Способ определения направленности течения циррозов печени

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союэ Советскии

Сециалистическик

Республик рч976959 (61) Дополнительное к авт. свид-ву(51) М. Кп.э

A 61 В 10/00 (22) Заявлено 220880 (21) 3212275/28-13 с присоединением заявки М—

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет— (Щ УДК 61 6 . 36 (088. 8) Опубликовано 30.11.82. Бюллетень М 44

Дата опубликования описания 30.11.82 (72) Авторы изобретения

T .A Блинова, С.А. Рулева, Г.В. Жарикова в T.В". 01Яййэзтеве=

Горьковский научно-исследовательский инс(титут эпидемиологии и микробиологии t (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРАВЛЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ЦИРРОЗОВ.

ПЕЧЕНИ

Изобретение относится к медициньа именно к гепатологии.

Известен способ определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически E1).

Однако известный способ является длительным и трудоемким.

Цель изобретения — ускорение анализа.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически, определяют активность кислой ДЙК-азы и при снижении ее активности относительно нормы определяют тяжелое течение заболевания.

Способ осуществляется следующим образом.

В микропробирку вносят 20 мкл сыворотки крови, 20 мкл ацетатного буфера рН 5,. 0,120 мл раствора ДНК (1 мг на 1 мл ацетатного буфера) .

Смесь инкубируют 3 ч при 37оС в присутствии 20 мкл 1,6 М раствора

KCЙ. После инкубации добавляют

160 мкл 0,5 н. раствора HCf04 . Содержимое отстаивают 25 мин в холоде, а затем центрифугируют при 4000 об/мин

20 мин. Оптическую плотность измеряют при длине волны 260 нм на спектрофотометре против контрольного раствора, состоящего иэ 160 мкл ацетатного буфера и 160 мкл 0,5 н. раствора

НС10, . Активность фермента выражают

1О в микромолях аденозинмонофосфата, освобожденного в результате гидролиза ДНК за 1 ч инкубации, на 100 мл сыворотки крови. Величина ферментативной активности кислой ДНК-азы ниже 70 мкМ АМФ/ч свидетельствует о тяжелом течении цирроза печени.

С целью установления прогностического значения кислой ДНК-азы активность фермента была определена в сыворотке крови 24 больных с клиническими признаками цирроза печени.

Диагноз цирроза ставился на основании тщательно собранного анамнеза, наличия в прошлом перенесенного вирусного гепатита и комплекса клиниколабораторных и инструментальных методов исследования. Все больные поступали в клинику в период обострения патологического процесса. Активность кислой ДНК-аэы определялась

3О при поступлении больного в стационар

076959 и 3-4 раза в динамике заболевания.

В табл. 1 представлены данные, свидетельствующие о величине активности кислой ДНК-аэы в периоде обострения паталогического процесса.

Как следует из полученных результатов, выявляются существенные четкие различия в величинах активности кислой ДНК-азы у больных циррозом печени. Дальнейшее наблюдение эа больными позволило выявить аналогичную разницу. Как выяснилось, у больных, в сыворотке которых величина активности кислой ДНК-азы колебалась от полного отсутствия в сыворотке до 70 мкМ АМФ/ч, в среднем 31,7 +

+6,8 мкМ АМФ/ч, цирроз был выраженно активный с декомпенсированной печеночно-клеточной недостаточностью.

Течение цирроза было неблагоприятным и у 4 больных он закончился летальным исходом.

Основные клинико-лабораторные показатели, используемые для оценки тяжести цирроза печени, представлены в табл. 2.

Сравнительный анализ представленных параметров у больных двух групп показал, что такие клинические симптомы и лабораторные показатели, как слабость, похудание, повышение температуры, изменения со стороны крови, СОЭ, увеличение печени, селезенки, наличие отеков и асцита не могут в полной мере служить показателями тяжести цирроза, ибо они зависят от психоневрологического статуса больного, наличия сопутствующих заболеваний и др. Количественное определение билирубина в сыворотке крови, особенно его связанной фракции, широко используется в гепатологической практике для оценки желчевыделительной функции печени и степени печеночно-клеточной недостаточности. Однако изменение билирубина в сыворотке не отражает белково-синтетическую фракцию печени.

