Способ разделения смеси ксантозина и гуанозина

 

ОП ИСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Н АВ!ОРСКОМУ СВИДЕ7ЕЛЪСТВУ

Союз Советских

<»> 878769 Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 30.08.79 (21) 2813400/23-04 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.11.81. Бюллетень № 41 (51) М.Кл.з С 07 Н 19/16

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий (53) УДК 547.455.07 (088.8) (45) Дата опубликования описания 07.11.81

И. Я. Штернберга и У. Я. Микстайс . (72) Авторы изобр етевия (71) Заявитель (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ СМЕСИ

КСАНТОЗИНА И ГУАНОЗИНА

Изобретение относится к способу разделения смеси нуклеозидов, а именно ксана озина и гуанози на, которые, используют в биохимических исследованиях. Кса нтозин получают дезаминпрованием гуанозина и г рп,неполном дезаминировании необходимо разделение смеси .ксантозина и гуанозина.

Известен способ селективного разделения смеси ксантозина и гуа нозина с применением ионообменной хроматографии fl).

Такой способ заключается в следующем.

Смесь ксантозина .и гуанозина в,водном растворе после установления,рН 6,0 — 8,5 пропускают через сильно основной анионит в форме соли. Колонку промывают водой и получают гуа нозин с содержанием основного вещества 96,7% (выход,гуанозина

90,88%). Затем ионообменный материал элюируют lн. соля|ной кислотой и получают

94 г ксантозина с содержанием основного вещества 95% (выход кса нтоз и на 89,3%) .

Известный способ о беспечивает разделеawe ксантозина и гуанозтсна с помощью сорбции ксантозина на сильно основном анионите, но он трудоемок,:TBK как требуются приготовление,:регенерация,ионообмен ного материала |и упаривание элюатов.

Недостатками этого способа также являются сравнительно невысокий выход (выход,ксантози на 89,3%, гуанози на 90,88%) и сравнительно низкая степень чистоты целевых продуктов (ксантозина 95%, гуанозжна 96,7%).

Целью изобретения является повьвшение выхода и степенями чистоты целевых продуктов и упрощение процесса, разделения компонентов.

Цель до стигается тем, что при осущест10 влении способа разделения смеси ксантозина и,гуа нозина,,находящихся в водяной среде, исходную смесь подкисляют до рН

0,6 — 1,0 и перемешивают в течение 30—

35 мин при 15 — 25 С до полного растворе15 ния гуанозина, затем отделяют ксантозин, находящийся в осадке, .и доведением рН до

3,0 — 6,0 осаждают дигидрат гуанозина, который извеспным опособом превращают в гуано.зин.

20 Гуанозин и ксантозин в холодной воде практически |не растворяются, а в процессе кристаллизации, когда растворение проводят при повышенной температуре, осаждаются совместно. Разделение смеси дости25 гается использованием отличающейся растворимости различных форм нуклеозидов.

Отличающиеся значения рК, для гуанозина (1,6 — 1,8) .и кса1нтознна (— О) позволяют установить рН среды 0,6 —.1,0, при котором

30 весь гуанозин практически будет образовы878769 вать протонированную, более растворимую форму и даже лри комнатной темлерату ре может перейти в раствор. Ксантозин в таких условиях остается в осадке и может быть отделен фильтрованием от растворившегося,гуанозина. После отделения ксантозина к раствору добавляют раствор щелочи и устанавливают рН в .пределе, при котором гуанози н образует нейтральную мало растворимую .в воде форму, а именно рН

3,0 — 6,0. При таком значении рН количест.венно отделяют гуа нозин от,маточника. Оба нуклеозида предлагаемым способом получают хроматографичесии чмстыми без дополни тельной перекри "таллиза ции.

Разделение проводят в,две стадии: 1 стадия — выделение хроматографичвски чистого ксантозина; П стадия — выделение хроматографически чистого гуа нозина.

Фракцио нированное осаждение исантозина и,гуанозина обеспечивает .высокий выход и чистоту целевых лродуктов.

Пример 1. 2 г .ксантозина и 0,44 г гуанозина суспендируют B 40 мл дистиллированной воды, устанавливают .рН 0,8 1н. соляной,кислотой при 20 С,и перемешивают в течение 30 мин. Отфильтровывают осадок, промывают соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные растзоры не присоединяют к фильтрату. Получают 1,9 г (94%) хроматографически чистого ксантозина, содержание основного вещества 99%

1н. раствором гидроокиси натрия устаHBlBJIHBBIoT рН фильтрата 6,0 и осаждают дигидрат гуанозина. Получают 0,45 r последнего. Дигидрат гуанози на превращают .з гуанозин нагреванием в течение 3 ч при

60 С. Получают 0,4 г гуанозина, выхо.

