Питательная среда для определения биологической активности грамидидина @

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГРАМИЦИДИНА С, содержащая источник , та, натрий хлористый, калий хлористый , соль фосфорной кислозы, агарагар и дистиллированную воду, отличающаяся тем что, с целью повышения точности определения путем улучшения диффузионных свойств среды, дополнительно содержит глюкозу, а в качестве источника азота она содержит аммоний хлористый, а в качестве соли фосфорной кислоты - натрий фосфорнокислый двузамаценный прислед) количественнсм соотнсшюнии компонентов , г/л дистиллированной воды: аммонийхлористый 9-11, натрий хлористый 9-11, калий хлористый 19-21, натрий фосфорнокйс лый двузамещенный 4-6, гигар-агар 18-20.

(19) (и) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

3(Я) С 12 1 04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ М i

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВМ (21) 3314518/28-13 (22) 27.04.81 (46) 23.11 .83. Бвл. М 43 (72) Л.С. Гслубкона, Н.Г. ВасильЕва и И.A. Поляк (7I) Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (53) 615 .779.9(088.8) .(56) 1. Егоров H.Ñ, Микробы антагонисты и биологические методы определения антибиютической активности. И., Высшая школа, 1965, с. 136-137

%53. (54) (57) ffHTATEJIbHA)I СРЕДА ДЛЯ OIIPE-

ДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГРА

ИИЦИДИНА С, содержащая источник азота, натрий хлористый, калий хлористый, соль фосфорной кислоаы, агарагар и дистиллированну)0 воду, о т л ич а в щ а я с я темр что, с целью повышения точности определения путем улучшения диффузионных свойств среды, дополнительно содержит глюкозу, а в качестве источника азота она содержит аю(оний хлористый, а в качестве соли фосфорной кислоты — натрий фоо-, форнокислый двуэамещенный при следующем количественном соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды) аммоний хлористый 9-11 натрий хлористый 9-11, калий хлористый 19-21, натрий фосФорнокислый двузамещенный 3

4-6, агар-агар 18-20.

1055773

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается определения биологической:.активности антибиотиков методом диффузии в агар.

Известна питательная среда для определения биологической активности грамицидина С, содержащая источник азота, натрий хлористый, калий хлористый, калий фосфорнокислый двузамещенный, агар-агар и дистиллирован- ц ную воду (1) .

Однако известная среда не обеспечивает высокой точности определения из-за своих недостаточно хорошйх диффузионных свойств. 35

Цевью изобретения является повышение точности определения путем улучшения диффузионных свойств среды е

Эта цель достигается тем, что питательная среда для определения биологической активности грамицидина С, содержащая источник азота, натрий хлористый, калий хлористый соль фосфорной кислоты, агар-агар и гистиллированную воду, в качестве исТочника азота содержит аммоний хлористый, а в качестве соли фосфорной кислоты - натрий фосфорнокислый двузамещенный при следующем количественном соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:

Аммоний хлористый 9-11

Натрий хлористый 9-11

Калий хлористый 19-21

Натрий Фосфорнокис35 лый двузамещенный 4-6

Глюкоза,: 4-6

Агар-агар 18-20

Пример 1..Для определения биологической активности грамициди- 40 на С используют среду следующего состава, rs глюкоза 5, натрий Фосфорнокислый двузамещенный 5, хлорид аммония 10, хлорид натрия 10, хлорид калия 20, агар-агар 18, дистил- 45 лированная вода — до 1 л. рН среды после стерилизации 7,0-7,2. Среду расплавляют на водяной буне, охлаждают до 70 С и вносят 10 спор Вас. о

subti01s шт. 6633 на 1 мл среды. у

Засеянную питательную среду разли1 вают по :10-15 мл (один слой) в .стерильные чашки Петри. После застывания питательной среды делают лунки и подсушивают чашки при комнатной температуре 15-20 мин. Лунки запол няют контрольной (25 ЕД/мл) и испытуемой концентрацией грамицидина С в дистиллированной воде. Затем чашки помещают в термостат при 36 С.

После 18-20-часовой инкубации замеряют размеры зон задержки роста тестмикроба и рассчитывают активность испытуемого образца по предварительно построенной стандартной кривой с использованием следующих концентраций грамицидина С: 15, 20, 25, 31, 25 и 37,5 Ец в 1 мл дистиллированной воды.

Пример 2, Для определения биологической активности грамицидина

С используют среду следующего состава, r. :глюкоза 6, хлорид аммония 11, натрий фосфорнокислый двузамещенный

6, хлорид натрия 11, хлорид калия 21, агар-агар 20, дистиллированная вода до 1 л. рН среды после стерилизации

7,0-7,2. Условия проведения анализа те же, что в примере 1.

Пример 3. Для определения биологической активности грамицидина.

С используют среду следующего состава, гз глюкоза 4 натрий фосфорнокислый двуэамещенный 4, хлорид аммония 9, 1 хлорид натрия 9, хлорид калия 19, агар-агар 19, дистиллированная вода— до 1 л. рН среды после стерилизации

7,0-7,2. Условия проведения анализа те же, что в примере l.

Сравнительные данные по определению биологической активности грамицидина С в эащечных таблетках приведены в табл.l; данные по диффузии антибиотика грамицидина С представлены в табл. 2.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что определения на сравниваемых питательных средах.совпадают. Однако замена нестандартного бульона Хоттингера хлористым аммонием

;улучшает диффузию антибиотика в среду и позволяет получать большие по диаметру зоны задержки роста .(табл. 2), что в свою очередь обеспечивает получение более точных результатов определения.

Использование питательной среды позволит получать воспроизводимые стабильные результаты благодаря стандартности среды и ее хорошим диффузионным сйойствам, упростить приготовление среды и удешевить ее.

1055773

Т а б л"н ц а l

«

Предлагаемая питательная среда

Контрольная Число Результат Стандартконцентрация опреде- х, ЕД/мл ное отклостандарта, лений нение, S„

Ед/мп

25 0

10,2

1450

25,0

1430

9,4

25,0

1470

5,3

7 0

25,0

1455

25 0

1440

6,г

25,0

1460

6,7

Продолжение табл. 1

Л -И»

Известная питательная среда

25,0

1440

6 0

25,0

1420

6 5

25 0

1465

7,0

25,0

1445

8,0

25,0

1440

7,3

8i8

1450

25,0

Таблица 2

1а

Показатель

Среда

Опытная Регламентная

Диаметр зоны при контрольной концентрации 25 ЕД/мп, мп 19 + Ор5 16аО + 0,5

Активность опытных образцов таблеток грамицидина, ЕД

1470 «+ 44,1 1460 + 73,0

Четкость зону

Хорошая

Хорошая

Составитель Г. Смирнова

Техред Л.Пилипенко Корректор А. Зимокосов

Редактор Н. Егорова

Тираж 523 Подписное вНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 9241/22

»

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

«

Партия грамицидина

Партия гр аукци дина

Контрольная Число концентрация опреде стандарта, лений

ЕД/мл

Результат, Стандартное х, ЕД/мл отклонение

Я . х