Способ получения производных тетрапептидов или их солей
О П И С А Н И Е < 9 824
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик
К ПАТЕНТУ (6I ) Дополнительный н патенту (22) Заявлено 021078 (21) 2669396/23-04 (51) М. Кл.
С 07 С 103/52
A 61 К 37/02 (23) Прйоритет — (32) 03. 10. 77 (3I ) 838516 (33) США
Государсткенный комитет
СССР по делам изобретений и открытий (53) УДХ 547. 964. .4.07 (088.8) Опубликовано 230282.Бюллетень 34 7
Дата опубликования описания 23.0282
И ностранцы (72) А вторы
ИЗОб тЕНИя Эдвард Ли Смитвик -младшии,Роберт Теодор и Роберт Куртис Артур Фредериксон (Ка уман (СЙА) ада)- .
Иностранная фирма Зли Лилли знд Компани (США) (71) Заявитель.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ
ТЕТРАПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ СОЛЕЙ
l0!
Изобретение относится к способу получения тетрапептидов или их солей — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.
Известен способ деблокирования соответственно защищенных пептидов в кислой среде. Использование известного способа позволяет получить новые соединения, обладающие интересными фармакологическими свойствами (1).
Цель изобретения — получение новых производных тетрапептидов или их солей, расщиряющих арсенал средств воздействия на живой организм.
Поставленная цель достигается способом получения производных тетрапептидов формулы (") 0 (),()R, Н,, и
tI и 1 И-CH-С вЂ” ИН-С//-С-NH- СН; С-И вЂ” С- 8
Н/1 1 l
2 1
R R СН
l где / и 0 означают хиральность;
R e H H H C — C3,.
/ I
R — водород или первичный алкнл C С ;
R — водород или первичный
3 алкил С/
Z — - СОХИ (при условии, когда один из радикалов R> и
R3- первичный алкил, второй — водород), или их солей, заключающийся в том, что защищенные соединения, соответствующие производным тетрапег.— тидов Формулы I, деблокируют обработкой в кислой среде.
Причем деблокирование осуществляют в трифторуксусной кислоте или в ледяной уксусной кислоте, насыщенной газообразным HC0 .
Фармацевтически приемлемые нетоксичные кислые соли присоединения включают соли брганических и неорганических кисзтот, например хлористоводородной, серной, сульфокислоты, винной, фумаровой, бромистоводородной, гликолевой, лимонной, малеиновой, фосфорной, янтарной, уксусной, азотной, бенэойной, аскорбиновой кислот, паратолуолсульфокислоты, бензолсуль. Фокислоты, нафталинсульфокислоты и пропионовой кислоты. Предпочтительно для образования кислых солей выбирать хлористоводородную, уксусную или янтарную кислоту. 31юбую из указанных солей получают известными методами.
Соединения формулы 1 являются первичнымй амидами, первичными спиртами или производными нитрилов специально определенных тетрапептидов.
Хиральность остатков аминокислот, при рассмотрении от положения 1 до
4 — .), D, отсутствует. Остаток в положении 3 — глициновая группа, следовательно он не может обладать
I хиральностью. Остаток в положении 4 может быть первичным амидом, первичным спиртом или нитрилом, его хиральность согласуется с соответствующим предполагаемым остатком
А. аминокислоты.
Соецинения формулы 1 получают с помощью известных способов синтеза пептидов. Возможно, что в процессе синтеза и некоторых соединений формулы 1 происходит частичная рацемизация. Однако степень рацемизации, если таковая происходит, недостаточна, чтобы существенно изменить анестезирующую активность соединений формулы I.
Способы получения оединений формулы 1 включают соче з.ние аминокислот или фрагментов пептида посредством взаимодействия функциональной группой с другой молекулой с образованием амидного связывания.
Для обеспечения эффективного сочетания желательно, чтобы все реакционноспособные функциональные группы, непосредственно не участвующие в реакции, были дезактивированы посредством использования соответствующих блокирующих групп и карбоксильная функциональная группа, которая подлежит сочетанию, была соответствующим образом активирована для обеспечения протекания сочетания.
Все это требует тщательного выбора как последовательности превращений, так и условий реакции, а также использования специальных блокирующих групп. Каждую из аминокислот, которые используют для получения соединений формулы 1 и которые имеют специально подобранные защитные группы и/или активированные функциональные группы, получают при использовании известных методик.
На каждой стадии общего синтеза соединений формулы I применяют выбранные комбинации блокирующих групп. В синтезе соединений формулы
I могут работать и другие комбинации, хотя, возможно, с меньшей степенью эффективности, Так, например, бензилоксикарбонил, трет.-бутилоксикарбонил, трет.-амилоксикарбонил, .,-матоксибензилоксикарбонил, адэман5
t0
65 тилоксикарбонил и изоборнилоксикарбонил могут в различных случаях использоваться в качестве групп блокирующих аминогруппы в синтезе соединений формулы. Более того, в качестве защищающего оксигруппу для остатка тирозила обычно используют радикал бензил. (Взл), даже если могут быть использованы другие агенты, например п-нитробензил, и-метоксибензил.
Применяемые при синтезе соединений формулы 1 группы, блокирующие карбоксил, могут представлять собой любые из типичных эфирообразующих групп, например, включающие метил,. этил,бензил, п-нитробензил,п-метоксибензил и 2,2,2-трихлорэтил. .Сочетание соответствующим образом защищенных N-блокированных аминокислот или пептидных фрагментов с соответственно защищенными карбоксиблокированными аминокислотами или фрагментами пептида при получении соединений формулы 1 заключается в превращении свободных функциональных карбоксильных групп аминокислот или пептидных фрагментов, активных в соотношении реакции сочетания. Это может быть осуществлено посредством использования любой из известных методик, одна из которых заключается в превращении функциональной группы карбоксила в смешанный ангидрид.
Свободные функциональные карбоксильные группы активируют посредством взаимодействия с другой кислотой, обычно производной карбоновой кислоты, например хлорангидрид кислот.
Примерами хлорангидридов кислот, применяемых для образования смешанных ангидридов, являются этилхлороформиат
/ фенилхлороформиат, втор.-бутилхлороформиат, изобутилхлороформиэт и пивалоилхлорид. Предпочтительно использовать изобутилхлороформиат.
Другим способом активирования карбоксильных групп для целей проведения реакции сочетания является превращение их в соответствующие активные эфирные производные. Такие активные эфиры включают, например, эфир 2,4,5-трихлорфенила, эфир пентахлорфенила и эфир п-нитрофенила.
