировочный (калибровочный) график строят следующим образом.

На аналитических весах взвешивают

1 r хлорхолинхлорида с точностью до

0,01 r. Навеску переносят в мерную колбу на 200 мл и растворяют в 1%-ной соляной кислоте. Объем доводят до метки. С помощью бюретки переносят в 4 мерные колбы на 100 мл соответственно 1, 4, 7 и 10 мл полученного стандартного раствора ХХХ и разбавляют до 100 мл дистиллированной водой.

50 г катионитовой смолы типа

Ку-2-8 разматывают на шаровой мельнице и просеивают через сито с отверстиями 0,1 мм. 40 г измельченной смолы переносят в коническую колбу на

250 мл,заливают 100 мл О, 1 í. NaOH и взбалтывают 1 ч. Затем суспензию переносят на бумажный фильтр в воронке Бюхнера и промывают дистиллированной водой до нейтральной рН. Заваривают 1 г крахмала или .поливинилового спирта в 15-20 мл дистиллированной воды, охлаждают, разбавляют дистиллированной водой до 110 мл; засыпают катионообменную смолу, пере767639 веденную в Ма -форму, и перемешивают.

Полученную однородную массу наносят слоем толщиной 0,20-0,25 мм на стеклянные (1-1,5 ьм) или полистироловые . (0,20 мм) пластинки, предварительно нарезанные размером 70х100 мм и сушат на воздухе 12-14 ч.

На приготовленнйх таким образом тонкослойных катионитовых пластинах поверх катионита параллельно одной из меньших сторон и на расстоянии

15 мм от нее мягким карандашом проводят стартовую линию, на которой размечают зоны нанесения стандартных растворов шириной 5 мм и интервалами 10 мм (4 зоны). С помощью микропипеток на размеченные зоны наносят разбавленные стандартные растворы по 0,01 мл в порядке увеличения концентрации, что составит градацию количества ХХХ по зонам соответственно 0,5:2,0; 3,5 и 5,0 мкг. Нанесение 20 осуществляют путем многократного касания конца микропипетки с катионитом вдоль стартовой линии в границах размеченной зоны, с промежуточным высушиванием под феном. 25

В хроматографическую камеру наливают 23%-ную серную (или 4Ъ-ную соляную) кислоту слоем 5-7 мм и ставят в нее хроматографические пластинки на ребро, вдоль которого нанесен ЗО хлорхолинхлорид. После продвижения фронта раствора кислоты на высоту

80 мм от стартовой линии пластинки вынимают из камеры, обтирают фильтровальной бумагой капли раствора кис- Я лоты и сушат под феном в течение

10-20 с.

Для проявления хроматограмм пластинки опускают на 2/3 высоты в 113ный раствор фосфорномолибденовой кис- 40 лоты, который предварительно готовят в химическом стакане на 400 мл в ко.личестве 300 мл. Выдержав 2-3 с в проявителе, пластинки вынимают, дают стечь избытку раствора и промывают в пяти порциях водопроводной воды по 5 мин и затем 5 мин — в дистиллированной воде. Дают стечь свободной воде, поставив пластинки вертикально на фильтровальную бумагу на 3/4 мин, и обрабатывают 1%-ным раствором 50 двухлористого олова в 103-ной соляной кислоте аналогично первой процедуре. Ополаскивают проявленные пластины в водопроводной воде и сушат под феном до воздушно-сухого 55 состояния, предварительно дав стечь свободной воде.

На светло-голубом фоне образуются темно-синие пятна комплекса хлорхолинхлорида с фосфорномолибденовой кислотой на расстоянии 14-15 мм от стартовой линии (Ry = 0,20 + 0,01) . Другие соли аминов — холинхлорид и хлоргидрат триметиламина не мешают определению (их Rf равны 0,34 0,01 и 0,36+ 0,01 соответственно), а бетаин при этом способе не проявляется. Проявление хроматограммы просветляют посредством мазков мягкой кисточкой, смеченной в 70%-ном иммерсионном масле, не менее, чем за 1 ч до измерения их оптической плотности. Одновременно с этой операцией включают спектрофотометр на прогрев.

Для измерения оптической плотности хроматограмм в держатель плоских твердых образцов (имеющийся в комплек- се спектрофотометров) вставляют диафрагму из тонкого картона, проссшпана, фольги или других непрозрачных мате- риалов, окрашенных в черный цвет.

Содержание хлорхолинхлорида в анализируемом образце вычисляют по формуле

А= — 1

6-Г

5tz где А — содержание хлорхолинхлорида, мг/кг или мг/л;

Б — количество хлорхолинхлорида на хроматограмме, вычисленное по измеренной оптической плотности и коэффициенту пропорциональности, полученного из градуировочного графика, мк г;

 — масса анализируемого образца, r, или объем, например, воды, л;

à — объем раствора сухого остат1 ка элюата, мл;

à — объем раствора, нанесенный.

2 на пластинку, мл.

В таблице приведены результаты определения ХХХ.

По известному споообу не достигается полной очистки хлорхолинхлорида от холинхлорида. Поэтому результаты анализов получаются завышенными вследствие присутствия холинхлорида в. фотометрируемом растворе.

Время определения сокращается до

2-3 суток.

767639

Результаты определений количества хлорхолинхлорида (XXX) в различных образцах по известному и предлагаемому способам

Определено ХХХ, мг/кг

99 Образцы по известному по предлагаемому способу

2,25 + 0,69 1,71 + 0,33 ДополнительТоматы

То же

1,95 + 0,61

1,27 + 0,29 но обнаружеФ

0,74 + 0,21 но содержа1,04 + 0,32

1,64 + 0,55

0,11 + 0,41

4.

0,00 ние холинКартофель

0,00 хлорида (от

То. же

0,9 до

9,8 мг/кг) Формула изобретения

Состав итель Л. Соломенцева

Редактор И.Грузова Техред A.Au Корректор M-Вигула

Эаказ 7185/40 Тираж 1019 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ количес1йеййого определения хлорхолинхлорида путем обработки анализируемой пробы этанолом, упа" ривания растворителя :и пропускания остатка через колонку с окисью алюми ййя""с последующим элюированием хлорхолинхлорида, включающий спектрофотометрирование, отличающийся тем; что, с целью сокращения времени

" — и повышения точности определения, элюат выпаривают, сухой остаток растворяют в воде и хроматографируют в

- тренком -слое катионита с последующей обработкой полученной хроматограммы

21-25Ъ-ным раствором серной кислоты или 3-5%-ным раствором соляной кислоты и последовательной обработкой хроматограммы 10-12Ъ-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты и 0,81,2%-ным раствором двухлористого олова и просветлением полученной хро25 матограммы 65-75%-ным раствором иммер сионного масла в гексане или петролейном эфире и спектрофотометрированием хроматограммы.

Источники информации, 30 принятые во внимание при экспертизе

1. Бляим К. Колориметрический микрометод определения остатков

ССС (хлорхолинхлорида) в зерне гпаеницы.- Прикладная биохимия и микроЯ биология, 1970, Р 1, с. 230.

2. Временные методические указания по применению и зональному производственному использованию препарата тур

О на землянике. МСХ, СССР,1976 (прото:тип) .