Способ получения лактогенногогормона

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (iii833256

Союз Соввтеимк

Соцмеюктмчвскмз

Рвенубва (61) Дополнительное к авт. свид-ву—

I (22) Заявлено 17.07.79 (21) 281402!/28-13 (5l) M. Кл с присоединением заявки №вЂ”

А 61 К 37/32 йеудзратаазнмЯ каантат

СССР ае дезам юабратааай я етармтзЯ (23) Приоритет —, (53) УДК 615.45. .615.2 (088.8) Опубликовано 30;05.81. Бюллетень ¹ 20

Дата опубликования описания 31.05.81

Ф. Ю. Рынгна, Л. В. Нагорная, С. А. Ланге, В. В. Кнвилшене и А. П. Жемайтите ; - -. -: " - .Я г е

Всесоюзный научно-исследовательский институгтехнолгогии . кровезаменителей и гормональных препаратов (72) Авторы изобретения (7l ) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛАКТОГЕННОГО ГОРМОНА

Изобретение относится к химико-фар. мацевтнческой промышленности н касается получения лекарственных средств, которые могут быть применены в медицинскрй прак тике для стимуляции лактации. у рожениц страдающих гнпогалактией.

Известен способ получения лактогенного гормона путем растворения ацетонированного порошка из гипофизов крупного .рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диализом против ацетатного буфера и центрифугированием (1).

Однако известный способ длителен (12—

14сут), трудоемок (более 30 операций) и обеспечивает недостаточно высокий выход

:лактогенного гормона (1500 — 3000 ед/кг) с активностью в 10 раз ниже, чем исходный гормон.

Цель изобретения — повышение активности, увеличение выхода целевого продукта и упрощение процесса.

Указанная цель достигается тем, что лактогенный гормон получают путем растворения ацетоннрованного порошка нз гипофи2 зов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последукнцим диализом против ацетатного буфера и центрифугированием, при этом осадок после высаливания растворяют в воде при рН 8,0 — 8,2, диализуют против фосфатного буфера с рН 7,1 — 7,3, надосадочную жидкость фильтруют через кизельгур и затем диализуют . против ацет0 татно!о буфера с рН 5,1 — 5,3.

Способ осуществляют следующим образам.

Осадок (высол) сырца лактогенного гор мона (ЛТГ) растворяют в воде при рН

8,0 — 8,2, а нерастворимую часть отделяют центрифугированием. Раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против

0,4 — 0,7 моля рного фосфатного буфера с рН 7,1 — 7,3 до полного отделения балластных веществ (10 — 40ч). Выпавший осадок, отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура (0,5 — 2см).

Прозрачный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против

833256

Формули изобретения

3

0,05 — 0,2 молярного ацетатного буфера с рН 5,1 — 5,3 в течение 18 — 24 ч. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, раст. воряют в воде, доводят значение рН до 8 и лиофилизуют. Выход лактогенного гормо-на !5000 — 20000ЕД из 1 кг передних долей гипофизав крупного рогатого скота, Актив йость гормона 15 — 20ЕД/мг, При электрофорезе s полиакриламидном геле обнаруживаются 3 основные полосы, характерные для ЛТГ.

Пример (. Берут 50г кислого ацетоннрованного порошка, полученного из 4 кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 2 л 0,1 н раствора уксусной кислоты и к раствору при перемешиванни добавляют 130 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Осадку дают сформироваться в течение 2 ч при 5 С, затем центрифугируют. Надосадочную жидкость используют для получения кортикотролнна, а осадок растворяют в воде при рН 8,0.

Полученный раствор заливают в целлофановые мешки и диализуют в течение 24 ч против 10л 0,0!5М фосфатного буфера, содержащего 0,5 моля хлористого натрия, рН буфера 7,3. Образовавшийся в процессе дналиэа осадок отделяют центрифугированием, надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура толщиной 2см. до получения нуозрачного раствора..Полученный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против 0,1М натрийацстатного буфера с рН 5,3 в течение 18ч при 5 С, Выпавший в прецесее диализа оса-. док ЛТГ . отделяют цеитрифугнроваяием, растворяют в воде рН 80 и лиофилизуют.