Другим способом сочетания является метод азидного сочетания.
Предпочтительный способ сочетания при получении соединений формулы
1 включает использование N,N-дициклогексилкарбодиимида (ДСС) для активирования свободной карбоксильной группы и тем самым способствует протеканию реакции сочетания. Этот способ проводится при использовании эквимолярного количества ДСС относительно аминокислоты или пептидного фрагмента и осуществляется в присутствии эквимолярного количества 1-оксибензотриаэола (ОБТ). Нали908246
35 чие ОБТ подавляет нежелательные побочные реакции, включая вероятную рацемизацию.
Отщепление выбранных блокирующих групп необходимо на определенных стадиях в последовательности синтеза при получении соединений формулы I ..
Отщепление карбоксилэащищающих групп может быть достигнуто посредством щелочного омыления. Обычно для деэтерификации защищенного карбоксила применяют относительно сильные щелочи, типичным является использование гидроокисей щелочных металлов (гидроокись натрия,гидроокись калия и гидроокись лития) .Блокирующие кар- 15 боксил группы, кроме того, могут быть удалены каталитическим гидрогенолиэом, например, включающим гидрогенолиз в присутствии катализатора — палладий на угле. 20
Более того, в тех случаях, когда блокирующая карбоксилгруппа является н-нитробензилом или 2,2,2трихлорэтилом, деблокирование может осуществляться посредством восста- 25 новления в присутствии цинка и соляной кислоты.
Группы, блокирующие аминную функцию, отщепляются посредством обработки защищенной аминокислоты или — 30 пептида кислотой, например, муравьиной кислотой, трифторуксусной кислотой (ТФУ), и-толуолсульфокислотой (TCK) бензолсульфокислотой (БСК) и нафталинсульфокислотой с образованием в качестве продукта соли присоединения соответствующей кислоты. Отщепление аминоблокирующей группы также может осуществляться посредством обработки блокированной аминокислоты или пептида смесью HBr или 40
НСь и уксусной кислоты, для того чтобы получить соответствующую кислую соль присоединения, гидробромид или гидрохлорид.
Конкретный способ или используе- 45 мые реагенты зависят от химических или физических характеристик применяемых материалов в специальной реакции деблокирования. В тех случаях когда Группа Rn отличается от 50 водорода и пептид содержит, по крайней мере, три остатка аминокислоты, которые следует деблокировать, наиболее предпочтительно деблокировать пептид ТФУ или муравьиной кислотой, получая соответствующую кислую соль присоединения. Эту соль можно превратить в более приемлемую фармацевтически нейтральную фор.лу посредством обработки соответствующей ионообменной смолой, например DEAE, Се- 60 фадект А25 и Амберлит й27, Присутствующая в тирозильном остатке оксиэащищающая группа может быть сохранена в пептиде на протяжении последовательных стадий его 5 получения, причем ее удаляют на последней стадии синтеза в сочетании с отщеплением аминоблокирующих групп.
Однако, в. зависимости от применяемых условий для удаления кърбоксилблокирующих групп, она может быть удалена ранее, в процессе получения, Когда карбоксильную группу отщепляют посредством. щелочного омыления, оксизащищающая группа остается, однако при использовании каталитического гидрогенолиза для удаления карбоксилзащищающей группы оксизащищающая группа также отщепляется. Но получение соединений формулы I может осуществляться в присутствии- тирозильного остатка, имеющего свободную гидроксильную группу.
Пример 1. Получение 1-тирозил-D-аналин-глицил-N MeTH -L-фенилаланинамида (уксуснокислой.соли).
А. Бенэил-D-алинат-и-толуолсульфонат.
K смеси 100 мл бенэилового спирта и 200 мл бензола, содержащей 55,1.г (0,29 моль) моногидрата и-толуолсульфокислоты, добавляют 25 г (0,281 моль) D-аланина. Смесь доводят до кипения, причем воду удаляют в виде азеотропа с помощью ловушки
Дина-Старка. Эту смесь нагревают в течение 15 ч и затем охлаждают до комнатной температуры и разбавляют эфиром. Полученный осадок отделяют и перекристаллиэовывают иэ смеси метанола и эфира, получая 55,3 г (56 Ъ) соединения, т. пл. 112-115 С. молекулярный вес 351,42.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 58,10;Н 6,02;N 3,99.
C,„Í2„ND
Найдено,Ъ: С 58,19;Н 6,06;N 3,82.
Б. Бенэил-М -трет.-бутилоксикарбонил-0-бензил-L тироэил-D-алинат.
К 200 мл сухого диметилформамида (ДМФ) добавляют 35,1 г (0,1 моль) диаэабициклооктана (ДАБЦО). Смесь перемешивают в течение 10 мин при
0 С и добавляют 37,1 .г (0,1 моль) 4 -трет.-бутилоксикарбонил-о-бензил1.-тирозина и затем 13,5 r (0,1 моль)
1-оксибензотриазола (НВТ) и 20,6 r (0,1 моль) N И-дициклогексилкарбодиимида (ДСС). Образовавшуюся смесь перемешивают при 0 С в течение 3 ч и затем при комнатной температуре в течение 1 сут. Затем эту смесь охлаждают до 0 С, полученную суспензию фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный осадок снова растворяют в этилацетате и последовательно промывают 1 н. раствором
NaHCO3 водой, холодным 0,75 н.
З и раствором лимонной кислоты и водо
Органический слой сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток р астворяют в горячем этаноле. При охлаждении происходит кристалли908246
25 зания. После первой кристаллизации из этанола получают 41,5 г (80 Ъ) чистого вещества, т. пл. 121-123 С.
Молекулярный åñ 520,63 °
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 69,21;Н 6,97;N 5,38.
Cgg H96 +O6
Найдено, Ъ :С 68,99;Н 6,75:И 5,17.
В. N -трет.-бутилоксикарбонил-Обензил-L- zpoaza-D-аланин.
К смеси 200 мл тетрагидрофурана (ТГФ) и 20 мл воды добавляют 31,2 г (0,06 моль) полученного продукта, Полученный раствор охлаждают до О С и медленно добавляют к нему 13 2 мл (1,1.эквивалента) 5 н. раствора гидроокиси натрия. Полученную смесь перемешивают и оставляют медленно нагреваться до комнатной температуры.
