Способ определения сахара в крови

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 05.05. 80 (21) 2912350/28-13 (31) М.КП. спрмсоединеннемэаявки Нов

G О 1 N 3 3/48

Государственный комнтет

СССР ио деяам нзобретеннй н открытнй (23) Приоритет

Опубликовано 23,12,82. Бюллетень Йо 47

Дата опубликования описания 2312.82 (33) УДКа612. 07 (088.8) /

П.М.Бабаскин

/ i, Психиатрическая клиническая больница,й 1 :-::, . (им.П.П.Кащенко (72) Автор изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ CAXAPA В КРОВИ!

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в клинике.

Известен способ определения сахара в крови путем осаждения гликогена этанолом и обработки осадка серной кислотой. Образовавшуюся глюкозу фосфорилируют АТФ с ферментом гексокиназы с последующей обработкой АДФ. Количество глюкозы определяют по изменению содержания НАД. Н о (1 3Однако известный способ трудоемок и не обеспечивает высокой точности (возможны ошибки «+ 15-20%) .

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения сахара в крови путем получения беэбелкового фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и фотометрии образовавшегося окрашенного раствора (23.

Однако известный способ не обеспечивает высокой точности, трудоемок и требует большого расхода дефицитных реактивов.

Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа.

Цель достигается тем, что согласно способу определения .сахара в крови путем получения беэбелкового фильтрата ее, обработки последнего антронрвым реактивом и фотометрии образовав" шегося окрашенного раствора, до внесения антронового реактива безбелковый фильтрат крови обрабатывают серной кислотой.

Пример. В центрифужную пробирку наливают 0,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ) и сюда

10 же вносят О, 1 мл исследуемой кациллярной крови, смешивают и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин.

Надосадочную жидкость в количестве

0,5 мл (соответствует 0,05 мл крови) .переносят в обыкновенную пробирку, приливают сюда 1 мп концентрированной серной кислоты и 2 мл антронового индикатора (реактив готовят путем смешивания 34 мл дистиллированной воды

2() с 66 мл концентрированной серной кислоты и растворения в этой смесй

50 мг антрона и 1 г. тиомочевины, реактив хранят в холодильнике). Содержимое опытной пробирки смешивают и помещают на 10 мин в кипящую водяную баню, затем охлаждают до комнатной температуры и колориметрируют на ФЭКе с красным светофильтром в кюветах с рабочей шириной 5 мм. Вместо компенсационной жидкости берут контрольный раствор, который готовят так же, как

983541

Про- Стандартбир- ный растка,9 вор,мл

Добавленная вода, МП

Показания

ФЭКН-57 (в экстинкциях) Глюкоза в пробе, мг

0,1

0,4

0,10

0,035

0,2

0,3

0,07

0,20

0,2

0,105

0,3

0,30

0, 1

0,14

0,40

0,4

0,175

5 0,5

0,50

Формула изобретения опытную пробу, только вместо крови берут 0,5 мп 5%-ного раствора.

Расчет концентрации сахара в исследуемой крови проводят по данным стандартного раствора глюкозы, который обрабатывают так же, как опытную пробу.

Пример построения калибровочной таблицы.

Иэ чистой и просушенной до посто- янного веса глюкозы готовят стандарт- 30 ный раствор, который содержит в 1 мп

0,35 мг глюкозы.

Берут 5 обыкновенных пробирок, в первую вводят 0,1 мл стандартного раствора глюкозы, во вторую — 0,2 мп, s третью - 0,3 мл, в четвертую—

0,4 мл, в пятую — 0,5 мп. Все пробирки доливают до 0,5 мл дистиллированной водой. После этого во все пробирки доливают по 1 мл концентрированной серной кислоты и по 2 мп антронового реактива. В пробирку для контрольного раствора, т.е. раствора для

Расчет. Для вычисления концентрации сахара в испытуемой крови необхо- 50 димо весовые количества глюкозы, которыми пользовались для калибровки, выразить для каждой стандартной точки таблицы в концентрациях глюкозы крови применительно к тем словиям ис 55 следования, которые имели место,при данном определении сахара в крови.

Делают этом по формуле

К, — — -К бО где К вЂ” концентрация сахара в крови;

С вЂ” объем крови, в котором требуется определить концентрацию сахара;

C< - объем крови, пошедшей в опыт,6 с5 наполнения компенсационных кювет, вносят 0,5 мя дистиллированной воды и обрабатывают ее так же, как стандартные пробы. Содержимое смешивают и пробирки помешают на 10 мин в кипящую водяную баню, после охлаждения при комнатной температуре или в холодной воде содержимое пробирок колориметрируют.

При колориметрировании на фотоэлектроколориметре пользуются красным светофильтром и кюветами. с рабочей шириной 5 мм. В качестве компенсационной жидкости наливают контрольный раствор, который также приобретает некоторую окраску. Отсчет оптической плотности,т.е.зкстинкции, ведут по красной шкале правого барабана. В за-. ключение строят калибровочную таблицу оптической плотности стандартных растворов в зависимости от количества глюкозы в них и проводят расчет копустрации сахара в исследуемой крови.

К - количество глюкозы. в стан1 дарте по данным калибровочной таблицы.

Предложенный способ позволяет сократить в 2-3 раза время на проведение одного исследования, в 4-5 раз уменьшить объем исследуемого субстрата и реактивов, значительно повысить точность способа и в 2-3 раза повысить его чувствительность.

Способ определения сахара в крови путем получения безбелкового фильтрата ее, обработки последнего антроновым реактивом и Фотометрии образовав5

Составитель С.Малютина

Редактор И.Николайчук ТехредМ.Надь "

Корректор С.Иекмар

Заказ 9909/50 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж -35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.Óæãoðîä, ул.Проектная, 4 шегося окрашенного раствора, о т л ич а ю ш н и с я тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, до внесения антронового реактива безбелковый фильтрат крови обрабатывают серной кислотой.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Биохимические методы исследования в клинике ° М., 1969, с. 232.

2. Петрунькина A.Ì. Практическая биохимия. Л, 1961, с. 208.