Способ определения содержаниябелка b зерне

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву(22) Заявлено 07.09.79 (21) 2817485/30-15 (51)М. Кл 3

G N 33/02//

А 01 G 7/00 с присоединением заявки ¹

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 150581 Бюллетень Но 18

Дата опубликования описания 150581 (53) УДК 612. 398

:543.062(088.8) (72) Авторы изобретения

A.Ï. Левицкий и В.Б. Погорлецкая

1 р

Ф

Всесоюзный ордена Ленина и ордена Трудо

Красного Знамени селекционно-генетическ институт (71) Заявитель (54) спОсОБ ОпРеделения сОдеР хАния

БЕЛКА В ЗЕРНЕ

Изобретение относится к селекции сельскохозяйственных культур на повышение содержания белка, а также к аналитической химии.

Известен способ определения белка в зерне, основанный на реакции Кьельдаля (1) .

Недостатком этого метода является его громоздкость и неточность определения, так как по этому методу определяют сумму всех азотсодержащих веществ зерна, среди которых на долю белков приходится 70-90%.

Известен также способ определения белка в зерне, основанный на об- 15 разовании окрашенного комплекса ионов меди и пептидных связей в молекуле белка, при котором экстрагирование белка проводят спирто-щелочным раствором с последующим колори- 20 метрированием при введении в раствор биуретового реактива (2).

Однако необходимость предварительного экстрагировапия белка, длительность определения и частые помутнения25 раствора делают невозможной фотометрию.

Цель изобретения — повышение точности анализа, упрощение процесса и сокращение времени определения. 30

Поставленная цель достигается тем, что экстрагирование белка проводят в присутствии биуретового реактива, при этом в качестве экстрагента используют нэопропиловый спирт, к которому добавляют биуретовый реактив в равном объеме. Причем используют биуретовый реактив следующего состава, г/л:

Сегнетова соль 8-9

Медный купорос 4-5

Иодистый калий 4-5

О, 2 М раствор едкого натра До 1 л

Соотношение биуретового реактива и изопропилового спирта 1 1 оптимально, так как все другие соотношения реактивов приводят к образованию трудноустранимой мути.

Максимальное извлечение белка и максимальная интенсивность окраски раствора наблюдается спустя

20-30 мин после смешивания растительного материала с биуретовой смесью.

Реакция мало зависит от механического встряхивания и температуры окружающей среды в пределах 20-30 С.

Оптимальными условиями являются продолжительность экстракцнн 30 мин с

830239 последующим центрифугированием в течение 15 мин при 3000д.

Расчет концентрации белка производят по стандарту, которым является суммарный белок, выделенный из муки зерна соответствующих культур (пшеница, ячмень, рожь и т.д.) .

Концентрация белка в зерне рассчитывается по следующей формуле с* ст

Еоз С К

Еее» где С вЂ” «онцентрацнн белка н зерне, вес.%, Е и Š— экстинкции биуретовых раст»

ОЕЕ CW воров соответственно для опыта и стандарта при 545 нм;

С вЂ” навеска белка стандарта, 15 мг (обычно 5 мг), К вЂ” коэффициент содержания белка в препарате белка стандарта (обычно 80-89%), m — - навеска муки, мг.

Культура Сорт Экстинкция Еср Белок, %

0,299 0,302 13,96

0,305

Пшеница

Накат

О;258 11,97

0,261

0,256

0,154

Саратов ская-23

0,155

7,17

Ячмень

Эльгина

0,156

Черноморец 0,192

0,199

0,195

9,07

0,128

О, 132

6,12

Краснодарская-303

Кукуруза реактива, при этом в качестве экстрагента используют изопропиловый спирт, к которому добавляют биуретовый реактив в равном объеме.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а ю45 шийся тем, чго используют биуретовый реактив следующего состава, r/ëã

Сегнетова соль 8-9

Медный купорос 4-5

Иодистый калий 4-5

0,2 M раствор цкого натра До1л

Формула изобретения

ВНИИПИ Заказ 3348/55 Тираж 907 Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул.Проектная,4

»

Преимуществами предложенного спосо6а определения содержания белка в зерне являются простота определения, небольшой расход реактивов, возможность определения содержания белка в одном зерне или даже в части его и большая производительность.

1. Способ определения содержания белка в зерне, включающий экстрагирование, добавление биуретового реактива, центрифугирование и фотоколориметрирование экстракта, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности анализа, упрощения процесса и сокращения времени определения, экстрагирование белка проводят в присутствии биуретового

Пример. Навески муки тонкого помола (20-40 мг) различных сортов зерна помещают в сухие центрифужные пробирки. Прибавляют

2,5 мл смеси 1:1 биуретового реактива и изопропилового спирта. Тщательно перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем центрифугируют при 3000 g в течение

15 мин и измеряют экстинкцию надосадочной жидкости при

545 нм на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре. Одновременно в тех же условиях определяют экстинкцию стандартного белка.

Содержание белка в различных сортах злаковых культур при определении биуретовым методом представлено в таблице.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Бэйли Дж. Методы химии белков.

M., "Мир", 1965, с. 271.

2, Авторское свидетельство СССР

9 450558, кл. A 01 G 7/00, 1973 (прототип).