Через 5 ч смесь распределяют между эфирным и водным слоями. Водный слой отделяют и охлаждают, поддерживая рН посредством добавления лимонной кислоты, и смесь экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный экстракт промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и разбавляют эфиром. Полученный осадок собирают, получая 17,7 г (67 Ъ) соединения, т. пл. 160-162ОC. Молекулярный вес
442,51.
Элементный анализ:
Вычислено,%:С 65,14;Н 6,83;N 6,63.
С24 НЭО М ОЬ
Найдено, Ъ :C 64,73;Н 6,70;N 6,20
Г. Бензил-М-трет.-бутилоксикарбонил-О-бензил-L тирозил-D-.àëàíèëглицинат.
К 70 мл сухого ДМФ добавляют
6,74 r (0,02 моль) кислой и-толуолсульфокислотной соли бензилглицината.
Полученную смесь охлаждают до ООС и добавляют 2,24 г (0,020 моль)
DABCG. Смесь перемешивают в течение нескольких минут и добавляют 8,84 r (0,020 моль) полученного продукта и затем 2, i г (0,020 моль! HBT u
4,12 г (0,020 моль) ДСС. Реакционную смесь перемешивают в течение
2 ч при О С и затем в течение 1 сут при комнатной температуре. ПолученО ную суспензию охлаждают до 0 С, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный осадок растворяют в этилацетате и последовательно промывают 1 н. раствором бикарбоната натрия, водой, холодным 0,75 н. раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтру. ют и концентрируют в вакууме. Полученный остаток кристаллизуют из этанола, получая 10,8 r (92,8 Ъ) чистого соединения, т.пл. 145
147 С. Молекулярный вес 589,69.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 67,22;Н 6,67;N 7,13
СЭЭ НЭ9 1Я 5O7
Найдено, Ъ :С 67,32;Н 6,83:N 6,91
55 бО
11. И -трет.-бутилоксикарбонил-0бензил-L-тирозил-D-аланилглицин.
К 150 мл смеси тетрагидрофурана и воды (9:1) добавляют 15,95 г (27 моль) полученного продукта, Смесь о охлаждают до О С при перемешивании и к полученной смеси-по каплям добавляют 30 мл 1 н. раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают в течение 2 ч до завершения прикапывания и затем ее дважды экстрагируют эфиром. Выделенный водный слой подкисляют до рН 2,5 добавлением
30 мл 1 н. раствора соляной кислоты.
Вещество кристаллизуют, отделяют фильтрацией и перекристаллизовывают один раз из смеси метанола и воды и дважды из этилацетата, получая 11,43г (85Ъ от теории), т. пл. 104-107 С. (о()p)+ 31,4 (C=O 5; метанол). Молекулярный вес 499,54.
Элементный анализ:
Вычислено,::C 62,51;Н 6,66;N 8,41
26 HH33NN3 OOV
Найдено, Ъ :С 62,31;Н 6,83;N 8 12
Е. N òðåò.-бутилоксикарбонил-N метил-1-фенил-аланин, соль d(+) -метилбензиламина.
К 75 мл тетрагидрофурана добавляют 13,26 г (0,05 моль) 1Фтрет.— бутилоксикарбонил-А-фенилаланина и полученную смесь по каплям в течение 30 мин прибавляют при перемешивании к суспензии 0,15 моль гидрида калия и 0,5 г 18-крау-6 эфира при
О C в атмосфере азота. 11еремешивание продолжают при 0 С еще 1 ч. По каплям добавляют раствор 6,23 мл (0,1 моль) иодистого метила в 15 мл тетрагидроуурана в течение 15 мин.
Смесь выдерживают в течение 2 ч и по каплям добавляют смесь 10 мл уксусной кислоты и 10 мл тетрагидрофурана и затем добавляют 20 мл этанола. Затеял смесь вливают в 400 лл льда. рН полученной водной фазы доводят до 12-13 путем добавления
2 н.раствора гидроокиси натрия.
Водную смесь дважды экстрагируют эфиром и затем подкисляют до рН
3,0, добавляя твердую лимонную кислоту. Затем водную смесь экстрагируют эфиром (3 х 200 мл). Эфирные экстракты объединяют, экстрагируют водой, высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропообразного состояния. Этот сироп растворяют в 50 мл .эфира и добавляют 6,44мл (0,05 моль) d(+)-о(--метинбензиламина. Продукт осаждают добавлением
350 мл гексана, отфильтровывают, получают 15,83 r (79Ъ от теории) соединения. При перекристаллизации из этилацетата получают 13,70 r. (68 Ъ от теории) соединения, т. пл. 136 ,139 С; (d. ) — 28,2 (C=-1, зтанол) .
Молекулярный вес 400Ä50, 908246
Элементный анализ:
Вычислено,% С 68,97;Н 8,05;N 6,99 с2Ъ НЭЯ.N204
Найдено, % :С 68,75;Н 7,81;N 6,74.
Ж. И -трет.-бутилоксикарбонил-N" oL метил-б-фенилаланиламид.
N -трет.-бутилоксикарбонил-Б -метил-L-фенилаланин (4 г, 0,01 моль), полученный посредством подкисления
d(+)-aC метилбензиламинной соли и последующей экстракцией эфиром, растворяют в 20 мл ДМФ. Смесь охлаждают до -5 C и добавляют 1,56 мл (0,012 моль) изобутилхлороформиата и затем 1,32 мл (0,012 моль) Н-метилморфолина. Реакционную смесь перемешивают в течение 10 мин при -15 С
0 и барботируют в нее безводный аммиак в течение 1,5 ч. Полученную смесь пео ремешивают в течение 1 ч при -15 С и затем вливают в сосуд, содержащий
200 мл льда. Водный раствор экстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют и промывают последовательно 1,5 н. раствором лимонной кислоты, водой, 1 н. раствором бикарбоната натрия и водой. Затем этил" ацетатный раствор высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропообразного состояния, Сироп кристаллизуется из смеси эфира и петролейного эфира, получают
2,12 г (76 % от теории) соединения, т. пл. 91 — 92 С, Ы7 — 111,2 (С = О, 5; СНСВ ) . Молекулярный вес 278,33.
