Среда для получения пикнид с конидиями гриба @ @ @

 

СОКИ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСН ИХ

РЕСПУБЛИК .

3(59 01 N 63 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н авто скому свидеткльс гвм

3-4

Пивное сусло

Семена сои

1,5-2,0

Иэмельченные листья и стебли сои

0,5-1,0

2,0-2,5

Остальное

Агар

Вода (21) 3444954/30-15

;(22) 27 ° 05.82 (46) 30 01 84, Бюл. 9 4 (72) Г.Д. Успенская, Е.С. Машкина и М.И. Николаева (71) Московский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции,и ордена

Трудового Красного Знамени государственный университет им. М.В. Ломоносова и Воронежский ордена Ленина государственный университет им. Ленинского комсомола .(53) 632 ° 4:576 8.093 ° 1(088 ° 8) (56) 1 ° Литвинов М.A. Методы изучения почвенных микроскопических грибов, Иэд» AH СССР, 1969, с, 67

2. Кирай 3 ., Клемент 3., Шаймоши Ф., Вереш И. Методы фитопатологии.

М., Колос, 1974, с. 189 (прототип) °..80„„52 A (54) (.57) СРЕДА, ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПИКНИД

С КОПИДИЯМИ ГРИБА ASCOCHYTA SOJALCOLA ABRANOV включающая агар, вОду, отличающаяся тем,- что, с целью повышения выхода и сокращения времени получения целевого продукта, она дополнительно содержит пивное сусло, семена .ои и измельченные листья и стебли сои при следующем соотношении компонентов, мас.Ъ:

1069752

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть применено в фитопатологии, сельском хозяйстве, растениеводстве, мик ологии

Возбудитель аскохитоза сои прак-. 5 тически не развивает на известных средах для его культивирования пикни ды и коиидии. На них гриб образует вторичный мицелий, который мешает отделению пикнид и конидий от среды 10 и затрудняет их использование. ПикнИды с конидиями в больших количествах необходимы для проведения искусственного заражения растений сои при ее селекции иа устойчивость к аскохитоэу, при выяснении цикла развития возбудителя с целью разработки методов защиты сои от заболевания.

Известна среда — овсяной агар с11, содержащая, r.:

Овсяные хлопья 100

Агар

Очищенный картофель 200

Глюкоза

Агар

Вода

15-20

1 000 мл

Эта среда имеет следующие недостатки: 45 невысокий выход целевого продукта; длительный период образования пикнид; быстрое зарастание среды вторич- 50 ным мицелием, что затрудняет отделение пикнид с конидиями; неэкономичность среды, так как для получения достаточного количества пикнид с конидиями необходимо засевать большое количество пробирок, что ведет к большому расходу глюкозы и на это уходит много рабочего времени.

Цель изобретения — повышение выхода и сокращение времени получения пикнид с конидиями гриба.

Для достижения указанной цели среда для получения пикнид с конидиями гриба Ascochyta soJaIcoIa

Вода 1000

Эта среда может быть использована для культивирования возбудителя аскохитоза, но имеет следующие недостатки: невысокий выход пикнид с конидиями

30 быстрое зарастание среды вторичным мицелием, что затрудняет отделение пикнид с конидиями.

Известна также среда L2 J, которая является стандартной для культиви- 35 рования фитопатогенных грибов и имеет следующий состав, r:

Abramov, включающая агар, воду, дополнительно содержит пивное сусло, семена сои и измельченные листья и стебли сои при следующем соотношении комп он ентов, мас . й:

3-4

Пивнбе сусло

Семена сои

1,5-2,0

Измельченные листья и стебли сои

0 5-1,0

2,0-2,5

Остальное

Агар

Вода

Пример 1. Берут неохмеленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%, затем сусло фильтруют. Семена, листья и стебли сон промывают в воде, Листья и стебли измельчают. Берут 2% семян сои, 0,5% измельченных листьев и стеблей сои, заливают их 50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на слабом огне. Жидкость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой. Добавляют 3 — 8% пивного сусла и 2% агара. Стерилизуют при

1 атм 30 мин, после чего вносят посевной материал.

