Способ определения липидного сос-taba биологических жидкостей

 

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ЕТЕЛЬСТВУ

tn)840740 :ф,i- lgji" г (61) Дополнительное к авт. свид-вуР 526824 р )м. к,. (22) Заявлено 300779 (21) 2813832/28-13 с присоединением заявки ¹

G 01 Н 33/92

Государственный комитет

СССР по делам изобретений открытий (23) Приоритет

Опубликовано2 306.81. Бюллетень № 2 3 (53) УДК 612.015. .32(088.8) Дата опубликоваиия описания 230681 сударс

Рд а институт им. Н.И. Пирогова (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИПИДНОГО СОСТАВА

БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической биохимии.

По основному авт. св. Р 526824 известен способ определения липидного состава биологических жидкостей путем экстракции жира хлороформ-метаноловой смесью, разделения экстракта хроматографически на закрепленном тонком слое и определения количественного состава липидов на денситометре.или фотометрически P1) .

Однако этот способ не обеспечивает высокой точности.

Цель изобретения — повышение точ- 15 ности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения липидного состава биологических жидкостей исследуемую кровь предварительно 20 перед экстракцией смешивают с 5Ъ-ным раствором лимоннокислого натрия в соотношении 4:1.

П р и м е-р 1. 0,1 мл капиллярной крови (микропипетки перед забором 25 крови ополаскивают лимоннокислым нат-. рием) смешивают в обыкновенной.пробирке с 0,025 мл 5В-ного раствора лимоннокислого натрия трехзамещенного, прибавляют 10 мл экстрагирующей сме- 30

М.си (хлороформ с метанолом 2:1), пробирку помещают на 10 мнн в водяную баню при 40-45ОС. Затем смесь фильтруют через бумажный обезжиренный .фильтр, добавляют 2 мл 0,74%-ного раствора хлористого калия, сильно встряхивают и оставляют до следующего дня при комнатной температуре.Образуется 2 слоя: верхний — водный и нижний — хлороформенный. Верхний слой удаляют, а нижний переносят в пальчик, смешивают с 0,5 мл метанола и выпаривают досуха в водяной бане при 4045ОС под вакуумом с водоструйным насосом.

Полученный липидный экстракт в тот же день наносят на хромотографическую пластину, которую приготавливают следующим образом. В стаканчике Хагидорна смешивают 4 г силикагеля Н по 600 мг гипса медицинского, 13 мл воды и 2 мл закрепителя, например 2%-ного раствора крахмала (берут крахмал особой чистоты), смесь наносят ровным слоем на стеклянную пластину 13х18 и оставляют при комнатной температуре до следующего дня, затем активируют тридцать минут при температуре 90-95 С.

После охлаждения на воздухе пластина готова к работе.

840740

Показатели, моль л

Известный

0,2 1,6 + 0,05 0,55+ 0,035 0,6+ 0,04 3,1+ 0,15 0,8+ 0,04 0,5+ 0,02

Предлагаемый

0,1 1,5 + 0,045 0,52 0,031 0,6+ 0,04 3,0 é 0,13 0,86+0,041 0,53+0,023

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор О. Малец Техред И. Асталош Корректор Г. Решетник

Заказ 4752/64 .Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

За 1-2.ч до начала хромотографии в банки наливают систему растворителей для разделения липидов в одной (гексан, эфир, ледяная уксусная кислота в соотношении 80:20:1,5) и фосфолипидов в другой (хлороформ,.метанол, вода в соотношении 65:25:4).Высота жидкости в банке не должна пре, вышать 0,5-0,7 см.

Липидный экстракт из цитратной крови растворяют в 0,2 мл гексана и по

0,05 наносят на пластины, отступая 1,5-2 см от нижнего и боковых краев. Интервалы между пробами 2 см;

Из одной и той же пробы экстракт наносят на 2 пластины: для разделения липидов на одной и фосфолипидов на 15 другой. После .нанесения проб пластины помещают в банки с системой растворителей.

Высота подъема растворителей по . адсорбенту 10.см. 20

Время хромотографирования липидов 20-25 мин, фосфалипидов 40-45 мин.

По окончании хромотографирования пластины подсушивают при комнатной температуре .под вытяжкой до полного испарения с адсорбента растворителя и опрыскивают 2%-ным спиртовым раствором фосфорномолибденовой кислоты по 5 мл красителя на одну пластину. Затем пластины помещают в сушильный шкаф на 10 мин при 90-95 С о для проявления окраски.

Предлагаемый способ позволяет в 2-3 раза повысить точность исследований, уменьшить в 2 раза объем анализируемой крови. 50

Способ определения липидного сос- 55 тава биологических жидкостей по

После охлаждения проводят количественный анализ липидов путем прямой денситометрии или злюирования краски из пятен с последующей фотометрией окрашенных элюатов.

П р и.м е р 2. В начале используют цитратную кровь для постановки

РОЭ, а потом в этой же крови определяют липидный и фосфолипидный спектры.

Для этого капиллярную пипетку на

РОЭ промывают лимоннокислым натрием, затем набирают этот раствор до метки

Р и выдувают его в видалевскую пробирку. Тем же капилляром берут из пальца обследуемого 2 раза кровь до метки Р, смешивают с лимоннокислым натрием в соотношении 4:1. Набирают в капилляр эту смесь до метки 0 и определяют РОЭ.

По окончании определения РОЭ из капилляра выдувают содержимое обратно в видалевскую пробирку, берут отсюда 0,125 мл лимоннокислой крови (соответствует 0,1 мл Цельной крови) определяют в .ней липидный и фосфолипидный состав по примеру 1, т.е. к

0,125 мл цитратной крови прибавляют

10 мл экстрагирующей метанол-этаноловой смеси и далее по примеру 1.

Сравнительные показатели способов количественного анализа липидов крови представлены в таблице. авт. св. Р 526824, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемую кровь перед экстракцией смешивают с

5%-ным раствором лимоннокислого натрия .в соотношении 4:1.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

9 526824, кл. G 01 М 33/16,07.05.79.