Способ получения антитело-иммуносорбента к небелковым антигенам

 

Сотоз Соеетскни

С щналнстнчаскни

Рвспубанк

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВ ЛЬСТВУ

{61) Дополнительное к авт. сеид-ву . (22) Заявлено 230679 (2!) 2633785/28-03

r. присоединением заявки Йо— (23) Приоритет

Опубликовано 070981. Бюллетень И9 33

Дата опубликования описания 070981 иц788472 ») клз

А 61 K 47/40 .) Госуаавстаенямй комитет

ССC9 яо ведам июбретеиий я открмтиб (53) УДК 576,8. .097(088.8) (72) Авторь изобретения

О. Б. Кузовлева, С. В. Шабалина и. : И. В. -Рубцов

f -

1 J

) 1

Научно-исследовательский ордена фруктового Красного знамени институт эпидемиологии н мйкрббмолх гии ( им. почетного академика Н.C . Гамалеи (73) Заявитель (547 cnocos nommHHsr aHmTEm- в унОсОрБент :

K НЕБЕЛКОВЫМ АНТИГЕНАМ

Изобретение относится к области медицины, а именно кммунохимии.

Известен способ получения антитело-иммуносорбента путем иммобилизации препаратов чистых антител, выделенных с помощью антиген-иммуносорбент,св (1).

Однако известный способ не позволяет получить антитело«кммуносорбент к небелковым антигекам.

Целью .изобретения является получение аитктело-кммуносорбента к небелковым антигеиам.

Эта цель достигается тем, что способ получения антитело-кммуносорбента к кебелковым антигвнам осуществляют пу ем смешивания небелкового аитнгеиа с антксывороткой, выпавший в осадок комплекс антиген-антнтело отмывают, дОбавляют к диазоткрованному производному агара, далев смесь инкубируют, комплекс ан унген-антктело расщепляют и полученный актктело-кммуносорбект отмывают, 25 .П р к.м е р 1 (в случае, если сцецифическкй прецкпитат анткгеиантктело растворим при рН 2,0), K 20,0.мл антксыворотки, содержащей 340 мкг/мл антител добавляют

15,0 мг порошка, содержащего 0-колер- ЗО

2 ный аиген, н 15,0 мл фнз. раствора, Это соответствует зоне небольшого избытка антител. Смесь оставляют на

20 мин нри 37 С, а затем — на 24 ч при +4 С, Образовавшийся прецппитат несколько раз отмывают н".большими количествами О, 85%-ным раствором

МаС с - рН 7,0 к суспендируют в борноборатном буфере рН 8,6. Общее количество.белка в преципктате, определенное по методу Лоурк, составляет

4,6 мг. K диазоткрованному и отмытому производному агара добавляют суспензию преципитата и оставляют при рН 8,6 ка 1 ч во льду. После этого рН смеси доводят до 2,0 осторокным добавлейием 0,1 и НС t а через 1015 мин - снова до рН 8,6, Такую процедуру поэторяют через 2 к 24 ч иикубацнн Ннкубацню проводят при +4 С в течение 3 суток. Затем рН смеси доводят до 2,0 и полученный антителоиммуносорбент отиаэают при центрифу» гировании 0,85% раствором йаС t до отсутствия редуцкруксаих сахаров в промывных водах, а затем - до рН 7,0.

Емкость сорбентов определяют известным способом. Элюцию прк этом проводят прк рН 2,0, а о количестве ан-" тигена в элютах судят по количеству

788472

Состав и тель С . Иалюти на

Редактор T. Морозова Техред А, Вабийец Корректор С. Шекмар

Тираж 687 Подписное

Вниипи Государственного комйтета сссР по делам иэобретеннй И отКрытий

113035, Москва, Ж-35, РаУшская наб., д, 4/5

Эакаэ 6772/66 филиал ППП "Патент", г. Ужгород., ул. Проектная, 4 редуцирующих сахаров, которые определяют с помощью антронового реактива.

Емкость равна 80 мг 0-холерного антигена на 1 r сухого веса иммуносорбента.

Н р и м е р 2 (в случае, если специфический преципитат не растворим при р8 2,0) . . укаэанным способом получают преципитат 0-холерного антигена с антителами иэ лощадиной антисыворотки. ©

Содержание белка s преципитате7,76 кг.,К 100 мг диазотированного и отмытого описанным способом производного агара добавляют суспенэию преципитата и оставляют при рН 8,6 на ч во льду. Далее рН смеси меняют, 15 как описано выше, процедуру повторяют через 24 ч. Общее время инкубациитрое суток. Полученный сорбент отмывают 0,853-ным раствором ИаСt, затем инкубируют 18 ч при +4 С в 6 И Щ растворе мочевины,2 раза отмывают тем же раствором и многократно

0,85%-ным раствором NaCE.

Емкость сорбента определяют как указано, с той разницей, что элюцию проводят 0,5 н ИаОН.

Емкость равна 120 мг антигена на

1 г сухого веса сорбента.

Предложенный способ.позволяет получить антитело-июеяуносорбента к небелковым аитигенам.

Формула изобретения

Способ получения антитело-иююуносорбента.к небелковым антигенам, о т л и ч а в шийся тем, что небелковый антиген смешивают с антисывороткой, выпажаий в осадок комплекс антиген-антитело отвевают, добавляют в диаэотированному, производному агара, далее смесь инкубируют, комплекс антиген-антитело расщепляют и полученный антитело-нммуносорбент отмывавт.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Кузовлева О. Б. - Доклады Академии Наук, 203,5,1978, с.1193.