Способ получения посевного материала

 

Союз Советских

Соцналнстнческмх

Реслублик

ОП КСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 889703 ф

Фф (61) Дополнительное к авт. свмд-ву (22) Заявлено 150280 (21) 2895554/28-13 с присоединением заявки N9 (23) Приоритет—

Опубликовано 1 1281.Бюллетень Й9 46 (51)М. Кл

С 12 и 1/14

Государственный комитет

СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 577.15.07 (088. 8) Дата опубликования описания 151181 (72) Автор изобретения

Т.Б.Чернягина

Всесоюзный научно-исследовательский институт (71) Заявитель (541 СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения продуктов микробиологического синтеза при культивировании плесневых грибов, в частности микроорганизмов из родов Aspergillus и Penicillium.

Известны способы подготовки посевного материала в виде конидий, выращенных на твердых питательных средах. Для производственных питательных сред перед посевом ферментов колбы со споровым материалом,выращенным на сыпучих твердых питательных средах,заливали стерильной во- 1» допроводной водой, производственной питательной средой или производственной питательной средой, разведенной в несколько раз с помощью воды.

Колбы помещали на качалку для набухания и подращивания конидий t1 ).

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту является способ полу25 чения посевного материала, заключающийся в увлажнении готового конидиального матер йала стерильной водой, гомогенизации era на магнитной мешалке и подращивании на качалке в 30 ферментационной среде,. разбавленной в 2-4 раза водой 2).

Недостатками известного способа являются возможность инфицирования бактериальной микрофлорой посевного материала при подготовке к инокуляции; отсутствие возможности подавления посторонней микрофлоры, уже имеющейся в посевном материале.

Цель изобретения — улучшение качества посевного материала и подавление бактериальной микрофлоры.

Поставленная цель достигается, тем, что согласно способу получения посевного материала-, предусматривающему выращивание спор на твердых питательных средах, увлажнение готового конидиального материала стерильным раствором и подращивание его на качалке до начала прорастания конидий, подращивание проводят в 0,25

5,0%-ном растворе галлотанина.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Питательная среда, состоящая из пшеничных отрубей с 55-62% влажности, распределяется в колбы Эрленмейера общим объемом 0,25-0,75 л или в пробирки 18х220 мм по 4,0-15,0 r

ПО CVXOMV ВЕСУ ОтрУбей на каждую

889 70 3 честно бакте иальных клеток состав ляет 2, 1 10 на 1 мл культуральной жидкости.

П р и гл е р 2 (опыт). В качестве посевного материала для посева производственной питательной среды в ферментере на 1 м с коэффициентом заполнения 0,5 используется культура Asp. awamori штамм 16 той же партии, что н примере 1 (с бактериальной обсемененностью 2,3 10 на

1 г культуры). Перед посеном в кол20 бы с конидиями наливают по 150 мл

1,5%-ного стерильного нодного раствора галлотанина и прокачивают на качалке при 30 С б ч.

Ферментер с питательной средой, 25 содержащей кашалотовый жир, соевую муку, кукурузный экстракт, минеральные соли и воду, инокулируют посевной культурой, обработанной раствором галлотанина. В процессе выращи3р вани я в ферме н тере посторонняя микрофлора отсутствует, биомасса микроскопического гриба к 48 ч выращивания составляет 16 г/л. Активность

Тираж 531 Подписное

BHHHIIH Заказ 10898/44

Филиал ППП "Патент", r.Óæãîðîä,óë.Ïðoåêòíàÿ,4 емкость и стерилизуется при 1 ати

1 ч. В качестве питательной среды ля пробирок может быть использована также любая агаризованная среда по 8-10 мл на одну пробирку. После охлаждения питательная среда инокулируется конидиями, полученными с культуры, выросшей н пробирках на скошенной агаризованной питательной среде, из расчета 1 10 -1 "10 на ем7 кость . Культуру выращивают н ст ационарных условиях при 28-34 С 5-10 сут. о

Готовая культура хранится в прохладном месте. Перед инокуляцией промышленной питательной среды колбы или

"пробирки, предназначенные для посева, увлажняют 10-150 мл 0,25-5,0%-ным стерильным водным раствором галлотанина и помещают на качалку при 28

34 С на 4-8 ч. Затем производят инокуляцию производственной питательной среды. В качестве минимальной концентрации галлотанина применяют его

0,25%-ный водный раствор, так как использование этого вещества в меньших количествах не гарантирует гибель посторонней бактериальной микрофлоры. Максимальная концентрация галлотанина может превышать 5%, однако это ограничение концентрации выбрано н связи с высокой стоимостью вещества. Использование больших концентраций галлотанина может привести к удорожанию себестоимости конечного продукта производства.

Определение необходимой концентрации галлотанина для применения конкретных условий производят путем выявления наличия посторонней микрофлоры и ее количества микроскопиронанием.

Пример 1 (контроль) . В колбы общей емкостью 0,75 л с посевным конидиальным материалом штамм Asperillus awamori штамм 16 — продуцентом липазы, выращенным на пшеничных отрубях с исходной влажностью 62%, перед посевом заливают по 50 мл стерильной водопроводной воды, помещают

На качалку и прокачивают б ч при

30 С. Затем произнодят посев ферментера емкостью 1 м с коэффициентом заполнения 0,5, содержащего питательную среду (кашалотовый жир, соевая мука, кукурузный экстракт, минеральные соли и вода).

При проверке чистоты посевного

° материала микроскопированием обнаружены бактерии 4-6 в поле зрения. Рассев на чашки Петри с МПА и последующая инкубация при 37 С 24 ч показыва о ют наличие бактериального заражения в количестве 2,3 -10 на 1 г культуры, гликроорганизмы принадлежат к Ро

Bacillus

В процессе ферментации развитие посторонней бактериальной микрофлор продолжается, рост Аар. аиàmoгi шта „

16 угнетен. К концу культиниронания нес глицелия составляет 5 г на 1 л культуральной жидкости. Активность липазы отсутствует. При рассене колилипазы 12.000 ед/мл (по методу Ota

J., Jàmàda К., 1966, Agr. Вiol . Сhem.

30, с.351) .

Таким образом, реализация изобретения позволяет подавить бактериальную микрофлору и улучшить качество посевного материала.

Формула изобретения

Способ получения посевного материала, предусматривающий выращивание спор на твердой питательной среде, унлажнение готового конидиального материала стерильным раствором и подращивание его на качалке до начала прорастания конидий, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью подавления бактериальной микрофлоры и улучшения качества посевного материала, подращивание проводят н 0,25

5,0%-ном растворе галлотанина.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР гг 300513, кл. С 12 0 13/10, 1969.

2. Авторское свидетельство СССР по заявке 9 2771137/28-13, кл. С 12 .0 13/10, 1979.