Способ дифференцирования микробов чумы крысиной,песчаночной, сурчиной и суслиной разновидностей от полевочьей разновидности и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ МИКРОБОВ ЧУМЫ КРЫСИНОЙ, ПЕСЧАНОЧНОЙ., СУРЧИНОЙ И СУСЛИНОЙ РАЗНОВВДНОСТЕЙ ОТ ПОЖВОЧЬЕЙ РАЗНОВИДНОСТИ и ВОЗБУДИТЕЛЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА ГРЫЗУНОВ . . путем посева исследуемого материала на питательную среду с последующей дифференциацией по биохимическим тестам, отличающийся тем, что, с целью упрбщения способа, из вьгросшей культуры готовят суспензию , добавляют к ней раствор формалина до концентрации 0,002-0.,004% или формальдегида до 0,0008-0,0016% и при наличии формальдегида дифференцируют полевочью разновидность чумного микроба и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов, а при отсутствии окисления - крысиную, песчаночную , .сурчиную и суслиную разновидность -микроба.

..Я13„„895088

С 12 Ы 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ДИТЕЛЯ ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА ГРЫЗУНОВ . путем посева исследуемого материала на питательную среду с последующей дифференциацией по биохимическим тестам, отличающийся тем, что, с целью упрбщения способа, из выросшей культуры готовят суспензию, добавляют к ней раствор формалина до концентрации 0,002-0,004Х или формальдегида до 0,0008-0,0016Х и при наличии формальдегида дифференцируют полевочью разновидность чумного микроба и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов, а при отсутствии окисления — крысиную песчаночУ O ную,,сурчиную и суслиную разновид- Е ность чумного микроба. (21) 29 1 1 661/28-13 (22) 34. 04. 80 (46) 35. 32.84; Бюл. 9 46 (75) А.К. Адамов, С.А. Коровкин и А.В, Наумов (53) 6 616-07 (088. 8) (56) 3. Леви N.H. Классификация разновидностей возбудителя чумы.

"Тезисы докладов научной конференции по природной очаговости чумы и туляремии", Ростов-на-Дону, 1962,.

c. .72-74. (54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЯ

МИКРОБОВ ЧУМЫ КРЫСИНОЙ, ПЕСЧАНОЧНОЙ,, СУРЧИНОЙ И СУСЛИНОй РАЗНОВИДНОСТЕЙ

ОТ ПОЛЕВОЧЬЕЙ РАЗНОВИДНОСТИ И ВОЗБУС:

CO

Ю

Ю

1 8950

Изобретение относится к области медицинской микробиологчи и может быть использовано при микробиологичес кой диаг нос тике чумы.

Известен способ дифференцирова5 ния микробов чумы крысиной, несчаночной,. сурчиной и суслиной разновидностей от полевочьей разновидности и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов путем посева исследуемого мате- 10 риала на питательную среду с последую-" щей дифференциацией по биохимическим тестам(1 1, Однако известный способ сложен и трудоемок.

Целью изобретения является упрощение способа.

Эта цель достигается тем, что способ дифференцирования микробов чумы крысиной, песчаночной, сурчиной

2Î и суслиной разновидностей от голе— вочьей разновидности и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов осуществляют путем посева исследуемого материала на питательную среду. с после- 25 дующей дифференциацией по биологическим тестам, из выросшей культуры готовят суспензию, добавляют к ней раствор формалина до концентрации 0,002-0,004Х или формальдегида до

0,0008 0,00167 и при наличии ока ле ния формальдегида дифференцнруют как полевочью разновидность чумного микроба и возбудителя псевдотуберкулеза грызунов, а при отсутствии окисления — крысиную, песчаночную, 35 сурчиную и суслиную разновидности чумного микроба.

Способ осуществляют следуииим образом.

Для постановки реакции готовят фуксинсернистую кислоту. Перед постановкой теста раствор фуксинсернистой кислоты проверяют на чувствительность его к формальдегиду. Для этого делают разведения коммерческого фор- "5 малина от 0,0017 до 0,01Х в 3 мл дистиллированной воды. Затем в пробирки добавляют по 1 ж фуксинсернистой кислоты и через 20 мин отмечают максимальное разведение формалина в котором происходит четкая реакция °

Рабочей является концентрация формалина на 0,001% больше той концентрации, которая вызывает яркое 55 окрашивание. Например, если вновь приготовленный раствор фуксинсерьптстой кислоты дает четкую специфичес88 2 кую реакцию с концентрацией формалина

0„0027, то рабочей является концентрация формалина в реакционной смеси, равная 0,0037. А основной рабочий раствор формалина равен 0,03Х. Основной рабочий раствор формалина готовят каждый раз перед постановкой новой реакции.

На первом этапе при дифференцировании выделенной культуры изучают признаки, характерные для возбудителей чумы и псевдотуберкулеэа грызунов.

