Способ определения белка в молоке и молочных продуктах

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ,, предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности , отличающийся тем, что, с целью повышения точности, перед окрашиванием анализируемую пробу наносят на хроматографическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и элюйруют связанный с белком краситель,а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя.

СОЮЗ COBETCHHX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) 3(5 ) G 01 N 33/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ. НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3407823/28-13 (22) 16.03.82 (46) 30.12.83. Бюл. )) 48 (72) В.Л. Иванов, Г.П. Сапрыгин, A.Ï. Скоков и М.Й. Мороз (71) Омский ордена Ленина сельскохозяйственный институт им. С.M.. Ки- рова (53) 637 ° 127.3(088.8) (56) 1 ° Авторское свидетельство СССР

)) 859921, кл. G 01 N 33/04, 1979.

2. Инихов Г.С., Брио Н.П. Методы анализа молока и молочных продуктов. Пищевая промышленность, 1971, с. 129-131. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА

В МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ, предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, перед окрашиванием анализируемую пробу наносят на хроматографическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и злюируют связанный с белком краситель,а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя.

1064194

Изобретение относится к молочной промышленности, а именно к определению белка в молоке и молочных продуктах колориметрическим методом.

Известен способ определения белка в молоке и молочных продуктах по связыванию красителей, основанный на определении оптической плотности раствора краски до и после коагуляции белков, нключаюций смешивание молока с раствором красителя, последующее отделение белково-красочного компонента и колориметрирование фильтра (1) .

Недостаток данного способа заключается в невозможности применения 15 .их для определения белка в молочных продуктах, содержащих незначительное количество белковых компонентов (молочная сыворотка, молочный сахар).

Известен также способ определения 20 белка в молоке и молочных продуктах, предусматривающий отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и измерение оптической плотности (2j .

Однако такой способ характеризуется недостаточной точностью, так как результаты опредения белка зависят от полноты осаждения его кислым красителем. В свою очередь полнота осаждения зависит от многих факторов:рН молока или молочного продукта, процентного содержания белковых фракций, заряда этих фракций, которые меняются в зависимости от лактации, породы скота, кормления и т.д.

Оказывает влияние на полноту осаждения свойства и качество самого красителя и ряд других факторов. Поэтому при определении количества белка учесть влияние всех факторов на точность определения и сделать соответствующие поправки довольно трудно.

Кроме того, данный способ определения белка может быть использован 45 только для молока и молочных продуктов, имеющих значительное процентное содержание белка, и .совершенно не применим для определения белка в таких молочных продуктах, как мо- 50 лочная сыворотка и молочный сахар, где осадить полностью сывороточные белки практически невозможно ни одним из известных методов, тем более кислым красителем. 55

Цель изобретения — повышение точности определения.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения белка в молоке и молочных продуктах, предусматривающему отбор анализируемой пробы, окрашивание ее кислым красителем и изм ение оптической плотности, перед окрашиванием анализируе) ую пробу наносят на хроматографическую бумагу и фиксируют ее нагреванием, затем отмывают краситель, не связанный с белком, и элюируют связанный с белком краситель, а определение белка осуществляют в зависимости от оптической плотности связанного белком раствора красителя.

Способ осуществляют следующим образом.

Для анализа микропипеткой берут

0,3 мл средней пробы молока или какого-либо молочного продукта и наносят это количество на полоску хроматографической бумаги марки М .

Через 1 мин после того, как исследуемый раствор впитается хроматографической бумагой, полоску этой бумаги помещают в термостат при 100105 С на 5 мин. В результате высоков температурного воздейстния белки, содержащиеся в исследуемой пробе, коагулируют на волокнах хроматографической бумаги, образуя с ними прочное соединение. После этого полоску бумаги с нанесенными пробами помещают н один из известных белковых красителей на 5 мин при 20 С. о

Для анализа молока и молочных продуктов, содержащих значительное количество белка (0,5% и ныше), применяют краситель амидочерный IОБ, который готовят следуюцим образом: в 1 л воды вносят 2,08 г динатрийфосфата (Иа НРО4 2HZO) и 15,8 г лимонной кислоты, после их растворения вносят 0,8 r амидочерного IОБ.

Для анализа молочных продуктов с концентрацией белка ниже 0,5% и молочной сыворотки применяют краситель бромфенолблау, который получают растворением 0,2 г бромфенолблау и 1 г HgCI н 100 мл 2%-ной СН СООН или же растворением 2 г NH4CI, 10 г калолия и 1 r бромфенолблау в 1 л дистиллированной воды, через сутки красители фильтруют и используют, После окрашивания проводят операцию отмывки красителя, не связанного с белками. При применении красителя амидочерный IОБ отмывку осуществляют в 7-; — íîì растворе уксусной кислоты, а при применении бромфенолблау отмывку проводят в 2. -ном растворе уксусной кислоты. После промывки полоски хроматографической бумаги просушивают при 18-20 С и хранят в темном месте до проведения колориметриронания. Если же колориметрирование проводят сразу после промынки, то окрашенные пятна белка вырезают и для элюирования связанной белком краски помещают в 1Ъ-ный раствор

ИаОН. Элюирование осуществляют в пробирках- на 20 мл в течение 57 мин до полного осветления кружков хроматографической бумаги, на ко1064194

Показатели

Метод

Уди (прототип) Кьельдаля

Гололобова и Павловой

Предлагаемый

Время, затраченное на 10 анализов, мин

340

25-30

1,5-2

Ошибка метода, Ъ

Разрешающая способность (определяемый минимум белка, содержащегося в продукте), Ъ

0,1

Молоко 0,005

Сыворотка 0,001

0,05

0,1

Стоимость одного анализа, р

0,22

0,02

0,04

0,06

Составитель Н. Арцыбашева ч

Техред Л, Пилипенко Корректор М. Шароши

Редактор С. Пекарь

Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 10514/45

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 торые была нанесена анализируемая проба молочного продукта.

Колориметрирование проводят с помощью кювет на 15 мл на любом фотоколориметре, например ФЭК-М, с синим светофильтром (длина волны

575-590.мм). Содержание белка (в процентах) находят по калибровочному графику, откладывая на оси ординат соответствующую найденную оптическую плотность. Построение калибровочного графика осуществляют общепринятым методом.

Таким образом, изобретение позволяет повысить точность способа, так как его результаты совершенно 15 не зависят от полноты осаждения белка под действием красителя. Все белковые компоненты раствора впитываются в хроматографическую бумагу и . фиксируются в ней высокотемпературной обработкой. В результате того, что белковые молекулы пробы, связанные с волокнами бумаги, удерживают около себя молекулы красителя, а

1 не коагулируют с ними, что имеет место в прототипе, появляется воэможность улавливать исключительно малые количества белха в молочных или каких-либо других продуктах, содержащих белок. При этом разрешающая способность (определяемый минимум белка, содержащийся в продукте и выраженный в Ъ) предлагаемого способа превышает известный в том числе арбитражный метод Кьельдаля и составляет для сыворотки 0,001Ъ, а для молока 0,005Ъ за счет улавливания значительно меньшего количества белка.

В таблице представлены результаты определения белка известными и предлагаемым методами.

Как следует из таблицы, предлагаемый способ имеет относительно высокую точность по сравнению с аналогичными, наименьшую стоимость анализа, экономит время и обладает высокой разрешающей способностью, превышающей арбитражный метод Кьельдаля.