Способ определения регенерационной способности костной ткани
{22) Автор изобретения
Т. А. Чепеленко
1
/ 4 1 .3, д
Курганский научно — исследовательский институт экспериментальной и клинической ортопедии и травматологии
{71 у Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕГЕНЕРАЦИОННОЙ
СПОСОБНОСТИ КОСТНОЙ ТКАНИ
Изобретение относится к медицине, а именно к ортопедии.
В медицинской практике степень зрелости регенерата обычно оценивают при помощи рентгенографии. Сущность способа заключается в том, что через определенные промежутки времени осуществляют динамический контроль и по появлению кальциевых включений (костной ткани) судят о степени зрелости регенерата между. костными отломками в процессе дистракционного остеосинтеза по методу
Г. А. Илизарова (1).
Однако данный способ оценки интенсивности регенерации костной ткани не позволяет часто проводить динамический контроль, так как создает повышенную лучевую нагрузку, рентгеновские лучи при этом могут угнетать митотическую активность растущей костной ткани.
Целью изобретения является ойределение
: интенсивности регенерации костной ткани.
Цель достигается тем, что при осуществлении способа определения регеиерационной способности костной ткани, в эритроцитах крови on2 .редел яют содержание дезоксирибонуклеиновой кислоты и лри ее содержании от 11,б12,5 до
31,7 3,4 нг/млн., эритроцитов определяют интенсивную регенерацию костной ткани, а при содержании дезоксирибонуклеиновой кислоты от 7,8 0,5 нг/млн.эритроцитов и меньше определяют завершенную регенерацию костной ткани.
Способ осуществляется следующим образом. . Кровь иэ вены берут в охлажденные поли этиленовые пробирки, содержащие 3,8%-ный раствор цитрата натрия. Центрифутируют прп 1500 об/мин, плазму, лейкоцйты и тромбоциты удаляют и erne раз промывают 3,896ным раствором цитрата натрия.
Затем количество отмытых эрптроцитов э подсчитывают в меланжерах в миллионах на один микрометр. После этого 0,09 — P,1 1 мл эритроцитарной массы наносят на два диска фильтровальной бумаги и фиксируют в 10 —
15 мл смеси 0,2 н. раствора хлорной кислоты с 0,05 М: хлористого магния в течение 10 —
15 мин прп 4 — 5 С. Смесь сливают, и процесс повторяют.
После этого к обеим пробам приИзменение концентрации ДНК в эритроцитах при компрессионно— дистракционном остеосинтезе по Илизарову.
Статистические
Перед дистракцней
До операции
В период стракцин
В конце дитракции показатели.
Сроки эксперимента
20
20
7,8
36,9
1,9
0,8
0,36
0,4
1,58
3,52
2,1
22,8
22,9
41,8
26,0
1,83
15,0
t с контрЬлем
3 986396 ливают ацетон в количестве 10 — 15 мл, нагревают до кипения, ацетон сливают, и процесс повторяют еще раз. После того как слили ацетон, к эритроцитам добавляют 10 — 15 мл смеси этилового спирта и диэтилового эфира, взятях в соотношении 3:1, нагревают до кипения, смесь сливают. Процесс повторяют., К одному диску фнльтровальной. бумаги,, содержащему пробу эритроцитарной массы добавляют 4 мл 0,3 н. раствора едкого калия 10 и проводят гидролиэ 50 — 70 мин при 36—
37 С, при этом вьщеляется PHK.
Далее ко второму диску, содержащему пробу зритроцитарной массы, приливают 2 мл
0 5 М раствора хлорной кислоты, гидролизуют 15
18 — 22 мин на кипящей водяной бане и выделяют таким образом дезоксирибонуклеиновую кислоту. Гидролизат охлаждают и приливают
2 мл 1,2 н.раствора хлорной кислоты, затем фильтруют, 20
На спектрофотометре замеряют оптическую плотность фильтрата в кювете 1 см при длине волны 270 нм и 290 нм и проводят расчет концентрации дезоксирибонуклеиновой кислоты по формуле 25
326% х Е 270-290 нг/млн, где С вЂ” концентрация ДНК;
n — количесвто эритроцитов;
Š— разница оптической плотности при З0 длине волны 270 нм и 290 нм.
Прн этом концентрация дезоксирибонуклеиновой кислоты в пределах 11,6+2,56 — 31,78+
3,48 нг/мдн. эритроцитов и более свидетельствует о том, что процесс регенерации костной 35 ткани идет интенсивно, а при содержании
7,89),53 нг/млн. эритроцитов и меньше про4 цесс интенсивной регенерации костной ткани завершен.
Пример. Исследуя кровь больного, выявляют, что количество эритроцитов
5,7 млн/ммэ.
Контроль.
Е q7p = 032
Е gyp= 0,295;
Ь Е = 0,32 — 0,295 = 0,025
Опыт.
Еа70 = 0,375;
Egyp = 0,270 ю
Ь E 0,375-0,270 = 0,105;
Ь Е 0,1 05 — 0,025 = 0,08
Сднк= 3264 х 0,08/5,7 = 46,9 нг/млн.
Следовательно, из эритроцитов крови человека вьщеляют 46,9 нг/млн. эритроцитов дезоксирибонуклеиновой кислоты, что говорит о интенсивной регенерации костной ткани.
Способ применен на 20 больных, результаты исследования которых представлены в таблице и показывают воэможность определения интенсивности регенерации ° костной ткани.
Описываемый способ имеет преимущества в том, что при проведении обследования больные не подвергаются воздействию рентгеновских лучей и радиоактивных изотопов. Способ дает возможность оценить интенсивность регенерации костной ткани и степень зрелости регенерата без использования дорогостоящих реактивов и оборудования.
У
Кроме того, способ дает возможность проследить динамику регенераторного процесса, что очень важно в профилактике клинических осложнений в виде образования ложных суставов.
986396
Составитель JL Соловаев
Техред О.амеде - Корректор И. Ватрушкииа
Редактор О. Юркова
Заказ 10362/5 Тираж 711
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Подписное
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 э
Формула изобретения
Способ определения регенерационной способности костной ткани, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью определения интенсив- S ности регенерации костной ткани, в эрнтроцитах крови определяют содержание дезоксирибонуклеиновой кислоты и нри ее содержании от 11,6+2,5 до 31,7+34 нг/млн. эритроцитов определяют интенсивную регенерацию костной ткали, а при содержании деэоксирнбонуклеиновой кислоты от 7,810,5 нг/млн, эритроцитов и меньше определяют завершенную регенерацию костной ткани.
Источники информации, принятые во внимание при экспертизе
1. Чрескостный компрессионный, дистракционный и компрессионно-днстракцнонный остеоапгтей в травматологии и ортопедии.
Под. ред. Илизарова Г. А. Челябинск, Южтю — Уральское книжное издательство, 1976, с. 10-77.