Между тем, именно при циррозах происходят значительные нарушения синтеза белка гепатоцитами. Кроме того, при циррозах нередко наблюдается синдром холестаза с характерными клинико-биохимическими проявлениями. При этом повышение билирубина в сыворотке крови может быть не адекватно общему состоянию больного к другим биохимическим показателям.

Кроме того, в 153 случаев цирроз может протекать без желтухи. В связи с этим, определение билирубина в сыворотке крови для оценки тяжести цирроза печени используется лишь в комплексе с другими клинико-лабораторными показателями. В настоящее время для определения тяжести цирроза печени рекомендуется комплексное определение в сыворотке крови актив

5

10 !

60 ности аланинаминотрансфераэы, уровня альбуминов и гамма"глобулинов. Это положение было подтверждено результатами, представленными в табл. 2.

Исследования показали, что активность аланийаминотрансфераэы достоверно различается между сравниваемыми группами. Однако разница не столь значительна (в 1,5 раза), а степень достоверности Р = 0,028.

Несмотря на резко выраженные изменения в соотношении белков сыворотки (уменьшение альбуминов и увеличение глобулинов) достоверных различий в содержании их между группами выявлено не было.

Изменения активности органоспецифических ферментов печени, уроканиназы и фруктоэо-1-фосфвтальдолазы при циррозах незначительны и мало отличаются у больных обеих групп. °

Эти ферментные тесты более информативны для оценки тяжести вирусного гепатита.

Активность кислой ДНК-азы с большой достоверностью различается у больных обеих групп (Р = 0,001).

Причем эти различия в большей степени выражены, чем для аланинаминотрансферазы. Разница в 9 раэ для

ДНК-азы против 1,8 раза для аланинаминотрансферазы. При ухудшении состояния больного активность фермента, как правило, снижалась. Снижение активности кислой ДНК-азы предшествовало появлению клинических признаков, свидетельствующих об ухудшении в состоянии больного, и изменению других биохимических показателей.

Пример . Больная М. 57 лет.

Поступила в клинику с жалобами на слабость, головокружения, отсутствие аппетита, боли в правом подреберье, желтушность кожи и склер. При поступлении состояние больной тяжелое. Больная интенсивно желтая, печень пальпируется неотчетливо у края реберной дуги. Билирубин общий в сыворотке

261,6 мкМ/л, связанный 241,1 мкМ/л.

Активность аланинаминотрансфераэы в пределах нормы, уроканиназа в сыворотке отсутствует, активность фруктоэо-1-фосфальдолазы 1,2 ед.

Количество альбумина снижено до

323,0 г/л гамма-глобулинов увеличено до 345 г/л, СОЭ вЂ” 43 мм/ч, в формуле крови изменений нет. Активность кислой ДНК-азы при поступлении 70 мкМ АМФ/ч.

Через неделю состояние больной не изменилось, но в самочувствии наступило некоторое улучшение: появился аппетит, улучшился сон. Количество билирубина в сыворотке оставалось высоким 300 мкМ/л общий;

260,7 мкМ/л связанный. Активность аланинаминотрансферазы увеличилась незначительно — до 1,16 мкМ пир, а

976959

Таблица 1

Величина активности кислой ДНК-аэы в сыворотке крови больных при благоприятном и неблагоприятном прогнозе цирроза печени

Цирроз с благоприятным прогнозом, Цирроз с неблагоприятным прогнозом, мкИ АМФ/ч

Больной

Больной мкМ АМФ/ч

33,3

56,6

0,0

70,0

6,6

33,3

70,0

20,0

30,0

10

33,3

13,3

14,2

12

281,0 5,9

31, 7+б, 8 изменений в содержании белков сыворотки и .активности органоспецифических ферментов не произошло. В то же время активность кислой ДНК-аэы снизилась до 30 мкМ АМФ/ч.