Элементный анализ:
Вычислено,%:С 64,73;Н .7,97;N 10,06
C„ H«N Oq
Найдено, % :С 64,95;Н 7,81;N 9,79
3. N Tðåò.-бутилоксикарбонил-0бенэил-L-тирозил-D-аланилглицил-N метил-L-фенилаланиламид.
К 20 мл свежеприготовленной ледяной. уксусной кислоты, содержащей безводный хлористый водород (1н.раствор) и 2 мл анизола, добавляют 1,95г (0,007 моль) Нс -трет.-бутилоксикарбонил-И -метил-Ь-фенилаланиламида.
ПОлученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение
30 мин. Затем вливают в эфир, выпавший осадок отделяют, высушивают и получают 1,5 г хлористоводородной соли, которую растворяют в 30 мл
ДМФ. Раствор охлаждают до 00С и добавляют к нему 1,4 мл (0,007 моль) дициклогексиламина. Смесь перемешивают в течение нескольких минут и добавляют 3,5 г (0,007 моль) утрет. -бутилоксикарбонил-О-бензилL-тирозил-D-аланилглицина, 950 мг (0,007 моль) HBT и 1,4 г (0,007моль)
ДСС. Затем реакционную смесь перемешивают при 0 С в течение 2 ч и затем при 4 С.в течение 1 сут, вновь охлаждают до О С и фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме до мас-. лообразного состояния; масло повторно растворяют в этилацетате.
Этилацетатный раствор последовательно экстрагируют 1 н. раствором бикарбонатЕ натрия, водой, холодным раствором 0,75 н. лимонной кислоты и водой ° Органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме до масла. Масло подвергают хроматографической очистке на колонке 40 см х 3 см с силикагелем марки Грейс и Дэвисон
62 в хлороформе. Продукт элюируют, используя ступенчатый градиент концентрации хлороформа в смеси 10 % метанола в хлороформе. Контроль. за ходом очистки ведут с помощью тон 5 кослойной хроматографии отбираемых фракций. Получают 3,55 г (77 % от теории) соединения,(о(.) - 9,2 (С
= 0,5;метанол). Молекулярный вес
659,8.
Щ Элементный анализ:
Вычислено,%:С 65,54;Н 6,57;Л 10,61
С Н N О
Найдено, % :С 65,46;Н 6,58;N 10,36
И. И (-трет ° -бутилоксикарбонил25 L-тирозил-D-аланил-глицил- N -метилL-фенилаланиламид.
3,2 r полученного продукта (0,0485 моль) растворяют в 60 мл этанола и добавляют к смеси в виде водной суспензия 1,5 г палладия (5%) на угле. Через реакционную смесь барботируют азот с помощью газораспределительной трубки в течение 5 мин и затем пропускают водород в течение . 6 ч. Затем реакционную смесь продувают азотом и палладиевый катализатор отделяют фильтрованием.
Смесь концетрнруют в вакууме до сиропообразного состояния. Сироп растворяют в хлороформе и пропускают
40 через хломатографическую колонку
40 х 3 см, содержащую силикагель марки Грейс и Дэвисон 62. Продукт элюируют, и "пользуя ступенчатый градиент концентрации хлороформа в сме45 си 10 % метанола в хлороформе, и выделяют в соответствия с тонкослойным профилем отобранных фракций, получая 2,0 г соединения (74% от теории), (3.j - 9,9 (C=0,5 ме50 танол) .
Аминокислотный состав-.G(!y 1,01, AFa 0,99; Tyr 0,99, NH 1,14, (k
К; .4i-тирозил-3-аланил-глицилИ -метил-А-фенилаланиламид, ацетатная соль °
1,6 г полученного продукта (0,00281 моль) растворяют в 10 мл
ТФУ, содержащей 0,5 мл анизола.
Смесь перемешивают при 0 C в течение 30 мин, затем выливают в эфир и полученный осадок собирают и высушивают (1,1 г) . Твердое вещество растворяют в соответствующем количестве водного буферного раствора (1 % пиридина и 0 05 % уксусной
65 кислоты) до объема 15 мл и раствор
908246
12 пропускают через колонку DEAEСефацекс A-25 (ацетат) размером
2,5 х 99 см,уравновешенную тем же буфером. Элюат просматривают при
280 нм и соответствующие фракции объединяют и лиофилизуют.При повторной лиофилизации из 10 Ъ-ной уксусной кислоты, с последующей лиофилиэацией из смеси воды и ацетонитрила (3:1), получают 0,84 г соединения.
bL) + 27,8 (С = 1,1 н. раствор НС(.)
Аминокислотный состав: Tyr 0,98, ЛРа 1,03, GCy 1,00, NH g 1,05.
Пример 2. Получение БL-тирозил-D-аланил-глицил-L -метилфенилаланиламида, ацетатная соль.
А.Ь-J. — ìåòèëôåíèëàëàíèí, бензиловый эфир, тозилатная соль.
К 100 мл бензола добавляют 3,0 г (0,0168 моль) Ь-ь1.-метилфенилаланина.
К полученной суспензии затем добавляют 3,5 г (1,1 эквивалента) гидрата Я(() п-толуолсульфокислоты и 10 мл бензилового спирта. Смесь кипятят с обратным холодильником и ловушкой
Дина-Старка для воды в течение 4 сут.
Затем смесь охлаждают до комнатной 2 температуры и добавляют к ней эфир, чтобы осадить соль тозилата. Полученный осадок собирают и высушивают, получая 7,0 г (94 Ъ) соединения, т. пл. 129 — 131 C. (с() — 10,7 (С = 0,5; 1 н. раствор У метиловом спирте). Молекулярный вес 44),5.
Элементный анализ:
Вычислено, -oo: N 3,17
С 4Н ., И ОНайдено, -o : N 2,87.
В. И -трет.-бутилоксикарбонил-Обензил-L-тирозил-D-аланил-глицил-1.— д=метилфенилаланин, бензиловый эфир.
К 80 мл ДМФ добавляют 5,74 r 40 (0,013 моль) полученного продукта.
Полученную смесь охлаждают до О С в течение 5 мин и добавляют 6,5 г (13 моль). 1Ф-трет-бутилоксикарбонилО-бензил-L-тирозил-D-аланил-глицина (полученного как в примере 1), 1,8 г (13 моль) НВТ и 2,7 r (13 моль)
ДСС. Смесь перемешивают при 0 С в течение 2 ч и затем при комнатной темпеРатуре в течение 1 сут. Затем смесь охлаждают до 0 С и полученный осадок отделяют фильтрацией. Фильтрат упаривают в вакууме. Полученный остаток растворяют в этилацетате и этилацетатный раствор последовательно экстрагируют 1 н. раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 н. раствором лимонной кислоты и водой.
