Способ синхронизации митотического цикла тканей интактных организмов

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< 899645 (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 19. 09, 80 (21) 2983376/30-15 с присоелииением заявки М— (23) Приоритет"

Опубликовано 23 ° 01 ° 82 Бтоллетень М 3

Дата опубликования описания 23 . 01. 82 (53)М. Кл.

С 12 N 5/00

Государстееииый комитет

СССР ио аелан изобретений и открытий (53) УДК578.085.

° 23:581.143.6 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е.П.Гуськов, Р,М.Дворкина, Л.Б.И а A.3óðàáÿH

>

Ростовский ордена Трудового Красного Знамейи ( государственный университет (71) Заявитель (54) СПОСОБ СИНХРОНИЗАЦИИ МИТОТИЧЕСКОГО

ЦИКЛА ТКАНЕЙ ИНТАКТНЫХ ОРГАНИЗМОВ. Изобретение относится к способам синхронизации митотического цикла тканей растений и животных и их культур и может быть использовано для изучения митотического цикла и чувствительности его фаз к действию физических и химических агентов.

Известен способ температурной синхронизации, заключающийся в том, что ткани растений или животных подвергато ются воздействию температурного шока (1) .

Недостатком способа является низкий процент синхронизации тканей (5-74) кроме того, он непригоден

tS для синхронизации тканей интактных теплокровных животных.

Целью изобретения является расши.рение объектов, используемых для синхронизации, увеличение процента син" хронизации и упрощение процесса.

Поставленная цель достигается тем, что воздействие физическим.фактором осуществляют путем помещения интактного организма в барокамеру с кислородом под давлением 3-6 ат на

1-3 чНа чертеже представлена барокамера, оощнй вид.

Для синхронизации митотического цикла тканей интактных организмов объект синхронизации (животное или растение, культура животной или растительной ткани) помещают, например, в барокамеру, состоящую иэ полого бокса 1, герметически закрывающейся крышки 2, манометра 3, входного клапана 4, выходного клапана 5, где после продувки кислородом созда.ют повышенное давление от 3 до 6 ат в течение 1-3 ч после чего производят декомпрессию в течение 3-10 мин.

Пример 1. Получение растительной ткани с синхронизированным митотическим циклом.

Проросшие семена пшеницы, креписа и подсолнечника были помещены в барокамеру, где после продувки кис899645

1,97+0,11 0,999 2,1О+О,31 0,999 0,77+0,08 0,999

1 52+01 2 оэ999 5f35+0 54 0,999 1 96+0 1 7 0 ° 999

4,07+0,27 0,999 16,45+0,83 0,999 22,30+1 25 0,999 лородом создавали давление от 2 до

7 ат 0„в течение 0,5-4 ч.

О степени синхронизации тканей судили по динамике митотического индекса (ИИ) в течение 36 ч после окон- чания обработки. Корешки растений фиксировали в раМные сроки после окончания воздействия в фиксаторе

Карнуа, окрашивали ацеторсеином, готовили временные давленые препа- 10 раты. Иитотический индекс вычисляли по формуле делящиеся клетки ° 100 неделящиеся + делящиеся клетки. каждом варианте подсчитывали не менее 18000 клеток. Статическую обработку результатов и достоверность различий (Р) оценивали по ФишеруСтьюнденту.

В табл.1 представлена динамика щ митотического индекса после воздействия 0 6 ат в течение 3 ч; в табл.2 " после воздействия 0 3 ат в течение 3 ч; в табл.3 - после воздействия 0 7 ат в течение 4 ч. д

Анализ данных показывает, что наиболее эффективные режимы обработки растений для получения синхронно делящейся ткани между 3-6 ат О и 1-3 ч.зo обработки.

Одним из существенных признаков эффективности. синхронизации ткани является уровень митотического индекса через 1-3 ч после обработки; чем ниже ИМ, тем больший процент синхронизированных клеток наблюдается в митозе через 6-8 ч после обработки. Цитофотометрически показано, что в период пребывания в барокамере в тканях растений возникает митотический блок на фазе G -клеточного цикла, что позволяет использовать предложенный способ для изучения отдельных фаз цикла.

il р и м е р 2. Получение животной ткани с синхронизированным митотическим циклом у интактных животных.