Еще через неделю развилась резкая печеночно-клеточная недостаточность.

Больная впала в коматозное состояние.

Активность кислой ДНК-аэы на протяжении комы:

19.01.78 r, — отсутствует

22.01.12-00 — 30 мкМ/АИФ/ч

22.01.16-00 — отсутствует

22,01.22-00 — отсутствует

Активность аланинаминотрансферазы, уроканинаэы и фруктоэо-1-фосфатальдолазы в пределах нормы, 23.01 в

1-05 больная погибла.

Диагноз: цирроз печени смешанногс типа, выраженно активный с декомленсированной печеночно-клеточной недостаточностью, осложненной субмассивным некрозом печени.

Предлегаемый способ оценки тяжести цирроза печени позволяет многократно обследователь больного с использованием небольшого количества

10 крови для.анализа (0,04 мл) и избегнуть проведения биопсии, показанной не всем больным, является нетрудоемким и быстро выполнимым (в течение

5-6 ч ). Данный способ оценки тяжес)5 ти цирроза является высокочувствительным, в 100% случаев дает правильные результаты.

216,7

175,0

276,6

181,6

5.86, б

266,6

325,0

226,6

356,6

408,3

186,7

176,6 .

976959

Клинические симптомы, лабораторные показатели

Слабость

Резко выражена

Выражена

У 7 больных

Похудание

У 5 больных

Субфебрильная температура

У 8 больных У 4 больных

Увеличена у всех больных до 4 см

Увеличена у 10 больных до 4 см

Печень

Увеличена у 2 больных

Не увеличена

Селезенка

У 4 больных

-У 2 больных

Асцит

Билирубин общий (до

17,1 мкМ/л) 230,5+38,6

107,7+25,6

0,016

Билирубин прямой (до

11 9 мкМ/л) 194,1+25,6

90,6+9,8

0,002

Ала ни нами нотрансфераза (до 0,7 мкМ пир.а) 0,028

1,88+0,24

1,17+0,16

Фруктозс — 1-фосфатальдолаза (до 1 усл.ед) 3,7+1,0

2,7+0,8

Недостаточна

Уроканиназа (отс.) У 10 отс., у 2 до

0,035 мкМ урок.а

У 10 отс., у 2 до

0,015 мкМ урок.а

Альбумины570-650 г/л

370+34 г/л у — Гло були ны

30-50 г/л

88+6,2 r/ë 78+7,1 г/л

То же

1 — Гдобулины

90 г/л

102+6,4 г/л 97+9,2 г/л

3. -Глобулины

110 г/л

140+12,1 г/л 128+9,9 г/л

Цирроз выраженно активный с декомпенсированной печеночноклеточной недостаточностью

Таблица 2

Цирроз умеренно активный с субкомпенсированной печеночноклеточной недостаточностью

386+41,5 г/л Недостаточна

976959

Продолжение табЛ 2

Y - Гло були ны

145-200 г/л

324+42,8 г/л 281+35,4 г/л

4136000+

+3991 в мм Эритроциты

4504000+

+3600 в мм

13,0+0,4 г/Ъ

11,8+1,3 г/Ъ

7500+870 в мм

Гемоглобин

8981+860 в мм

Лейкоциты

Кислая ДНКаза (124,4+ 31,7+6,8

+3,5 мкМ ЛМФ/ч) 281+5,9

0,001

Формула изобретения

Составитель Н. Хрусталева

Редактор Л, Пчелинская Техред Т.Фанта

Корректор Н. Король

Заказ 9048/5 Тираж 714

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, П-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ определения направленности течения циррозов печени путем определения фермента в сыворотке крови спектрофотометрически, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью ускорения анализа, определяют активность кислой ДНК-азы и при снижении ее активности относительно нормы определяют тяжелое. течение заболеванйя.

Источники информации, 25 принятые во внимание при экспертизе

1. Лвторское свидетельство СССР, Р 845336, кл. A 61 В 10/00, 1977 (прототип).