Способ замораживания спермы птиц

 

(72) Авторы изобретения

Н; И. Сахацкий и В. И. Андреев

Украинский научно-исследовательский институт пти (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ПТИЦ

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйствениых животных, в частности к способам замораживания спермь, птиц.

Известен способ замораживания спермы птиц, включающий разбавление спермы, хранение ее в анаэробных условиях, замораживание в парах жидкого азота и последующую оксигенацию при оттаивании 11).

Известен также способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, добавляют в разбавленную сперму этиленгликоль, затем ставят в холодильник при

2 — 4 С на эквилибрацию, которая продолжается 50 — 70 мин. Подготовленную к замораживанию сперму накалывают на поверхность фторопластовой пластины, предварительно охлажденной до -60 — -75 C. При этом капельки спермы, замерзая, образуют гранулы объемом 0,10 — 0,15 мл. Выдерживают пластину с гранулами в парах жидкого азота 55—

65 с, затем опускают в жидкий азот для быстрого (250 — 350 град в мнн) охлаждения до -196 С (2) .

Однако замораживание . спермы известным способом не обеспечивает должное сохранение биологической полноценности и оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы по всем замораживаемым гранулам. Практически невозможно одновременно раскащть пипеткой на охлажденную фторопластовую пластину весь объем замораживаемой спер10 мы, поэтому только часть замораживаемой спермы оказывается в пределах допустимой продолжительности ее выдержки в парах жидкого азота (55 — 65 с). Подготовка спермы

15 к замораживанию не совершенна, так как разбавление спермы проводится при комнатной температуре, когда спермии чувствительны к температурному и осмотическому шокам, и в два приема (разбавление, затем введение криопротектора), что трудоемко.

Низкая производительность труда, связанная с необходимостью сбора после замораживания гранул в посуду для их хранения, трудна маркировка спермы от отдельных произ912165

1О

3 водителей, а также сушествует воэможность микробной загрязненности необлицованных гранул в процессе замораживания и хранения.

1.1елью изобретения является повышение активности и оплодотворяющей способности сне рмиев.

Поставленная цель достигается тем, что сперму после эквилибрации померцают в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,1 — 2,0 мл в каждую, а замораживание осуществляют со скоростью 40—

60 град в мин до -98 — -127 С, затем со скоростью 8 — 15 град в мин до -196 С.

Пример. Свежеполученную от гусаков сперму охлаждают до 0 С в течение 3—

10 мин, разбавляют охлажденной до этой же температуры защитной средой, содержащей 15% этиленгликоля, и эквилибрируют в течение 30 — 90 мин. После эквилибрации сперму переносят в тонкостенные металлические кюветы, например, из алюминия в количестве не более 2,0 мл в каждую. Высота столбика спермы в кювете при этом не более 2,2 мм. При увеличении объема спермы, замораживаемой в одной кювете, т.е. при высоте столбика спермы более 2,2 мм, результаты ее низкотемпературной консервации ухудшаются. Толщина стенок кювет

0,2 мм, внутренний диаметр кюветы 25 мм.

Кюветы со спермой помещают на металлическую пластину, которую затем 1выдерживают в парах жидкого азота так, чтобы скорость снижения температуры спермы составляла 40 — 60 град в мин при охлаждении qo -98 — -127 С, а затем 8 — 15 град в мин при охлаждении до -196 С. Скорость замораживания контролируют с помощью любого предназначенного для этих целей прибора. например.КГП-4 с подсоединенной к нему 13 качестве датчика термопарой, опущенной в одну из кювет. Удобнее же использовать сушествуюгцие программные устройства для замораживания спермы.

После достижения температуры жидкого азота (-196 С) замороженную сперму в кюветах переносят на хранение в сосуд Пьюара. Хранят замороженную сперму в течение длительного времени. В случае возникновения потребности в ней, извлекают необходимое кол .чество кювет и оттаивают в воде, подогретой до 80 — 85 С. В процессе оттаивания прн легком встряхивании кювет хорошо просматривается физическое состояние их содержимого, т.е. момент перехода замороженной спермы из твердой фазы в жид.кую. В это время кюветы извлекают из воды, оценивают замороженно-оттаянпую сперму по активности спермиев и используют для оссменения.

Сравнительные данные активности и оплодотворяннцей способности замороженно-оттаянной спермы, обработанной известным и предлагаемым способами, представлены в табл. 1, Активность оттаянных спермиев в зависимости от скорости замораживания представлена в табл, 2.

Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о том, что предлагаемый способ. достоверно (P ) 0,999) превосходит известный по оплодотворенности яиц (на 30,2%) и выводу гусят (на 22,8%) .. Биологическая полноценность (активность1 сцермиев увеличивается на 0,5 балла и составляет 5,5баллов.