Вес порошка 3,2 г при активности 20,5 ЕД/мг ((ример 2. Действуя аналогично примеру.

i, осадок растворяет в воде при рН 8,2 а полученный раствор помешают в целлофановые мешки и диализуют против фосфатного буфера.с рН 7,1. Образовавшийся ocalot отделяют, а надосадочную жидкость фильтруют через слой кизельгура толщиной

0,5 см. Процесс фильтрации повторяют до получения прозрачного раствора. . Полученный таким образом раствор помещают в целлофановые мешин и дяализуют против ацетатиого буфера с рй 5,1 в течение

24ч при 2 С. Образовавшийся осадок ЛТГ, отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат в вакуум-сушильном шкафу лри,температуре не выше 45 C. Вес порошка 5,5г при активности !6,0 ЕД/мг. (7ример 3. 100 г кислого ацетонированно.го порошка, полученного из 5кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота, растворяют в 5 л дистиллированной воды и 2 и раствором соляной кислоты. рН в растворе доводят до 2,8 — 3,0. К раствору лри перемешивании добавляют 325 мл насы1ценного раствора хлористого натрия н отстаивают при температуре 2 — 8 в течет пне 3 — 4 ч.

Выпавший осадок отделяют центрифугированием и вновь растворяют в 2,5л воды, доводя значение рН до 2,0 — 2,5. Нерастворимую часть отделяют центрифугированием, а к надосадочной жидкости добавляют 160 мл насыщенного раствора хлористого натрия. Через 1 — 2 ч осадок собирают центрифугированием, суспендируют в воде и значение рН доводят до 7,5 — 8,5. Объем полученного раствора 1 л. Его заливают двойные целлофановые мешки и диализуют против 8л фосфатного буфера с рН

6,4 — 6,8 в течение 36 ч. Выпавший после. диализа осадок отделяют центрифугированием и отбрасывают, а надосадочную жидкость помещают в двойные целлофановые мешки и диализуют против 8 л ацетатного буфера с рН 5,4 — 5,8 в течение 36ч.

8ыпавшнй после диалиэа осадок отделяют центрифуги рова пнем, суспенднруют в

500 мл воды, значение рН доводят до 3,0 добавлением соляной кислоты: Туда же до40 бавляют 33мл насыщенного раствора хлористого натрия. Выпавший осадок лактогенного гормона вновь растворяют в дистиллированной воде лри рН 7,5 — 8,5, а полученный раствор помещают в целлофановые мешки и диализуют против фосфатного буфера в течение 24 ч. Осадок отделяют центрифугнрованием, а надосадочную жидкость

6омещают в целлофановые мешки и диализувг против ацетатного буфера в течение 24 ч.

Образовавшийся осадок лактогенного гормона отделяют центрифугированием, промывают ацетоном и сушат до полного удаления ацетона.

Вес сухого порошка лактогенного гормона 9,2 г, а его биологическая активность

0,8 ЕД/мг. Ьыход из I кг передних долей гипофизов крупного рогатого скота составляет 1472 ЕД.

Предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет повысить удельную активность ЛТГ с 0,5 — -1,0 ЕД/м до 15—

20 ЕД/мг и качество за счет исключения, примесей балластных белкоВ, что резко повышает. эффективность препарата при его медицинском применении, увеличить выход с 1500 — 3000 ЕД/кг до 15000 — 20000 ЕД/кг, а также упростить техыологнческий процесс

4s за счет сокращения числа операций с 30 до 15, что в 3 — 4 раза сокращает продолжительность процесса.

Способ получения лактогенного гормона путем растворения ацетонированного порошка нз гипофизов крупного рогатого скота в подкисленной воде, осаждения сырца гормона хлористым натрием, растворения осадка в воде, диализом полученного раствора против фосфатного буфера с последующим диалиэом против ацетатного буфера и цент833256

Составитель С. Малютина

Техред А. Бойкас Корректор С. Цомак

Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открмтнй

I l3035, Москва, Ж вЂ” Зб, Раушская наб., д. 45

Филиал ППП «Патент», г. Умгород, ул. Проектная, 4

Редактор E. Кинив

Закаэ Зот5/4 рифугированием, отличающийся тем, что, с целью повышения активности, увеличения в жода целевого продукта и упрощения процесса, осадок после высвливаиия растворяют в воде при рН 8;6 — 8;2 днализуют про. тив ацетатного буфера с рН 7,l — 7,3, надосадочную жидкость фильтруют через княл в гур и затем диализуют против ацетатного буфера с рН 5,1 — 5,3.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

l. Справочник по производству органов препаратов. Под ред. Турова В, А. и др.

М., «Медицина», l970, с. 59.