90%. Содержание основного. вещества 100%.

П р и.м е р 2. 1,5,г ксантоэина и 0,53 r гуанозина суспендируют в 50 мл дистиллированной воды, устана вливают рН 1,0 1 н. соляной кислотой при 15 С и перемешивают,в течение 30 мин. Отфильтровывают

ысантозин, промывают соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные волы к фильтрату не присоединяют. Получают 1,44 г (95%) хромаготрафи чески чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.

1 .н. раствором,гидроокиси натрия устанавливают рН фильтрата 3,0 и осаждают дигидрат гуанозина. Получают 0,55,г лоследнего. Дигидрат гуанозина превращают в гуанозин нагреванием в течение 3 ч при

60 С. Получают 0,48 г (91%) хроматографически чистого гуанозина. Содержание основного вещества 100 .

П р.и м е р 3. 4,0 г исантозина и 1,0 г гуанозина суспендируют в .100 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 0,6 1:н. соляной кислотой при 28 С и леремешивают в течение 30 иин. Отфильтровывают ксантозин, промывают ла фильтре разбав10

20 о

Зо

65 ленной соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные рас DBopbI не присоединяют к фильтрагу. Получают 3,80,г (96%) хроматографически чистого кса нтозина. Содержание основного вещества 99%.

1 н. раствором гидроокиси натрия устанавливают рН фильтрата 4,5 и осаждают дигидрат гуанозина. Осадок промывают на фильтре водой и этиловым спиртом. Получают 1,03 r хроматографически чистого дигидрата гуанозина. Последний, превращают в гуанозин нагрева|нием в течение 3 ч при

60" С. Получают 0,9 r хроматограф ически чистого гуапозина. Выход 91%. Содержа,н(ие осноьцого вещества 1009%.

П р им е р 4. Смесь 1 г ксантозина и 3 г гуапозина суспендируют з 150 мл ., сгн iлированной воды, устанавливают рН 1,0

;при 20 С и перемешивают в течение 30 мин.

Затем фильтруют, промывают разбавленной соляной кислотой (рН 1,0), водой, этиловым спиртом. Промывные растворы к фильтрату не присоединяют. Получают

0,79 г (78%) хроматографически чистого кса нтозина. Содержание основното .вещества 99о о

Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отфильтровывают гуанози н, Получают 3,09 г (91% ) хроматографически чистого дигидрата гуа нозика. Содержание основного вещества 100%.

Пр и м е р 5. Смесь 2,0 г ксантозина и

1,0 r гуанозина суспендируют в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают рН

0,6 лри 20 С и яеремешивают в течение

35 мин, затем фильтруют, осадок,промывают разбавленной соляной кислотой (рН

1,0), водой, этиловым спиртом. Промывные растворы к ф ильтрату не присоединяют.

Получают 1,86 г (94%) хромагографически чистого,ксантозина. Содержание основного вещества 99%.

Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отделяют гуанозвн. Получают 1,02 г (90,5%) хроматогра фически чистого дигидрата гуанозина, Содержан ие основного вещества

100%.

П р,и м е р 6. Смесь 10 г ксантозина и

1 г гуанозина суспендируют в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают разбавленной соляной кислотой рН 10 при

18 С и перемешивают в течение 30 мин., затем фильтруют, промывают разбавленной соляной кислотой, водой, этиловым спиртом. Промывные воды к фильтрату,не добавляют. Получают 9,6 г (95%) хроматограф ически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99 jp.

Устанавливают рН фильтрата 3,0 и отделяют гуанозин. Получают 1,01 г (90% ) хроматографически частого дигидрата гуанозина. Содержание основного вещества

100%0.

878769

Формула изобретения

Составитель Г. Коннова

Техред А. Камышникова

Корректор И. Осиповская

Редактор 3. Бородкина

Заказ 1752/1291 Изд. № 639 Тираж 419 Подписное

НПО «Поиск» Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»

1. Способ разделения смеси ксантозина и гуанозина, находящихся в водной среде, отл и ч а ю щи йс я тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта,и упрощения процесса, исходную смесь подкисляют до рН 0,6 — 1,0 и перемешивают в течение 30 — 35 мин при 15 — 25 С, затем отделяют ксантозин, находящийся в осадке, и доведением рН раствора до 3,0—

6,0 осаждают дигидрат гуанозина, который лревращают в гуанозин.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Патент Японии № 73/21960, кл. 16 Е 33, опублик. 1973 (прототип).