Органический слой затем высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до маслообразного состояния. Щ
Масло кристаллизуют из эфира и перекристаллизуют из смеси этилацет та и эфира. Получают 7,0 г (72 Ъ) соединения.(с1:) > +7,9 (С = 0,5 метанол>. Молекулярный вес 750,86. Я
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 68,78; l 6,71;И 7,46
С43 Н5О ИЛОВ
Найдено, Ъ :С 68,75;Н 6,46;N 7,21.
d. N -трет.-бутилоксикарбонилL-тирозил-D-аланил-глицил-Ь-oL-метилфенилаланин, соль дициклогексиламина.
К 50 мл этанола добавляют 4,0 г (0,053 моль) полученного продукта.
Затем добавляют суспензию 2,0 г палладия (5%) на угле в ДМФ. Через смесь пропускают азот, подаваемый через газораспределительную трубку в течение 5 мин, и затем подают газообразный водород в течение 4., Затем смесь обильно продувают азотом и отделяют палладиевый катализатор фильтрацией. Фильтрат концетрируют в вакууме до сиропообразного состояния. Сироп в растворе хлороформа ! подают на колонку размером 10 х 2см
I содержащую силикагель марки Грейс и Дэвисон 62. Колонку элюируют при ступенчатом градиенте концентрации хлороформа в смеси хлороформ метанол (9,5:0,5). Основные фракции объединяют и растворитзль упаривают. Полученное масло растворяют в этилацетате и добавляют к раствору 1 мл дициклогексиламина. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают, высушивают, получая 2,6 г (65 Ъ) соединения,т. пл. 142 — 146 С (о()п + 46,3 (С = 0,5, метанол).
Г. N -трет.-бутилоксикарбонилL-тирозил-D-аланил-глицил-L-Х-метилфенилаланиламид.
2,0 г полученного продукта (0,0227 моль) нейтрализуют смесью этилацетата и 0,75 н. раствора лимонной кислоты. Выделившийся органический слой отделяют, экстрагируют водой, высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до масла (1,5 r). Полученную свободную кислоту растворяют в 30 мл ДМФ и раствор охлаждают до О С в бутыли, выдерживающей давление. Добавляют 560 мг
ДСС (0,0027 моль) и смесь перемешивают 4 ч при О С и затем в течение
3 ч при комнатной температуре. Затем бутыль охлаждают до -78 С и добавляют 30 мл безводного аммиака.
Бутыль снова закупоривают и смесь оставляют перемешиваться при комнатной температуре в течение 48 ч.
Смесь охлаждают до -78 С, бутыль открывают и непрореагировавший аммиак дегазируют в процессе нагревания бутыли до комнатной температуры. Затем растворитель выпаривают в вакууме.
Полученный остаток растворяют в этилацетате и этилацетатный раствор экстрагируют сначала 0,75 н. раствором лимонной кислоты и затем водой. Раствор высушивают над сульфатом магния, и растворитель выпаривают в вакууме.
Остаток растворяют в хлороформе и
90В246
45 подают на колонку размером 3 х 45 см
<с силика елем. Колонку элюируют при постепенном градиенте, включающем добавление хлороформа к смеси хлороформ — метанол (9:1). Контроль за ходом очистки ведут с помощью хромотографии в тонком слое. Фракции, содержащие продукт, объединяют, упаривают и получают 1,1 г (72Ъ) *соединения, (с(.) — 26 (С = 4, метанол).
Анализ аминокислот: 08у 0,99;
АСа 1,00; Tyr 0,99; ИН3 1,12.
Д. Ь-тирозил-D-аланил-глицилLM-метилфенилаланиламид, ацетатная соль.
К 20 мл смеси 1 н. раствора хлористого водорода в ледяной уксусной t5 кислоте, содержащей 0,3 мл анизола, добавляют 0,9 r (0,0016 моль) полученного продукта. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение
30 мин и затем вливают в эфир. Полу- Щ ченный осадок собирают и высушивают (720 мг). Твердое вещество растворяют в таком количестве буферного раствора (1 Ъ пиридина и 0,05 Ъ уксусной кислоты), чтобы конечный 25 объем был 5 мл, и раствор подают на колонку размером 2,5 см х 99 см с
ОЕАЕ-Сефадекс A-25 (ацетата), предварительно доведенным до равновесия с тем же самым буфером. Элюат просматривают при 280 нм и соответствую- З щие фракции объединяют и лиофилизируют. Повторную лиофилизацию проводят из 10 Ъ-ной уксусной кислоты и затем из смеси воды и ацетонитрила (3:1) . Получают 400 мг соединения (с(3 + 23,9 (C 0,5; 1 н. раствор HC3) . Молекулярный вес
529,60.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ: С 58,97; Н 6,66; 40
N 13,22; О 21,15.
С26 H35 N3 07
Найдено, Ъ : С 59,02, Н 6,36;
N 12,99; О 21,41.
Анализ аминокислот: Туг 0,96;
Аг а 1,01; (г,у 1,00; NH3 1,03.
Пример 3. Получение Ь-тирозил-D-аланил-глицил-N4 -н-пропил-Lфенилаланиламида, ацетата.
А. N -трет.-бутилоксикарбонилN — н-пропил-L-фенилаланин. дК 70 мл тетрагидрофурана добавляют 10,6 г (0,04 моль) N -трет.-буd тилоксикарбонил-L-фенилаланина и полученную смесь по каплям в течение
30 мин прибавляют при сильном перемешивании к суспензии 0,12 моль гидрида калия в 220 мл тетрагидрофурана и 0,5 г 18-краун-б эфира при
О С. Процесс ведут в атмосфере азота. Смесь перемешивают еще 10 мин при d0
0 С. По каплям добавляют раствор
23,3 мл (0,24 моль) 1-иодопропана в
40 мл тетрагидрофурана в течение
20 мин. Смесь выдерживают .в течение
2,5 ч при О С и вводят в нее по, 65 каплям 11,5 мл (0,12 моль) 1-иодопропана. Перемешивание продолжают о еще 2 ч при 0 С, затем вносят 10мл ледяной 1.ксусной кислоты и вновь перемешивают в течение- 10 мин. Затем смесь выливают на раздробленный лед. рН полученной водной фазы доводят до 8,0, добавляя 2 н.раствор гидроокиси натрия. Водную фазу дважды экстрагируют эфиром и затем подкисляют до рН 2,5 добавлением холодного 2 н. раствора HCC . Затем водную фазу экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный экстракт промывают один раз водой, высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропообразного состояния. Сироп растворяют в 200 мл эфира и добавляют 8 мл ,(0,04 моль) DCHA. Осадок отфильтровывают и фильтрат промывают 1,5 н. раствором лимонной кислоты и воды.
