Способ замораживания спермы гусей

 

Союз Советских

Социалистических

Реся

ОП ИСАНИЕ „„9

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6I ) Дополнительное к авт. свил-ву— (22)Заявлено 21.05.81 (21) 3291342/30-15 с присоелинением заявки 1те (23) Прноритет— (5! )М. Кл.

A 61 D 7/О?

Гооудэротеенный комитет

СССР

II0 делам изобретений н открытий

Опубликовано 15. 10. 82 ° Бюллетень М 38

Дата опубликования описания 1 5 . 1 0 .82 (53) УДК636. 082.

453..5(088.8) -P. Г. Царенко, А. Д. I:óðáàòoâ и Т. Г. Мавра ина "- -" - " . "j

1, йй я -""-.. (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт и генетики сельскохозяйственных животных (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЗАМОРА1 .01ВАНИЛ СПЕРМЫ ГУСЕЙ

Изобретение относится к разве дению сельскохозяйственных животных, а именно, к способам замораживания спермы гусей.

Известен способ замораживания спермы гусей, заключающийся в том, что сперму высокой активности разбавляют средой для замораживания в соотношении 1:1 и добавляют криопротектор этиленгликоль в количестве 1Оу в конечной концентрации. Раз бавление спермы и добавление этилен. гликоля проводят при комнатной температуре. Затем ставят в холодильо ник при 2-4 С на эквилибрацию, которая продолжается 1 ч. Сперму, подготовленную для замораживания, набирают охлажденными пипетками и накапывают в виде гранул объемом

0,1-0,15 мл на поверхность фторопластовой пластины, предварительно о охлажденной до 60-75 С. Гранулы выдерживают на пластине в течение 20 с. За это время сперма охлаждается до 10-12 С. Далее пластину с гранулами опускают в пары азота на

1 мин, сперма охлаждается до 40-.

50 С, затем гранулы опускают в жидо кий азот. Оттаивание гранул производят в пенициллиновых флаконах в водяной бане при 70-75 С в течение

7-10 с. Оплодотворенность яиц гусынь

Io осемененных спермой, замороженной по указанному способу была в весенний период 78,53, а осенью 44,53, Выводимость гусят от числа заложенных яиц была 64,2 и 30,53 соответственно 1,1 ).

Недостатками этого способа являют,ся сравнительно низкая оплодотворенность яиц и низкая выводимость гусят.

Цель изобретения — повышение сох о ранности биологической полноценности спермы после замораживания.

Поставленная цель достигается тем, что эквилибрацию спермы or..y50

3 . 96 ществляют в два этапа, вначале пе ред добавлением криопротектора в течение 20-30 мин, а затем после добавления криопротектора в течение 10-15 мин, причем накапывание спермы проводят на фторопластовую пластину, имеющую температуру 185190 С в течение 2-3 мин, а затем пластину с гранулами помещают s жидкий азот на 1-.2 мин. п р и м е р, Сперму гусаков высокой активности .разбавляют в соотг ношении 1:3 одной из сред, предназначенных для замораживания, и ставят в холодильник, где поддерживается температура 2-4 С.- Флако-ны закрывают резиновой пробкой. Через 30 мин в охлажденную сперму добавляют охлажденный этиленгликоль или диметилсульфоксид в количестве 53-ной конечной концентрации. Со.держание флакона быстро перемешивают круговыми движениями и ставят в холодильник еще на 10 мин. После этого флакон вынимают из холодиль. ника, определяют активность спермы после эквилибрации и, если активность спермы оказалась не ниже 4-5 баллов, ее замораживают. Для этого сперму подготовленную к замораживанию наби рают в остуженную пипетку или шприц и накапывают по 0,1-0,15 мл на фторо-, пластовую пластину, предварительно охлажденную в жидком хладагенте до

-196 С, а затем поднимают пластину

d на уровень 1,5 см. Температура пласти ны в начале накапывания должна быть

-185 С, такую температуру она приобретает через 15 с, экспозиция пластины в этом положении должна быть

2,5 мин, а скорость охлаждения 0,7 с

Затем пластину с гранулами погружают в жидкий азот, в котором она на ходится 1,5 мин, обеспечивая скорость охлаждения гранул 3,1 /с. После выхо да пластины из азота гранулы собирают пинцетом, помещая их в пенициллиновый флакон, последний ставят в контейнер сосуда Дьюара, погружая в жидкий азот или другой жидкий хладагент, Для искусственного осеменения гусынь .флаконы с гранулами спер429 4

5 мы достают из сосуда Дьюара и отогре вают в водяной бане, имеющей температуру 40-80 С, периодически встряо хивая сперму ° Держат флаконы в воде до полного оттаивания гранул. Затем быстро оценивают активность спер мы и осеменяют гусынь.

Результаты искусственного осемене ния гусынь спермой замороженно-от10 таянной представлены в таблице, показывают, что искусственное осеменение гусынь спермой, замороженнооттаянной по предлагаемому способу, обеспечивает получение более высокой

15 оплодотворенности яиц и выводимости . гусят, чем при использовании спермы,. замороженной по способу прототипа.

