Предметное стекло для исследования крови

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАУИНТУ (и) 904536

Союз Советских

Социалистических

Республик (63) Дополнительный к патенту (51) M. Кл.

Г 01 N З8Л6 (22) ЗаЯвлено 0804.76 (21) 2 4675З/28-1З (23) Приоритет - (32) 11М.75 щвударатеввей ввихтвт

СССР вв двхвм хзвбрвтвеЭ и вткратнй (31) Р 2515966.4 (83) ФРГ

Опубликовано Од2Я2 Бюллетень ¹ 5

Дата опубликования описания 070252 (53) УЙК611-038. .5(088.8) Иностранцы I

Дитер бергер, Вернер Гютляйн, Вольфганг Вернер,"Петер Рикмаин (фРГ) (72) Авторы изобретения

I

1 !

Ъ

Иностранная фирма

"Берингер Ианнхайм Гмбх" (ФРГ) (7l) Заявитель (54)ПРЕДМЕТНОЕ СТЕКЛО ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

КРОВИ

Изобретение относится к медицине., а именно к гематологии.

Известно предметное стекло для исследования крови с нанесенным на него слоем красителя, состоящего 5 из метиленового синего и ацетата крезолфиолетового при соотношении

9:1 Е11 °

Ацетат крезолфиолетовый очищают путем осторожного отстаивания в воде, удаляя ацетат натрия, затем растворяют в метаноле и выделяют с помощью эфира. Повторение этого процесса дает хроматографически чистый продукт.

Очищенные таким образом красящие вещества растворяют ь метаноле и наносят на предметное стекло. Они могут быть также растворены в воде .и нанесены вместе с полиоксиэтиленсор" битанмонопальмитатом. Соотношение этих красящих веществ 1:1,5 - 1:5.

Однако; красители, нанесенные на предметное стекло, не обеспечивают высокой контрастности окрашивания (окраска тусклая), формы зернистых лейкоцитов (эозинофилы, нейтрофилы и базо©илы) различаются с большим трудом.

Цель изобретения — повышение контрастности скрашивания. указанная цель достигается тем, 20 что в предметном стекле для исследования крови с нанесенным на него слоем красителей метиленового синего и ацетата крезолфиолетового слой ,красителя содержит красители в соот-.. И ношении 1: 1,5 - 1:5. При этом метиленовый синий использован в виде моногидрохлорида.

Иетиленоьый син. и очищают путем растворения в воде, выделяют гидрохлорид с помощью соляной кислоты.

Получают хроматографически чистый продукт, который содержит только около 0,53 хлорида цинка и представлен в виде моногидрохлорида.

3 904536

Краситель наносят на предметное стекло от 0,5 до 1Ор г/см". На предметное стекло наносят слой красителя

I затем добавляют каплю крови, накрывают IloKpoBHblM стеклом и через 5

3-5 мин микроскопируют с помощью иммерсионного объектива.

Получается яркая контрастная окраска, воспроизведение хорошее.

Гранулы эозинофилов окрашены в яркий желтый цвет, гранулы базофилов — в оранжевый цвет.

Контуры ядер распознаются отчетливо, что существенно облегчает различение лимфоцитов, моноцитов и 15 различных зрелых стадий гранулоцитов.

П р и и е р 1, Очистка ацетата крезолфиолетового.

50 г ацетата крезолфиолетового суспендируют в 100 мл воды и сильно раз- 20 мешивают в течение 15 мин. Затем красящее вещество отсасывают и дважды промывают 100 мл охлажденной на льду воды. Отфильтрованный осадок растворяют в 1,6 л метанола при нагрева- 25 нии и при 30 С отсасывают от нерастворимых частиц. Фильтрат медленно при помешивании смешивают с 3,5 л эфира и затем перемешивают в течение 30 мин при охлаждении на льду. Образовав- 30 шиеся кристаллы о сасывают, растворяют при нагревании в 620 мл метаноо ла, затем раствор охлаждают до 30 С и выделяют красящее вещество добавлением 1,85 л эфира при помешивании и охлаждении на льду. После отсасывания и трехфазовой громывки 120 мл е эфир-метанола (3:1) после просушки получают сверх дифосфорпентоксида

22 г ацетата крезолфиолетового в фор- 40 ме темно-зеленых кристаллов.

Состав: примерно 82< ацетата крезолфиолетового, 83 хлорида крезолфиолетового и 104 воды. При нагревании до 150 С возникает разложение.

Вецество по данным хроматографичес. кого исследования является практически чистым. Значение R = 0,6.