Эфирный слой высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме до маслообразного состояния. Масло очищают хроматографически на колонке размером 3 х 40 см с силикагелем в хлороформе. Продукт элюируют, используя ступенчатый градиент хлороформа в смеси 5 Ъ метанола в хлороформе. 3а ходом очистки следят с помощью хроматографии в тонком слое. Фракции, содержащие продукт, собирают, упаривают и получают З,бг (31 Ъ от теории) соединения, )о()
153,3 (C = 1 метанол).
ЯМР-спектр: сГ (-COg Н) = 10, 47;
d(Ne3C †)= 1,50. Молекулярный вес
295,4.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 65,06;Н 8,53; 4,74 с.„н 2„г) О4
Найдено, Ъ :C 65,26;Н 8,29; г)4,69
Б.N òðåò.-бутилоксикарбоксилN -н-пропил-L-фенилаланиламид.
oL
К раствору N-трет.-бутилоксикарбонил-N H- пропил-L-фенилаланина в ДМФ, охлажденному до -15 С, добавляют один эквивалент изобутилхлороформиата и затем один эквивалент
N-метилморфолина. Смесь перемешивают о в течение 10 мин при -15 С и затем пропускают через нее в течение
30 мин безводный аммиак. Полученную о смесь перемешивают 1 ч при -15 С и затем смеь вливают в сосуд, соцержащий 200 мл льда. Водный раствор зкстрагируют этилацетатом. Органический слой отделяют и промывают последовательно 1,5 н. раствором лимонной кислоты, водой, 1 н. раствором бикарбоната натрия и водой.
Слой этилацетата отделяют и высушивают над сульфатом магния, упаривают в вакууме, получая укаэанное соединение.
В. И 1-трет.-бутилоксикарбонилQC
L-тирозил-D-аланил-глицил-Л -н-пропил-Ь-фенилаланилаглид.
908246
К 20 мл свежеприготовленного 1 н. раствора безводного HCf в ледяной уксусной кислоте, содержащего 2 мл анизола, добагляют один эквивалент
И (трет.-бутилоксикарбонил-N -н-про0(. пил-L-фенилаланиламида. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин, затем вливают в эфир и образовавшийся осадок собирают и высушивают. Затем хлористоводородную соль растворяют,в 30 мл
ДМФ. Раствор охлаждают до 0 С и добавляют один эквивалент N -трет.—
С(, бутилоксикарбонил-0-бензил-L-тирозил-0-аланил-глицина (полученного как в примере 1 Д),один эквивалент
HAT 1 эквивалент ДСС.Затем реакционную смесь перемешивают при О С в течение 2 ч и при 4 С в течение 1 сут.Смесь охлаждают до 0 С и фильтруют.Фильтрат концентрируют в вакууме до масла, которое снова растворяют в этилацетате ° Этилаце татный раствор промывают посЛедовательно 1 н. раствором бикарбоната натрия, водой, холодным 0,75, н ° раствором лимонной кислоты и; водой. Органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концен- трируют в вакууме до масла. Масло хроматографируют на колонке размером 3 х 40 см с силикагелем в хлороформе. Продукт элюируют, используя ступенчатый градиент хлороформа в смеси 10 % метанола в хлороформе. За ходом хроматографии следят с помощью хроматографии в тонком слое отобранных фракций, получают N<-трет.-бутилоксикарбонил-0бензил-L-тирозил-L-аланил-глицил Ф-н-пропил-L-фенилаланиламид.
Полученный продукт растворяют в
60 мл этанола и к смеси добавляют
1,5 r палладия (5%) на угле в виде водной суспензии. В реакционную смесь через газораспределительную трубку пропускают азот в течение
5 мин и затем водород в течение
6 ч. Затем реакционную смесь продувают чзотом и палладиевый катализатор удаляют фильтрованием. Смесь концентрируют в вакууме до сиропообразного состояния. Сироп растворяют .в хлороформе и чистят хроматографией на колонке 40 х 3 см, содержащей силикагель. Продукт элюируют, используя ступенчатый градиент хлороформа а смеси 10 Ъ метанола в хлороформе, и выделяют в соответствии с тонкослойным профилем отобранных фракций, получая соединение, молекулярный вес 597,7, (о/.) - 34,8 (С = 0,5 метанол) .
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 62,29;Н 7,25;N 11,72
СУ Н43 И 07
Найдено, Ъ :С 62,13;Н 7,24;Н 11,70
Г. L-тирозил-Р-аланил-глицил-NФ.» -пропил-L-фенилаланипамид, ацетат.
2О
50 бО б5
800 мг полученного продукта (1,34 ммоль) растворяют в 10 мл трифторуксусной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола. Смесь перемешивают при 0 C в течение 30 мин. Реакционную смесь сушат лиофилизацией. Твердое вещество растворяют в достаточном количестве водного буферного раствора .(1% пиридина и 0,5 Ъ уксусной кислоты), объем доводят до 10 мл; раствор падают на колонку размером 2,5 х 99 см с DEAE-Сефадексом A-25 (ацетат), который уравновешен тем же самым буфером. Элюат просматривают при длине волны 280 нм и соответствующие фракции объединяют и лиофилизуют. Повторная лиофилизация из 1 М раствора уксусной кислоты дает 655 мг соединения, (oL) — 11 0 (С = 0 5, 1 н. раствор ЙСР). Молекулярный вес 557,6.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 60,31;Н 7,05: М 12,56
С S НР9 И Оу
Найдено, Ъ :С 60,23;Н 6,98;И 12,49
Анализ аминокислот, Tyr 0,99, АЕа 1,00; ЬРУ 1,01, NH 0,96.
Пример 4. Получение L-тирозил-D-аланил-глицил-N -этил-L-Фенилаланиламида, ацетатная соль.
А. N -бутилоксикарбонил-N -этил-!
L-фенилаланин.
