Способ определения структурно-аномальных гемоглобинов

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРУКТУРЙО-АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИ1ЮВ путем получения гемолизата эритроцитов с последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10°С, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующими агентами , отличающийся тем, 4TOf с Целью повышения точности способа, гемолизат разбавляют до содержания гемоглобина 1,9-2,2 г % и изофокусируют его при напряжении 300-350 В, силе тока 25-30 мА, а фиксацию гемоглобиновых фракций проводят водным раствором денатурирующих агентов.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИН

С 01 И 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМ,Ф CBMPETEAbCTBY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3319264/28-13 (22) 26.11,81 (46) 07.07.83. Бюл. Р 25 (72) Н.Х. Мехтиев, К.М. Мовсум-заде, Э.М. Расулов и Т.А. Аскерова (71) Научный центр биологических исследований АН Азербайджанской ССР (53) 612.111.11/13 (088.8) (56) 1. Instruction LKB AmphoEine

PAG plates for anal?ykicaP. ekectrofocusing on po0yacrytamide geEs.

LKB-Produkter ABS-161 25 Bromma

Sweden, 1974.

„,SU„, 2 16 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТРУКТУРНО-АНОМАЛЬНЫХ ГЕМОГЛОБИНОВ путем получения гемолизата эритроцитов с последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10 С, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующими агентами, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, гемолизат разбавляют до содержания гемоглобина 1,9-2,2 r Ф и изофокусируют его при напряжении

300-350 В, силе тока 25-30 мА, а фиксацию гемоглобиновых фракций проводят водным раствором денатурирующих агентов .

1027616

Корректор А ° Повх ва

Заказ 4730/48 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Иэобретение Относится к биохимии и молекулярной биологии, конкретно к способам выявления структурна-аномальных гемоглобинов и может быть использовано в медицине, в частности

råiëàòoëoãèè. 5

Известен способ определ fiHG структурно-аномаль ных гемоглобинов путем получения гемолизата эритроцитов с последующим его изоэлектрофскусированием в полиакриламидно-амфоли- )0

НоВоМ геле при 10оС, фиксацией гемоглобиновых фракций денатурирующими агентами f l j, Недостатками известного способа является невозможность идентификации нестабильных структурно-аномальных гемоглобинов ввиду неполного разделения гемоглобнноных фракций.

Введение в гемолизат раствора цианистого калйя вызывает слияние промежуточного Ме -гемоглобина с

20 основной фракцией гемоглобина, Кроме того, цианистый калий является сильно ядовитьпs реактивом.

Разделение гемолизата при 1 600 В с силой тока 50 мА вызывает разложение нестабильного структурно-аномального гемоглобина и искажает. картину спектра гемоглобиновых фракций.

Использование в фиксирующем растворе метилового спирта может оказы30 вать отрицательное воздействие на экспериментатора при популяционных исследованиях (200 анализов в день) ввиду его токсичности.

Цель изобретения - повыш ние точ- З5 ности способа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения структурно-аномальных гемоглобинов путем получения гемолнзата зритроци- 4() тов с последующим его изоэлектрофокусированием в полиакриламидно-амфолиновом геле при 10", фиксацией гемоглобинсвь|х фракций денатурирующими агентами, при котором гемолизат раз— бавляют до содержания гемоглобина

1,9-2,2 г Ъ и изофокусируют его при напряжении 300-350 В силе тока 2530 МА, а фиксацию гемоглобиновых фракций проводят водным раствoром

50 денатурирующих агентов, Способ осуществляют следующим образом, Из 0,1 мл цельной крови эритроциты отделяют центрифугированием, дважды

Промывают раствором ИаСР (8, 5 г/л), СОствавитель И.

Редактор С. Юско Техред C.Мигуно гемолиэируют добавлением 1:5 объема четыреххлористого углерода. Гемолизаты готовят разбавлением эритроцитной массы дистиллированной водой до са,цержания гемоглобина 1,9-2,2Ъ.

Разбавленный гемолизат 25 мкл наносят на полиакриламидно-амфолиновый гель с рН 3, 5-9,5.

Разделение гемоглобиновых фракций проводят при 320 В, используя силу тока 28 мА, анодным раствором 0,1 М ортофосфорной кислоты и катодным о

0,1 М едкого натра при 10 С.

Гелевую пластину после разделения фиксируют раствором 57,7 г трихлоруксусной кислоты и 17,25 r сульфосалициловой кислоты в 500 мл дистиллированнойй воды в течение 15 мин, затем гель высушивают и покрывают л:-.лот .ассовой пластинкой для хранени.

Пример 1 . Обследуемый Алиев

Ах. ед (48 лет) был обследован на носительство структурно-аномального гемоглобина. У обследуемого было взятоо 0,1 мл крови из пальца, приготовлен гемолизат (?,0 гЪ) и проведено изоэлектрофокусирование при 300 у, 78 ma.

Выявлен нестабильный. структурноаномальный гемоглобин.

Пример 7 Обследуемая Алиева

Фарах (18 лет) — дочь Алиева Ахмеда также была обследована на носительств.о структурно-аномального гемоглобина. У обследуемой было взято 0,1 мл крови из пальца, приготовлен гемолизат (?,1 гЪ) и проведено изоэлектрофокусирование при 320 у, 25 ма °

На изоэлектрофореграмме выявлен структурно-аномальный гемоглобин и его мет/форма в виде двух полос, Пример 3, Обследуелый

Алиев Керим (8 лет) — сын Алиева Ахмеда - обследован на носительство структурно-а.номальногo гемоглобина . предлагаемым способом.

При осуществлении предлагаемого способа на изоэлектрофорограмме выявлен струк урно-аномальный гемоглобин.

Таким образом, предлагаемый способ позволит улучшить качество разделения гемоглобиновых фракций и выявить нестабильные формы структурно-аномальHых гемоглобиíoB что дает вo3» мо, .ность получить достоверную информацию о молекулярных нарушениях белковой части гемоглобина.

Емельяненко