Пример 2. Очистка метилено50 вого синего.

В четырехлитровой трехгорлой колбе растворяют при помешивании

100 г метиленового синего в 1 л воды и перемешивают с 1 л концентрирован. ной соляной кислоты, = 1,18. После

55 четырехчасового перемешивания при охлаждении на льду и восьмичасового нахождения в холодильном шкафу при

+5 С отсасывают образовавшиеся кристаллы, промывают 400 мл охлажденной на льду 6 н. соляной кислоты и

500 мл эфира. Получают 36,5 г черных с металлическим блеском кристаллов.

Очищенное красящее вещество состо-. ит из 95-974 метиленового синего хлорид-гидрохлорида и содержит 3-53 воды. Имеются лишь только следы цин-, ка. Красящее вещество по данным хроматографического исследования является практически чистым. Значение

Rg = 0,5.

Пример 3 °

Используя красящие вещества, очищенные согласно примерам 1 и 2, приготавливают раствор следующего сос1тава:

Метиленовый синий гидрохлорид, мг 130

Ацетат крезолфиолетовый, мг 270

Метанол, мл Около 100

Этот раствор ватным тампоном наносят или напыляют на предметное стекло и высушивают.

При средней величине капли примерно 20 1ч нанесенное количество крася- щего вещества составляет около

31ч г/см".

На предметное стекло наносят каплю крови примерно 5-10р и накрывают покровным стеклом. Через 3-5 мин окраску оценивают под микроскопом при 800-кратном увеличении с использованием иммерсионного объектива.

Отдельные частицы крови представлены в следующей окраске.

Ретикулоциты: сетка пурпурного цвета внутри едва окрашенных эритроцитов.

Нейтрофилы: ядро пурпурного цвета внутри тонкозернистой почти бесцветной плазмы.

Зозинофилы: ядро пурпурного цвета внутри грубозернистой желтой плазмы, Базофилы: ядро темно-пурпурного цвета внутри средней величины компактно-зернистой плазмы оранжево-красного цвета.

Лимфоциты: ядро пурпурного цвета с плазмой светло-пурпурного .цвета.

Ионоциты: как лимфоциты, только крупнее и больщим количеством плазмы.

5 904536 6

Тромбоциты: маленькие частицы пур- 9:1 наблюдается различная окраска пурного цвета. отдельных форменных элементов крови.

Предлагаемый краситель позволяет повысить контрастность окрашивания В таблице приведена окраска оттак, при сравнивании окрашенных пред- s дельных элементов крови в зависимос метных стекол при соотношении 1: 1,5, ти от соотношения метилового синего

1: 3 и 1:5 с окрашенными предметными N-гидрохлорида:ацетат крезилфиолето" стеклами с соотношением красителей вого.

Соотношение компонентов

Элементы крови

1:5 9:1

1:1 5

Эозинофилы

Хорошо

Хорошо

Очень хорошо

Очень хорошо Очень слабо

Очень хорошо

Базофилы

Удовлетворительно

Бриллиантовая окраска

Бриллиантовая окраска

Нейтрофилы

Удовлетворительно

Бриллиантовая окраска

Очень хорошо

Бриллиантовая окраска

Димфоциты

Очень хорошо

Очень хорошо

Очень хорошо Достаточно

Очень хорошо

Моноциты

Тромбоциты

Удовлетворительно

Бриллиантовая окраска

Бриллиантовая окраска

Формула изобретения

1. Предметное стекло для исследования крови с нанесенным на него слоем красителя, состоящего из метиСоставитель С. Малютина

Редактор А. Лежнина Техред М. Надь Корректор И. Пожо

Заказ 179/49 Тираж 882 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, И-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал OllA "Патент", г.ужгород„ ул.Проектная, 4

Как видно иэ таблицы, применение предметных стекол, содержащих метиленовый синий и ацетат креэолфиолетовый или метиленовый синий в виде миногидрохлорида в соотношении

1: 1,5 - l:5, позволяет получить лучшее окрашивание различных элементов крови по сравнению с известным красителем в соотношении 9:1.

Очень хорошо Очень хорошо Очень слабо

1 ленового синего и ацетата креэолфиолетового,- о т л и ч а ю щ.е е с я тем, что, с целью повышения контрастности окрашивания, слой красителя содержит компоненты при следующем соотношении 1:1,5 - 1:5.

2. Стекло по п.l, о т л и ч а " ю щ е е с я тем, что метиленовый синий используют в виде моногидрохларида.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1 Патент США 4 3796594, кл. 117-124, 1972.