К 70 мл тетрагидрофурана добавляют 10,6 F (0,04 моль) И"-бутилоксикарбонил-Ь-фенилаланина. Полученную смесь добавляют по каплям в течение 30 мин к механически перемешиваемой суспензии 0,12 моль гидрида калия в 220 мл тетрагидрофурана и 0,5 г 18-храуи-6 эфира при 0 С в атмосфере азота. Смесь перемешивают дополнительно в течение 10 мин при 0 С. Затем по каплям в течение
20 мин добавляют раствор 19,4 мл (0,24 моль) иодистого этила в 40 мл тетрагидрофурана. Смесь выдерживают в течение 4 ч при 0 С. Добавляют еще
19,4 мл (0,24 моль) иодистого этила к смеси двумя равными порциями. Смесь перемешивают дополнительно 2 ч при
0 С и затем добавляют 10 мл ледяной уксусной кислоты.
После перемешивания в течение
10 мин смесь вливают на 400 мл измельченного льда. рН полученной водной фазы увеличивают до 8,0 добавлением 2 н. раствора гидроокиси натрия. Водную смесь дважды экстрагируют эфиром и затем подкисляют до рН 2,5 добавлением холодного 2 н. раствора соляной кислоты. Затем вод-. ную смесь экстрагируют этилацетатом, экстракт промывают водой, высушивают над сульфатом магния и выпаривают в вакууме до сиропообразного состояния. Сироп растворяют в
200 мл эфира и добавляют 8 мл (0,04 моль) DCHA. Осадок отфильтровывают и фильтрат экстрагируют 1,5 н. раствором лимонной кислоты и водой.
17
908246
Эфирный слой высушивают .над сульфатом магния и упаривают в вакууме, получают 4, 6 r ((339 9Ъ от теории) соединения.
Спект HNP: d (фенил)= 7,2;
/(Ме СОС-) =1,4.
Б. N -трет.-бутилоксикарбонилN -этил-L-фенилаланиламид. с
4,3 г полученного N -трет.-бутилоксикарбонил-N -этил-L-фенилаланила (О 0416 моль) растворяют в
l о
60 мл ДМФ. Смесь охлаждают до 0 С и добавляют к ней 3,0 г (0,0146 моль)
ДСС. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 0 С и затем 72 ч при комнатной температуре. Затем смесь охлаждают до 0 С и фильтруют.
Фильтрат концентрируют в вакууме до масла, которое повторно растворяют в этилацетате. Раствор экстрагируют
1 н. раствором бикарбоната натрия, водой, холодным 1,5 н. раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют, получая
3,33 г (91 Ъ от теории) соединения, (с .) - 101, 51 о (С = 1, метанол) .
Молекулярный вес 292,4.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 65,73;Н 8,27;N 9,58
С„6 Н24 и О
Найдено, Ъ: С 66, 03; Н 8, 13; N 9, 85.
В. N этил-L-фенилаланиламид, хлористоводородная соль.
3,5 r полученного соединения (11,95 моль) растворяют в 40 мл свежепригбтовленной уксусной кислоты, содержащей безводный хлористый водород (1 н. раствор) и 1,5 мл анизола и (С Н-) Я1Н. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин и затем вливают в эфир. Выпавший в осадок продукт отфильтровывают и высушивают, получают 2,6 г (96 Ъ от теории) соединения, т. пл. 276 — 277"C. Молекулярный вес 227,7.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:С 58,02;Н 7,08;N 12,30
С..., Н„ И ОСЕ
Найдено, Ъ :С 57,97;Н 7,26;N 12,54
Г. N òðåò.-бутилоксикарбонилL-тирозил-D-аланил-глицил-N этилd
L-фенилаланинамид.
К 50 мл ДИФ добавляют 1,14 г (0,005 моль) Б< -зтил-L-фенилаланиламида в виде хлористоводородной соо ли. Смесь охлаждают до 0 С и затем
:добавляют 2,95 г (0,005 моль) соли
DCHA N TðåT.-бутилоксикарбонилL-тирозил-D-аланил-глицина. Реакционную м ссу перемешивают при 0 С
5 мин и затем добавляют к ней 675 мг (0,005 моль) НВТ и 1,03 r (0,005моль, ДСС. Перемешивание продолжают при
0 С 6 5 ч и затем при комнатной температуре в течение 20 ч. Смесь ох.лаждают до 0 C и фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме до масла, которое снова растворяют в этилацетате, экстрагируют 1 н. раствором бикарбоната натрия, водой, холодным 1,5 н. раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают над сульфатом магйия и концентрируют в вакууме до масла.
Масло очищают хроматографически на колонке 3 х 40 см с силикагелем в хлороформе. Продукт элюируют, используя ступенчатый градиент хлороформа в смеси 15 Ъ метанола с хлороформом. Продукт выделяют согласно тонкослойному профилю отобранных фракций получают 1,13 г (39 Ъ от
25 о теории) соединения, (с1) — 21,0
15 (C = 0,5, метанол) . Молекулярный вес 583,7.
Элементный анализ:
Вычислено,::С 61,73;Н 7,08;N 12,0
С о Нр И О.7
2О Найдено, Ъ :С 60,35;Н 7;26;И 11,25
Д. L-Tèðoýèë-D-аланил-глицил,N -этил-Ь-фенилаланиламид, ацетат.
1 г полученного продукта (1,71 ммоль) растворяют в 20 мл трифтор25 уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл (С Н )э SiH. Сме=ь перемешивают при 0 С в течение 30мин и вливают в эфир, выпавший в осадок продукт отфильтровывают и высушивают (660 мг). Твердое вещество растворяют в небольшом количестве буферного водного раствора (1 Ъ пиридина и 0,05 Ъ уксусной кислоты), объем доводят до 10 мл и этот раствор подают на колонку 2,5 х 90 см с РЕАЕ- Сефадексом A-25 (ацетат) „ который уравновешивают предварительно с тем же самым буфером. Элюат просматривают при длине волны 280 нм и соответствующие фракции собирают
4О и лиофилизуют. Твердое вещество растворяют в 0,2 M растворе уксусной кислоты (10 мл) и. раствор чистят хроматографически на колонке 2,5х99см с Сефадексом G-10, который предварительно уравновешивают с тем же самым растворителем. Элюат просматривают при длине волны 280 нм и соответствующие фракции объединяют и лиофилизуют, получая 448 мг (48 Ъ от теории) соединения (с1.)л- 10,6
Д. 5 о (С = 0,5, 1 н. раствор PCl. ). Молекулярный вес 543,6.
Элементный анализ:
Вычислено,Ъ:C 59,65;Н 6,86;N 12,88 !