Результаты исследований, представленные в табл, 2, свидетельствуют о том, что при скорости охлаждения 40 — 60 град в мин критическая зона наступает после охлаждения спермы до -98 — -127 С, т.е, снижать далее температуру спермы с этой же скоростью нецелесообразно, так как в этом случае неминуемы большие потери биологической полноценности спермиев. Необходим переход на другую скорость, более медленную, критическая зона которой уже пройдена (габл. 3). Оптимальным является переход на скорость 10 град в мин с допустимыми пределами колебания от 8 до 15 град в мин.

Влияние температуры оттаивания замороженной спермы гусаков па активность спермиев отображается в табл. 4.

Результаты исследований, представленные в табл. 4, свидетельствуют о том, что замороженную сперму следует оттаивать при

80 — 85 С.

Исследования по оптимизации количества спермы, помещаемой в одну кювету, показывают, что высокая активность замороженнооттаянных спермиев (в среднем 5,5 баллов) достигается при условии замораживания в одной кювете 0,1 — 2,0 мл спермы. При увеличении объема спермы более 2,0 мл активность замороженно-оттаянных спермиев снижается до 4 — 2 баллов.

Использование предлагаемого способа замораживания спермы по сравнению с известным обеспечивает повышение биологической полноценности (до 5,5 баллов) и оплодотворяющей способности замороженно-оттаянной спермы (на примере спермы гусаков: оплодотворенность яиц увеличивается на 30,2%, вывод гусят — на 22,8%), в частности предлагаемый способ позволяет получать дополнительно от каждой тысячи инкубируемых яиц

228 голов суточных гусят, а также предлагаемый способ обеспечивает повышение производительности труда, простоту осуществления.

912! 65

Таблица 1

Оплодотворенность, яиц> %

Активность спермиев, баллы

Выводи мость яиц, %

Вывод гусят, Способ замораживания т Проинкубиро вано яиц. (шт.

% i

71,2

Известный

72,8

Предлагаемый

53,2

73,0

5,5+0,11 126

Таблица 2

Замораживание спермы до температуры, С

Активность спермиев, баллы, при скорости замораживания, град в мин

40 50

8 10 15 20 30 60

7,0

7,0

6,7

-19,6

7.п

6,1

7,0

-29,4

5,5

7,0

6,0

6,1

5,8

-39,2

-41,2

60 70

6,3

6,0

5,4

4,5

-43,1

4,4

6,1

3,7

-47,0

5,0

-49,0

5,0 6,0

6,0 6,0

5,5

6,0

2,0

3,4

2,5

-58,8

5,0

6,0

7,0

2,5

3,0

3,0

-78,4

5,0

6,0

-82,3

5,0

6,5

-86,2

5.0

4,0

-90,2

6,0

1,5

3,3 3,0

1,5

-98,0

-107,2

4,0

2,0

4,5

2,0

2,0

2,0

1,5

2,0

-117,6

4,0

-127,4

3,0

3,0

1,7

-137.2

4,0

4,0

- 147,0

2,0 .3,0

2,5

3,0

2,3

1,0

-176,4

2,3 2,0 2,0

2,0 1,0

2,5

4,0

1,0

-196,0

5,0+0,08 138 42,8 30,4

6,0 6.0

4,0 6,0

3,0 6,0

3,0 6,0

3 0 5 0

3,0 3,0

912165

Таблица 3

Скорость замораживания спермы, град в мин ктивность сне рмиев, баллы от-98 — -127 С до -196 С от О до -98 — -127 С

40-60

5,0 + 025

40-60

5,5 + 0,13

5,0 + 0,11

40 — 60

40-60

4,0 + 0,20

40-60

3,3 + 0,18

3,5 + +0,09

40 — 60

350

Таблица 4

Температура оттаивания, С ктивность спе миев, баллы

40 — 50

4,3+0,13

4,5+0,18

90 -100

3,5+0,08

20-30

5,7+0,12

80-85

60--65

3,7+0,10

Π— 10

5,4+0,12

Способ замораживания спермы птиц, преимущественно гусаков, включающий разбавлеФ ние, эквилибрацию и замораживание спермы в парах жидкого азота, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повьппения активности и оплодотворяющей способности спермиев, сперму после эквилибрации помещают в тонкостенные металлическне кюветы

Составитель А. Филиппова

Техред С.Мигунова Корректор Н. Стец

Редактор Л. Плисак

Заказ 1196/5

Тираж 717

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по .делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужтород, ул., Проектная, 4

Формула изобретения

Температура Активность спероттаивания, миев, баллы С в количестве 0,1 — 2,0 мл в каждую, а замораживание осуществляют со скоростью 40—

60 град в мин до -98 — -127 С, затем со скоростью 8 — 15 град в мин до - 196 С.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР N 691132, кл. А 61 0 7/02, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР N 656621, кл. А 61 D 7/02, 1976.