Способ определения биологической активности препаратов инсулина

 

-СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИНСУЛИНА путем сравнения воэде твия стандартного и исследуемого препаратов инсулина на биологический тест-объект, отличающийся тем, чтро, с целью ускорения способа, в качестве тест-объекта используют миокард предсердия лягушки, а. степень вызываемого эффекта оценивают по силе сокращения миокарда.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК

А (1% (И) з(5р 601 Й 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOIVIV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО делАм изОБРетений и ОтнРытий (21) 3283563/28-13 (22) 30.04.81 (46) 07.04.83. Бюл. № 13 (72) А. Н. Решетилов, В. И. Поротиков,. . С. М. Кагиянц, О. В. Накипова, Б. А. Беляков и А. В. Лазарев (7 1) Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (53) 616. 07(088.8)

; (56) 1.Государствйннаяфармакопея СССР, . ! М., "Медицина, 1968, 10-е издание, с. 934-9.37.

1 цФ с Ф

Ф ф (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ

ИНСУЛИНА путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсулина на биологический тест-обьект,, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью ускорения способа, в качестве . тест-объекта используют миокард предсердия лягушки, а. степень вызываемого эффекта оценивают по силе сокращения миокарда.

1010560

Изобретение относится к биологии и медицине и касается определения биологической активности лекарственных препаратов.

Известен способ определения биологи5 ческой активности препаратов инсулина путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсули- на на биологический тесчобъект 1 .

Однако известный способ является сложным, а также требуется много вре мени.

Иель изобретения ускорение спосо ба.

Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения биологической активности препаратов инсулина путем сравнения воздействия стандартного и исследуемого препаратов инсулина на биологический тест-объект, в ка честве тест-объекта исйользуют миокард„ предсердия лягушки, а степень вызывае мого эффекта оценивают по силе сокра- . щения миокарда.

Определение биологической активнос» ти препаратов инсулина на тест-объекте, представляющем собой изолированные ПРЕДСЕРДИЯ ЛЯГУШКИ абай RidibuIIda.

Обездвиженную путем спинализации лягушку укладывают на пенопластовую подложку брюшной частью вверх. Вскрывают грудную полость, от сердца определяют венозные и артериальные сосуды.

Изолированное сердце помещают в изме-. рительную камеру с, физиологическим 35 раствором следующего состава:

PaCf. 110 мМ,КС 2,5 мМ, СаС 1,8мМ.КН РО, 0,9 мМ, ÉdÍÑÎ 2,5 мМ, . глюкоза О, 1%, рН 7,8.

Предсердия отделяют от желудочка и 40 тонкими нитями привязывают в двух точках. С помошью нитей один конец объекта прикрепляют к стенке камеры, другой соединяют с датчиком силы. Для испытаний используют цинк-инсулин кристал- 45 лический для инъекций во флаконах. Растворы различных концентраций получают путем разведения инсулина из флаконов физиологическим раствором. Для регистраILHH BB23HcHMocTlI cHJlbI cQKPBIIIeHH5I oT KoH 5P центрации инсулина измерительную камеру наполняют растворами с различными кон» центрациями инсулина.

Инсулин оказывает отрицательный инотропный эффект на сократительный миокард предсердий лягушки - сила сокращений под его влиянием уменьшается.

Измеряя силу сокращений для различных

2 концентраций, инсулина, получают так на-. зываемую кривую доза эффакт для данного препарата инсулина. Пусть соотношение доза - эффект для стандартного препарата инсулина будет выражено зависимостью 1, а для исследуемого препарата - зависимостью 2 (фиг. 1) ° Биологическая активность исследуемого инсулина может быть либо вообще неиз- .вестна, либо известна ориентировочно.

Поэтому для построения зависимости доза-эффект за величину биологической активности исследуемого препарата прини. мают либо ориентировочно известную активность, либо берут произвольное значение биологической активности, которое точно найдено в процессе определения по данному способу..

Способ осуществляют следующим образом.

На плоскости с зависимостью дозаэффект для стандартного и исследуемого препаратов проводят прямую Q парал». лельную оси концентраций на уровне, соответствующем любой произвольно выбранной степени уменьшения силы сокращения.

В точках пересечения А и Б получают два значения концентраций, вызывающих одинаковый эффект: K t — концентрацию станцартного H К » исследуемого препаратов инсулина. По определению концентрации К . соответствует некоторое количество s ЕД биологически активного стандартного.препарата инсулина в одной едиIIstme объема физиологического раствора, К вЂ” м ЕД исследуемого инсулина в единице обьема. Так как биологический эффект

К" и К,2 одинаков, то из Фю ЕД исследуемого препарата активными являются толь}ко Ь ЕД, остальная часть неактивна. Это . означает, что исходно взятый для приготовления растворов исследуемый инсулин с предлагаемой активностью и ЕД/мл в действительности имеет активность й, . ЕД/мл, где oL является нормировочным коэффициентом, определенным как отношение стандартного К . и К исследуемого, вызывающих одинаковый эффект, Ы -и в =K,,|K,.

Используя указанную вьзце процедуру, определяют биологическую активность инсулина.

Экспериментально находят зависимости доза - аффект для обоих препаратов. Для препарата 1 она представлена зависимостью 1 для препарата 2 - зависимос тью 2, (фиг. 2). Проводят прямую g

Концеитрацил, инсулииа> 4/ди

2 +em д 4

Составитель С. Малютина

Редактор А. Мотыль ТехРед Т.Маточка КоРРектоР,.М. Шароши

Заказ 2482/35 Тираж 871 Прдписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР, по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1010560 4 параллельно оси концентраций на уровне : 4. 0,68, получают, что истинная биоI половинного эффекта, т.е. на уровне .логическая активность, нормированная

50%го уменьшения силы сокрашения относительно биологической активности под влиянием инсулина. Получают два стандартного. препарата, равна 27,2 ЕД/мл, значения концентраций, вызываюших s т.е. является ниже биологической акжводинаковый эффект. Точке А пересечения . ности, указанной на флаконе. соответствует концеитрация стандартного препарата инсулина К . 2,55 ЕД/мл, Предлагаемый способ позволяет полуточке Б пересечения — концентрация ис- чить точность определения биологической следуемого препарата инсулина К, 10 активности 5%. По сравнению с извес

* 3,75 ЕДРмл. Найодят нормировочный . н ым сокрашается время определения с коэффициент: ф = К© /К- 2,55/3,75 8-30 дней до 2 ч, обеспечивается воз**. 0,68. можность автоматизации процесса опреУмножая биологическую активность деления, что значительно ускоряет споисследуемого препарата 40 ЕД1мл на 15 соб.