С27 Н3vN Найдено, Ъ :С 59,41;Н 7,26;Н 13,18 Анализ аминокислот :Tyr 1,03; АСа 0,99; Gfy. 0,97; NH> 0,98. Анестезирующая активность соединений Формулы 1 изучена в опыте с мышами на горячей пластине. Мышь помещают в вертикальный акриловый цилиндр, в .основании которого расположена горячая пластина, температура которой поддерживается рав 5 ной 52 С. Мышь получает подкожную 908246 t0 Таблица1 1 () Доза, мг/кг 3 10 0,3 114, 4+24, 4 33,2+2,2 48,1+7,6 26,6+1,7 31,4+3,1 33,3+2,2 101,7+15,9 33, 4+2, 2 32,0+2,7 28,2 0,9 28, 2+О, 9 26,9+3,1 ?9,4+2,7 L-Тирозил- 15 D-аланилглицил-N — 30 метил-L-фенилаланиламид, 60 ацетат 71,2+7,1 46,2+6,3 32, О+3, 5 15 -5 О+1,9 34,0+1,5 30,212,9 28, О+1, 7 120 63, 4+12,6 35,7+2,3 40,5 2,7 29 2+1,7 31,4 1,7 29,8+6,9 29,8 6,9 34, 8+2, 5 59, 4-10 0 43,4" 6,1 L-ТироэилР-аланилглицил-Ь-с1метилфенилаланиламид, ацетат 15 25,0 1,9 31,94.1,9 37,0-3,8 30, 1+3, 9 29,6+3,6 25,8+1 6 30,0+2,6 30,0+2,6 23,7+1,4 28, 0+1, 7 60.90 120 j20 инъекцию заданного количества испытуемого соединения, растворенного или суспендированного в соответствующем носителе. Выдерживают заданный промежуток времени после введения испытуемого соединения и затем мышь помещают qp поверхность горячей пластины. Затем записывают латентности двух отдельных явлений в секундах. Сначала измеряется латентность до тех пор, пока мышь не начнет лизать задние лапы, и затем измеряется латентность до момента, когда мышь прыгнет с горячей пластины. Вещество, которое проявляет анестезирующую активность, обеспечивает увеличение этих латентных периодов по сравнению с контрольными мышами, которым при инъекции вводили только,Время Соединение бегства Контроль мин носитель. Это должно происходить при величине дозы, которая не вызывает нарушения моторной координа. ции или выводит мышь из строя. В табл. 1 приведены латентности до момента лиэания задних лап, а в табл. 2 — латентности бегства прыжком. Критерий положительного анестезирующего эффекта состоит в следующем: латентность момента лизания задних лап или бегства прыжком должна быть равной или большей, чем средняя контрольная латентность плюс два còàíäàðòíûõ отклонения от среднего. Каждый результат, приведенный в табл. 1 и 2, представляет собой среднюю величину плюс-минус стандартное отклонение. 908246 ПРодолжение табл.1 Время бегств» мин Соединение Доза, мг/кг Контроль -4 Г Л 3 - 2б,4 -1,8 32,9+2,3 32,4+2,4 2б,1+1,7 58,1+5,1 35, 2+2, 7 30,2 2,7 32,04 2,7 42,2+3,9 54,2" 7,2 240,0+0 25,7+1,1 Таблица2 ) Время ! оегстеа,мин мг/к г 3 t 10 ! Контроль Соединение o,> ) 30 133,1 :!4,8 222,2 9,l 48,484,7 126,5+5,7 140,4- 19,0 62,1-9, ! 237,3 2,7 189>2 12>8 105 0+14, 2 110, 2 -9, 8! 5 89 25>>4 L-Тироэил-D-аланил-глицил-V. »>L метил-L-фенилаланилампд, ацетат 30 60,256,! 60 60 5-8,8 80, 5+8 8 2 126,2"14,7 l0-,0 8,1 73,7>+6,9! 5 62,7+9,1 б>9, 3 104,7 7,0 »> 152,4117,5 226 43,8 3,5 ° Г b > l!2,2 21,2 144,3 !3,2! 5 62,9 10,3 2! 8, 3 16,4 Ь-Тироэил-D-а анил-глицил.-L 1- 0 метил- "..сннлаланн;. амид, .! тат .> 73,0+14,6 73,8014,6 89,4+!6,7 130 7тl5 8 63,7 9 1 84,35! 3 2 59,2 5,8 (О 89,417,5 104>1%5>8 90 59,255,8 120 79,4 5,7 120 69,8+4,2! 126,4-11,7 L- Гироэил-D-ала! 5 6.2,7+7, 5 нил-глицил-Yr -нпропил-L-фенилала15 ""5,6 5,7 ниламид, ацетат 121>2+15,7 185, 1115, 0 218> 4 16,2 240,0 0 L-Тиро"ил-D-аланил-глицин- 1 — ;> этил-Ь-фенилаланиламид, ацетат 15 63,8 7>7 iS 79.1+7,7 П р и м е и а н и с. !!ндекси — 5> 1-3 каэь1вают что реэультат эначим с достоверностьв р < 0,001! Р < 0,05 и Р < 0,05, соответственно. L-ТирозилD-аланилглицил-N н-пропил-1— Фенилаланиламид,ацетат L- 1 и р .> з илD-аланилО> глицил-N этил-1,-фенилаланиламил, ацетат 118,9 15, У 120,6+14,2 155,0417,9 237,6+2,4 908246 Формула изобретения О г с где Ь и Rg означают хиральность; первичный алкил C С3; водород или первичный алкил C С3; водород или первичный алкил С ; Составитель В.Волкова Редактор Г.Кацалап Техред А. Ач Корректор М.Пожо Заказ 633/75 Тираж 448 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5 Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 41. Способ получения производных тетрапвптидов формулы l (с) (a) р Й н-сн- -w-сн-с-ин-сн; с-и- с-z I I Š— СОЙН (при условии, когда один из радикалов к и Q3первичный алкил, второй водород), или их солей, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что защищенные соединения, соответствующие производным тетрапептидов формулы I деблокируют обработкой в кислой среде. 2. Способ по п. 1, о т л и ч а юfg шийся тем, что деблокирование проводят в трифторуксусной кислоте. 3. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что деблокирование проводят в ледяной уксусной кислоте, насыщенной газообразным НСС . Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Шредер Э., Любке К. Пептиды, ч. 1, 1967, М., Мир, с. 112.
