Способ дифференциации @ -форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм

 

СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ L -ФОРМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ И ИСХОДНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФОРМ путем приготовления взвеси исследуемого материала, шлрашивания на пвгательнсй среде с последующим исследованием выросших колоний, отличающий .с я тем, что, с целью повышения тч чности способа, из выросших колоний, готовят суспензии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 5060 мин, определяют наличие малонового диальдегида и по его концентрации цифференцируют L -формы и их ревертанты первых пассажей и исходные бактериальные формы холерных вибрионов.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУВЛИН

Зад С 12 1/04 все(.ц@;р;,д

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ъйьли -:r,- А

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

Ilo делАм изОБРетений и ОтнРытий (21) 3435223/28-13 (22) 11.05.82 (46) 30.11.85. Бюл. М .14 (72) Ю.М.Ломов, Л.E.Añååâà и В.С.Каграманов (71) Ростовский-на-Дону государственный научнс .исследовательский противо чумный институт (53 ) 576.093.1 (088.8) (56) 1. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О.Биргера, М., "Медицина", 1967, с. 17.-18 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ЙИФФЕРЕНЦИАЦИИ

-ФОРМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

„„SU„„1057537 А л

И ИСХОДНЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФОРМ путем приготовления взвеси исследуемого материала, вырашивания на питательной среде с последуюшим исследованием выросших колоний, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью повышения точности способа, из выросших колоний, го товят суспензии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 5060 мин, определяют наличие мало нового диальдегида и по его концентрации цифференцируют 4 -формы и их ревертанты первых пассажей и исходные бактериальные формы холерных вибрионов.

1 10

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается диагностики особо опасных инфекций.

Известен способ дифференциации . форм холерных вибрионов и исходных бак териальных форм путем приготовления взвеси исследуемого материала, выращивания на питательной среде с последующим исследованием выросших колоний путем приготовления микроскопических препаратов и исследования их с помощью фаэовокон трас тного микроскопа )1)

Однако известный способ не "обеспечивает высокой точности, так как I -формы холерного вибриона по морфологии копоний сходны с К -вариантами и под фазовым микроскопом могут обнаруживаться полиморфные и L -подобные клетки.Кроме того, известный способ позволяет проводить только качественную диф ференциацию без количественного показателя состава популяции.

Белью изобре тения является повыше ние точности способа.

Эта цель достигается тем, что согласно способу дифференциации 4 -форм холерных вибрионов и исходных бактериальных форм путем приготовления взвеси исследуемого материала, выращивания на питательной среде с последующим исследованием выросших колоний, из выросших копоний готовят суспенэии, инкубируют их при постоянном встряхивании в течение 50-60 мин, определяют наличие . малонового диальдегида и по его концентрации дифференцируют j, ôoðìû и их ревертанты первых пассажей и исходные бактериальные формы холерных вибрионов.

Пример . Из колоний, подозрительных на 1, -форму, берут материал и готовят взвесь на трис - HCR -буфере.

Суспенэию инкубируют в термостате около часа при постоянном встряхивании. Реакцию останавливают 0,1 мл 100%-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ), затем к пробам добавляют 2 мл 30%-ной ТХУ>

5 М с ной zq zz q (НСЮ)и 2 мп

57537 2

6,75%-ной тиобарбитуровой кислоты, сто вят ц,, горячую водяную баню на 15 мин, При наличии в пробе - форм холерного вибриона развивается окраска от ярко желтой до оранжевой. Интенсивность обра1 эуюшейся окраски, измеряют на спектроф0тометре при длине волны 535 нм или на фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром. Количество образовавшегося ма1О лонового диальдегида вычисляют но формуле: 9

3Е. 10 .-..-г;зтлт где С вЂ” концентрация малонового диальде35 гида, нмоль/млрд микробных клеток (м. кл.), Е - показания спектрофотометра (экстинцця), 5

1,56 10 - молярный коэффициент

20 экстинции для малонового диальдегида.

В работу были взяты 7 штаммов Lg форм холерных вибрионов и их исходные варианты -3933, 3935, 3943 - серо25 типа "Инаба, 4608,4616, 4617, 4661» серотипа "Огава".

В таблице представлена дифференциация

1 - форм, ревертантов и исходных бактериальных форм в зависимости от концен .

ЗО трации малонового диальдегида.

Концентрация малонового диальдегида .(NQA):выше 0,1 нмоль/млрд.м.кл. достоверно свидетельствует о наличии в пробе ревертантов хоперных вибрионов, а выше

0,6 нмоль/млрд.м.кл - их L -форм. Ко личество NL1A у бактериальных форм колебалось от 0 до 0,06 нмоль/млрд.м,кл.

Минимальное количеством -форм хопер ных вибрионов, которые можно определить, соответствует 1 млрд,м,кл.мл.

Испоцьзование изобретения позволит повысить точность определения, установить концентрацию возбудителя в различной форме в одной популяции, кроме того, определить в какой форме изменчивости циркулирует возбудитель.

4. еИor

3,е1 or

3 933

3935

0,05

0,09

0,16

0,09

0,52

0,60

1057537

, Продолжение таблицы

Концентрация малонового диальдегида, н моль/млрд.м.кл. нсхоаные ревертанты (, -формы

Штаммы

0,12

0,50

3 943

0,60

0,07

4608

0,02

0,76

0,1

4616

4617

0,13

0,06

0,1

4661

0,06

x=0,11

Х=0,057

Средняя с.оставитель Г.Смирнова

Редактор Л.Пчолинская Техред М.Надь Корректор A,Ференц

Заказ 9469/3 1 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Ч,еИог

Ч.еЕа

V. е Иог

V,åÈог

Ч.е Иог

0,06

0,06

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,58

0,42 к=0,568