Так,оплодотворенность яиц гусынь в первом случае была при использоващ нии инозитол-глюкозной среды от 56,3 до 86,73, а вывод гусят от числа яиц, заложенных на инкубацию,от 45,8 до 67,7i тогда как при использовании спермы, замороженной по способу-npoz5 тотипу, оплодотворенность яиц. была лишь. 52,6-70,2, а выводимость от

38,3 до 44,Я. Разница была достоверна по второму порогу, хотя опыты были проведены в сравнимых условиях

З на птицах-аналогах., ! !

Научное и экономическое значение предлагаемого способа состоит в том, что он обеспечивает лучшую опля дотворенность яиц гусынь при исполь" зовании замороженно-оттаянной спермы чем ранее существовавшие способы;

Консервация спермы гусей ставит селекционную работу на более высокий уровень, так как дает возможность длительного хранения спермы самцов улучшателей и тем самым позволяет использовать ее тогда, когда селекционеру она нужна. Кроме того, метод низкотемпературной консервации дает возможность сохранения гено фонда гусей локальных пород, которым грозит уничтожение из-за их неконкурентноспособности, но которые могут сыграть в дальнейшем большую роль в выведении новых пород и линий.

965429

I о (6

<о а о с =с с s

О 6С

ОХо

2 о х

C Х

6l

С(CL

О1

О1

Ю аА (Z(л

Ю аА

Ш

CA л о

l

=(1

X 1

К I

1 (6 1

1 о

Х 1

3 1

I- I

О

I I.х

2 х

Э

CL о

61

Iо а о с

C о л аА (Z(л л

М\

OO о з I

l I

Ф I (X it

О !

61 1.

2 I

6l 1

1 д Р !

1 х.

2 Я

Z X

Z =С

Э Ф

% IO о о с с (6 Z л

<С\

С4 л л

-з

1 1

I 1 Z

Cl

01

1

О1 л сп о э с а

l= О

О (6 (о Р а х

1(Z

1 Х х

1 о х

r Z

Ф Э

m М

1 r» л

I х

00 -6 м

СЧ СЧ о =т

S Х

:7 %

l

1

I 1

1

1 !

I

1

I

1

I

t

1

1

1 (1

1

1

1 ! !

1

t .1 1

t

l !

1

1

1

I

I (Е

CL

Э

v с

Э

1X (6 (6 (О (б (6

С(I о

Я с а

1 ( (X о

Z о

X! (6 I о а х с

Q ( с о ! <© (- o

Х Z (C (б S (6 о

Z (C ((t

O(6O

S Z

I 1 ! . I (C

Ф

6l о а

Э

X: о с а (Z о

Ы с о

С1 (Z о с о а

I- 13 Z с о о

l

l

1

Б

C (6 с < ,а а с о

Ъ

<с о

lМ

C о

lЭ

С) 1

1.

1

1

I

I

1

I

1

1

I

I

1

1

1

1

1

1

1

I

1

1

1

1 !

I (1

I

I .< !

1 !

1

I !

l

I (.(Ъ

OO

СО OO (Zl

1 О -! м л л

1 о

S O с

S я а)х (О (О S

r Х д

I- ((< (6 о (c о >ь (X.с л(о

zzv

O (6 S

S Ф ао х

aomx

Л. л в со о Ф

Ф C 3

o ox

СО м (ц л л о

00 I

;(< с о

Са

<2 Z с о

О У о л О (A

00 Ф ( о

ca .

I- I2 х с о о м (D о

OCt

01

)

) ОЪ

О1 ОЪ л о о

С4 ъО л °

° aA

OC(Щ о м

00 00 ю м

-а л

° — 00 аА аА мъ л л » К, )

0О Л

OO СЧ л л а о ъФ l

М . О л л ъО (4 а (A

О с о

Са

<- . <Л Z с о о

I

1

1

I!

t

l

1

1, <, 1 ((О о о

< о с о

О

Э (6 (6 C

1 (6 Iса О

Ф О а а(с с

О >

I.CIO о

6; O

1 Ф О

Z C х и

I XO

О C

1 а

О (С

X (6 (6 Z

1 "K (6 О

Х а о

1 Ф X! С 6<

O (6

1 х (6 (6 с X с а

>(Ф а с

X X

1 Б (6

Z C с

2i 0

С CL.

< о

I х х

Ф Ф

l,O.V (6 6(О О

CQ C(< ((К (« (Of

7

Формула изобретения

Составитель А. Филиппова

Редактор М. Бандура Техред А.Ач (орректор Н Буряк

Заказ 7725/3 .Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Н-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ замораживания спермы гусей, включающий разбавление спермы, добавление криопроектора, эквилибра цию, накапывание спермы на фгоропластовую пластину для образования гранул и помещение гранул замороженной спермы в жидкий азот, о тл и ч а ю шийся тем, что. с целью повышения сохранности биологической полноценности спермы после замораживания, эквилибрацию спермы ,осуществляют в два этапа, вначале

965429 8

1перед добавлением криопротектора в течение 20-30 мин, а затем после добавления криопротектора в течение 10-15 мин, причем накапывание спермы проводят на фторопластовую пластину, имеющую температуру

185-190 С, в течение 2-3 мин, а затем пластину с гранулами помещают в жидкий азот на 1-2 мин. о

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.

1, Авторское свидетельство СССР 65662 1, кл. А 6 1 0 7/02, 1976.