Затем инкубируют гриб при 22-25 С.

На второй день начинается рост мицелия; мицелий скудный, пикниды образуются на 3-4-й день, количество их обильное. На 6-7-й день получают большое количество пикнид с зксудатом с 60-70%,цвуклетных спор на поверхности среды. Зарастание среды вторичным мицелием не происходит. Средние размеры конидий, мкм: 7,48х4,08

+0,25к0,04, Пример 2. Берут неохмеленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%. Затем сусло фильтруют. Семена, листья и стебли сои промывают в воде. Листья и стебли измельчают.

Берут 1,5Ъ семян сон, 1% измельченных листьев и семян сои,заливают их

50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на слабом огне. Жидкость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой.

Добавляют 4 — 8% пивного сусла н

2,5% агара. Дальнейшие операции проводят согласно примеру 1.

Рост мицелия начинается на второй день; мицелий скудный, обильное количество пикннд образуется на 3-4-и день. На 6-7-й день получают большое количество пикнид с эксудатом с 5560% двуклетных конидий. Зарастание среды вторичным мицелнем не происходит. Средние размеры конидий, мкм:

7,2 3,810,3 0,06.

1069752

Количество пикнид Количество конидий Количество двухклетных I на 1 см среды на 1 см - среды

% конидий, % к числу конидий на 1 см

Среда по при" мерам

21,2110

87,3+5,6

Известная

Предлагаемая

251,l-10

255,6 10

195 5"10

321,9 3,4

241,1*1,8

55

221,6+2, 9

60

Составитель М. Мирзаев

Редактор П. Макаревич Техред A.Áàáèíåö Корректор Л. Патай

Заказ 11592/6 Тираж 722 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35., Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 3. Берут неохмеленное пивное сусло, измеряют сахарометром процент сахара и добавляют воды настолько, чтобы процент сахара был равен 8%. Затем сусло фиЛьтруют.

Семена, листья и стебли сои промывают 5

У

1 в воде. Листья и. стебли измельчают.

Берут 1,5% семян сои, 0,5% измельченных листьев и стеблей сои, заливают их 50% водопроводной воды и варят при слабом кипении 40 мин на 10 слабом огне. Жидкость фильтруют и восстанавливают объем водопроводной водой. Добавляют 4 — 8% пивного сусла и М агара, Дальнейшие операции проводят сбгласно примеру l, f5

Рост мицелия начинается на второй день; мицелий скудный, на 3-4-й день образуется большое количество пикнид.

На 6-7-й день получают большое количество эксудата с 60-70% двуклетных конидий. Зарастание среды вторичным мицелием не происходит. Средние размеры конидий, мкм: 6,8х4,0+18 0,03.

Использование предлагаемой среды имеет значительные преимущества перед известной. !

В таблице дана сравнительная характеристика выхода целевого продукта на испытанных средах.

Иэ данных таблицы следует, что состав предлагаемой суслосоевой ! среды в примере 1 оптимален. Это выражается в большом выходе целевого продукта (пикнид и кони4ий), в наибольшем количестве двухклетных конидий, что свидетельствует о большей жизнеспособности их по сравнению с таковыми при росте гриба на известной среде, а также на средах в примерах 2 и 3 яа 15 день роста в идентичных условиях. Кроме увеличения выхода целевого продукта, предлагаемая суслосоевая среда сокращает время его выхода, предотвращает зарастание среды вторичным мицелием, затрудняющим отделение целевого продукта. Все это способствует быстрому получению жизнеспособного инокулюма возбудителя аскохитоза сои для селекционной работы по выведению устойчивых к аскохитозу сортов сои и для оценки существующих методов защиты сои от аскохитоза.