Интактные взрослые самцы крыс

"Вистар" и мышей "Black x CBA подвергали воздействию О при 3-7 ат

0,5-1,5 ч. О степени синхронизации тканей судили по динамике ИИ в тканях роговицы глаза и костном мозге, определявшейся по стандартной методике.

В табл,4 и 5 приведена динамика митотического индекса соответственно в роговице и в костном мозге мышей после воздействия О 6 ат в течение 1 ч; в табл.6 - после воздейст— вия 0 3 ат в течение 1,5 ч в костном мозге, Пребывание животных в барокамере более 1 ч при 6 ат и 1,5 ч при 3 ат приводит животных к судорожному состоянию и последующей гибели.

Пребывание животных при 6 ат 0 в течение часа значительно увеличивает митотический индекс как в роговице, так и в костном мозге. что чказывает на высокий уровень синхрони, зации. Снижение давления снижает эффективность синхронизации.

Таким образом, повышенное давление кислорода в пределах 3-6 ат в течение 1-3 ч является агентом, синхронизирующим делящиеся -ткани интактных организмов, приводящим к остановке деления клеток на фазе

6,1-, после чего через 6-8 ч значительная часть клеточной популяции вступает в митоз одновременно.

Предлагаемый способ является более простым по сравнению с химической синхронизацией, так как не требует точности дозировки и последующего избавления от митостатика, увеличивает процент синхронизации и расширяет круг объектов синхронизации.

Таблица 1

899645

Продолжение табл. 1

21,49+1,14 0,999

0,999 16,91+1,ПЗ 0,999

8,02+1,22 0>999

6,24+0,48 0,01

8,10+0,61

24

7,15+0,53

0,01

4,70+0,24 0,999

11 31+0,71 0,01

Контроль 6, 73+0,04

10,35+0,18

Таблица 2

Иитотический индекс

Время

@иксаКрепис

Подсолнечник

Пшеница

0)999 1,54+0,08

0,999

4,96+0,68 0,999 14,75+0,44 0,999 19,65+0,04

0,999

0>999 18,68+0,87 0,999 20,04+0,64 0 999

9,44+0,77

5,98+0,68

0,01 12,87+0,06 0,01 11,24+0,38

0,01

12,46+0,88

Контроль 7,06+0,41

11 97+ 0,52

Таблица 3

Иитотический индекс

Подсолнечник

Крепис

Пшеница

0,999 0,04+0,02 0,,999 0,02+0,00 0,999

Полная гибель клеток

0,1 8+0,01

19,06+0,34 - 10,34+0,74

Контроль 6,65+0,22 ции после обработкии, ч

Время фиксации после обработки, ч

12,11+0,96 0,999 26, 46+0,98 0,999

2,07+0,21, 0,999 1,96+0,71

14,08+1,07 0,999

9,50+0,67 0,01

9,53+0,01

899645

Время фиксации, ч

11итотический индекс

17967

0,876+0,07

0,977+0,07

3,127+0)102

1,205+0,07

1,507+0,09

0,5

0,999

20888

0 999

22999

0>999

20269

0,999

169974

Контроль

Таблица 5

Время фиксации, ч

Изученоклеток

Иитотический индекс

16545

0,896+0,06

1,149+0 07

3,521+0,09

11265+0,08

0,999

19874

0>999

21659

0,999

11892

0,999

19788 l,745+0,05

Контроль

0,01

19342

0,01

24586

Контроль

17586

Изучено клеток

В ремя Изучено фиксации, клеток

Иитотический индекс

1,569+0 ) 05

1,984+0,03

1,484+0)08

Таблица 4

Таблица 6

Формула изобретения

Составитель O.ÏåòðàNåâà

Редактор И.Николайчук Техред С. Мигунова Корректор Г. Назарова

12072/34 »раж 504 Подписное

8НИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Способ синхронизации митотического цикла тканей интактных организмов, включающий воздейст вие физическими факторами, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью рас ширения объектов, используемых для синхронизации, увеличения процента

899645 10 синхронизации и упрощения процесса, воздействие физическим фактором осуществляют путем помещения интактного организма в барокамеру с кислородом под давлением 3-6 ат на 1-3 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

Иост X. Физиология клетки,М., "Мир", 1975, с.809-816.