Затем исследуемую культуру выращивают на агаре Хоттингера РН 7,07,2 в течение 24-36 ч при 28 С. Иэ культуры готовят 2 млрд. бактериальную суспензию в 0,857-ном растворе хлористого натрия РН 7,0-7,2 которую разливают по 2,7 мл в 3 пробирки.

Всего для проведения дифференцирования требуется 3 опытные пробирки э в которых через 3,6-24 ч инкубации определяют наличие формалина и на. каждое определение три контрольные смеси, т. е. девять к онтрольных пробирок . Контролями служат пробирки со следующими смесями:

Контроль культуры — три пробирки с 2-7 мл 2 млрд бактериальной взвесью исследуемой культуры.

Контроль формалина — 3 пробирки с 2,7 мл 0,857-ного раствора хлористого натрия рН 7,0-7,2, Контроль физиологического раствора — 3 пробирки с 3 мл 0,857-ного раствора хлористого натрия рН 7,0-7,2.

После приготовления перечисленных растворов и смесей в опытные пробирки с исследуемой культурой и в пробирки для контроля формалина (контроль 2) вносят по 0,3 мл основного рабочего раствора формалина. В пробирки с контролем культуры (контроль 1) добавляют по 0,3 мп 0,85Х-нога раствора хлористого натрия РН 7,07,2. Б пробирки с контролем физиологического раствора (контроль 2) ничего не добавляют.

Реакционную смесь в пробирках тщательно перемешивают и помещают в термостат при 37 С.

Через 3 ч из термостата извлекают одну пробирку с исследуемой культурой и по одной пробирке каждого контроля (контроль культуры, формалина и физиологического контроля).

Во все пробирки добавляют по 1 мп фуксинсернистой кислоты. Содержимое

895088

Окисление формальдегида различными видами и разновидностями микробов

Способность окислять

Формальдепид

Количество штаммов

Микроорганизмы

99 п/п

Jersinia резЯз разновидности: крысиная

1!

II

II . Окисляет

Не акисляет суслиная песчаночная сурчиная полевочья .

52

Jers inia pseudo tubercu los is

f82

Jersinia entегоcolitica

Escherichia coli и

13

Условия опытов: опытные пробы в объеме 3 мл 0,85Х-ного раствора хлористо@о натрия рН 7,0-7,2 содержат О,ООЗЖ-ного формалина и 2 мпрд. микробных тел в 1 мп. Инкубацию проводят при 37 С. Опыты с каждым микроорганизмом повторяют не менее 3 раз.

ВНПИПК Заказ 9206/2 2воаи 92 t ПоПписвое

Фнлиж GOD Патент", r.Óàç oðîä, ул.Проектная, 4 тщательно перемешивают и вновь по,мещают в термостат при 37 С.

Через 20 мин производят учет результатов, Если в пробирке с исследуемой культурой и в контролях культуры и физиологического раствора окраска не развивается или появляется желтое;окрашивание, в контроле формалина(контроль 2 развивается интен- .

"сивное красно-фиолетовое. окрашивание; 10 что в этом случае дается ответ о наличии в пробе вбзбудителя псевдотуберкулеза грызунов или полевочьей разновидности чумного микроба ° Если же пробирка с исследуемой культурой . f5 .содержит чумной микроб или слабоактивные . штаммы псевдотуберкулезного микроба и полевочьей разновидности чумного микроба, медленно окисляющие формальдегид, то в пробирке с 2о исследуемой культурой появляется красно-фиолетовое окрашивание, также как .в контроле формалина, в контролях культуры и физиологического раствора окраска не развивается . 25 или иоявляется желтое окрашивание.

Для уточнения результатов пробу на формалин ставят второй раз через

6 ч инкубации с таким же набором контрольных пробирок. Учет результатов проводят, как описано выше. Если результаты аналогичны, то через 24 ч

4 пробу ставят в третий раз с оставшимися 4 пробирками.

По результатам реакции. на формальдегид через 24 ч составляют окончательное заключение. Если в пробе культура не окисляет фррмальдегид, то ее относят к возбудителям чумы крысиной, суслиной, песчаночной или сурчиной разновидностей, если окисляет, то к полевочьей разновидности чумы или к возбудителю псевдотуберкулеза грызунов.

Предложенный способ был проверен на 210 штаммах чумного микроба, 182 штаммах возбудитеЛя псевдотуберкулеза грызунов, а также на ряде .других микроорганизмов (см. таблицу).

Из таблицы видно, что с помощью предлагаемого способа возбудитель чумы крысиной, суслиной, песчандчной и сурчиной разновидностей дифферен-, цируется от полевочьей разновидности и от возбудителя псевдотурберкулеза грызунов.

Предложенный способ отличается высокой специфичностью, простотой и доступностью. Он позволяет быстро провести дифференцирование чумы крысиной, суслиной, песчаночной и сурчиной разновидностей от полевочьей разновидности чумного микроба и возбудителя туберкулеза грызунов.