Способ определения остатков пенициллина в молоке

 

О П И С A Н И Е (Ä)787986

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советскик

Социалистическик

Республик

Ж

«я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 28.02.79 (21) 2732599/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. К .

G 01 N 33/04

Гасударственный комитет

an делам нзооретений и открытий

Опубликовано 15.12.80. Бюллетень № 46

Дата опубликования описания 25.12.80 (53) УДК 632.95 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. И. Мочалов, Л. Н. Семенова, И. Ю. Кислицына и Л. А. Еремина

Всесоюзный научно-исследовательский институт молочной промышленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТКОВ

ПЕНИЦИЛЛИНА В МОЛОКЕ

Изобретение относится к молочной промышленности и касается нализа молока, в частности способа определения в молоке остатков пенициллина, применяемого при лечении животных.

Известен способ определения пенициллина в молоке, предусматривающий отделение жира в исходной пробе молока, фильтрацию, экстракцию, фильтрацию и очистку экстракта, выпаривание, растворение фильтрата и тонкослойно-хроматографическое определение пенициллина путем нанесения его раствора на пластину, разгонку хроматограмм в смеси растворителей и проявление хроматограмм (1).

Недостаток способа состоит в том, что он длителен, трудоемок и не может быть применен для ежедневных серийных анализов.

Цель изобретения — ускорение процесса и повышение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что в исходной пробе осуществляют осаждение белков молока ацетоном в соотношении 1:2, отделение жира ведут экстракцией его хлороформом и полученный после выпаривания фильтрат растворяют в этиловом спир2 те, а при тонкослойно-хроматографическом определении пенициллина его спиртовой раст вор наносят на силуфоловую пластинку, для разгонки хроматограмм используют смесь растворителей этилацетат-уксусная

5 кислота в соотношении 40:20, при этом проявление хроматограмм осуществляют парами йода.

Предлагаемый способ позволяет определить минимальное количество пенициллина в молоке не ниже 0,5 мг/л. ! о Способ осуществляют следующим образом.

В коническую колбу с притертой пробкой помещают 25 — 50 мл молока и приливают двойной объем ацетона (50 — 100 мл).

Закрыв колбу пробкой, тщательно переме15 шивают содержимое. Спустя 3 — 5 мин отфильтровывают белок через складчатый фильтр в делительную воронку со шлифом.

К фильтрату добавляют 70 мл хлороформа, встряхивают 2 — 3 мин. После разделения

2о слоев нижний слой отбрасывают, а верхний фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу. Фильтрат упаривают на ротационном испарителе при 90 — 95 С. Сухой остаток в колбе растворяют в 5 мл эти787986 лового спирта. Аликвоту из этого раствора наносят на хроматографическую силуфоловую пластинку, помещают ее в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе (этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40: 20). После того, как фронт растворителя достигнет верх5 него края пластинки, ее вынимают из камеры, подсушивают на воздухе при комнатной температуре и проявляют в парах йода. При содержании пенициллина в молоке не ниже

Не обнаружен

Контроль молока

0/4

Обнаружен

0,5

1 0

2,0

5,0 хе при комнатной температуре и проявляют

5р в парах йода.

Пенициллин проявляется на хроматограмме в виде пятен темно-коричневого цвета R < — — 0,83 — 0,85. Сравнивая величину пятна и интенсивность его окраски со стандартными растворами пенициллина, устанавливают концентрацию его в пробе молока, равную 0,5 мг/л.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет ускорить проведение анализа и повысить его точность. ао

Формула изобретения

Способ определения остатков пенициллина в молоке, предусматривающий отделение жира в исходной пробе молока, фильтрацию, экстракцию, фильтрацию и очистку экстракта, выпаривание, растворение фильтрата и тонкослойно-хроматографическое определение пенициллина путем нанесенения

so его раствора на пластинку, разгонку хроматограмм в смеси растворителей и проявление хроматограмм, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения точности определения, в исходной пробе ocyS5 ществляют осаждение белков молока ацетоном в соотношении 1:2, отделение жира ведут экстракцией его хлороформом и полученный после выпаривания фильтрат растворяют в этиловом спирте, а при тонкоКак видно из таблицы, контрольные пробы молока, не содержащие пеницилина не дают на силуфоловых пластинках пятен темно-коричневого цвета.

При содержании выше 0,5 мг/л обнаруживаются четкие темно-коричневые пятна, интенсивность окраски которых возрастает с увеличением концентрации пенициллина.

Пример 1. В коническую колбу емкостью

100 — 150 мл помещают 25 мл исследуемого молока, содержащего 0,5 мг пенициллина, приливают 50 мл ацетона, тщательно перемешивают. Спустя 5 мин полученную смесь фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку емкостью 350 мл, приливают 70 мл хлороформа и встряхивают содержимое воронки 3 мин. Нижний хлороформенный слой сливают, а верхнюю фазу через бумажный фильтр фильтруют в круглодонную колбу емкостью 200 мл со шлифом. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе при 95 С. К сухому остатку приливают 5 мл этилового спирта.

Из полученного спиртового раствора пенициллина 0,01 мл наносят на хроматографическую силуфоловую пластинку. Затем пластинку помещают в камеру для хроматографирования и разгоняют в подвижном растворителе этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40:20. После того, как фронт растворителя достигнет верхнего края пластинки, ее вынимают, подсушивают на возду0,5 мг/л он проявляется на пластинке в виде пятен темно-коричневого цвета.

Способ апробирован в лабораторных условиях путем искусственного загрязнения молока водным раствором пенициллина. В ка.естве контроля используют обычное сырое цельное молоко.

В таблице приведены результаты определения пенициллина в молоке по предлагаемому способу (проведено по три определения для каждого опыта) .

787986

Составитель И. Привалова

Техред А. Бойкас Корректор М. Демчнк

Тн раж. 101 9 Подписное

Редактор Т. Веселова

Заказ 8390/74

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий! 13035, Москва, ж — 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП <Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 слойно-хроматографическом определении пенициллина его спиртовой раствор наносят на силуфоловую пластинку, для разгонки хроматограмм используют смесь растворителей этилацетат-уксусная кислота в соотношении 40: 20, при этом проявление хроматограмм осуществляют парами йода.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Чоп J. Hamann, А. То!!е, А. Bluthgen

und W, Heeschen. Untersuchungen uber Nachweis, Isolierung und Identifizierung чоп Antibiotikaruckstanden in der Milch.-«Milchroissenschaft», 1975, ч. 30, s. I — 7.