Способ приготовления посевного материала для выращивания бактерий

 

СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БАКТЕРИЙ , предусматривающий получение исходной суспензии микробных клеток о т л и ч а ю щ и и с я .тем, что, с целью упрсяцения, а также ускорения процесса, и сходную микробную суспензию обрабатывают озоновоздушной смесью до доснижения концентрации озона в ней 0,01-1,5 мг/л с последующим выдерживанием суспензии в течение 20-30 мин.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ССЦВЛФП

РЕСПУВЛИН (19) (И) 3(59 С 12 N 1 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, -. ь

1

ГОСУДАРСТНЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

Н ASTOPCNOMV.ÑÂÝÄàòÂÚÑòâì (21) 3457962/28-13 (22) 23.06.82 . (46) 28,02 ° 84. Бюл. М 8 (72) В.А ° Варганов, Г.П. Пинчук, В.П. Храповицкий и Л.И. Колупаева (71) Белорусокий государственный университет им. В.И. Ленина (53) 663 ° 18(088 ° 8) (56) 1. Патент Японии 9 47"38988, кл. 36(2)В-12, опублик. 1972.

2. Практикум по микробиологии.

Под ред. Н.С. Егорова. Изд-во Московского ун-та, 1976, с. 120-148..

3. Грачева Й.И., Гаврилова H.H., Иванова Л.А ° Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и жиров. M., .Пищевая промышленность

1980, с. 92-96, (54) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПОСЕВНОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ВЫРИЦИВАНИЯ SAKТЕРИЙ, предусматривакиций получение исходной суспензии микробных клеток, отличающийся .тем, что, с целью упрощения, а также ускорения процесса, исходную микробную суспенэию обрабатывают озоновоэдушной смесью до досниження концентрации озона в ней

0,01-1,5 мг/л с последующим выдерживанием суспензии в течение 20-30 мин, 1076443

Изобретение относится к области экспериментальной и промыжпенной мик. робиологии и может быть использовано при подготовке посевного материала для лабораторных микробиологических исследований, а также при крупномасштабном культивировании микроорганизмов в ферментерах.

Известен способ выращивания микроорганизмов, предусматривающий подачу к питательной среде нестериль- 10 ного воздуха с добавлением озона или перекиси водорода через 35 часов от начала процесса jlj .

Однако в данном способе озон не обходим для антисептирования подавае- 15 мого в ферментер воздуха и питательной среды, которые нестерильны.

Увеличение выхода дрожжей связано с улучшением условий культивирования. Без антисентирования воздуха и питательной среды попадакщая в ферментер посторонняя (вредная) микрофлора мешала бы росту культурыпродуцента, поскольку возможно выделение вредной микрофлорой метаболи- 2ъ тов, ингибирующих рост продуцента, а такх:.е потребление субстрата, что также снижает конечный выход продуцента.

Известен способ приготовления посевного материала микроорганизмов, заключающийся в том, что микроорга-. низмы переносятся с плотной пита- тельной среды в жидкую в виде суспензии (2) .

Данный способ практически непри- 35 годен для получения высокой биомассы в ферментерах из-за малочисленности клеток микроорганизмов в посевном материале.

Наиболее близким к предлагаемому 4р по технической сущности и достигаемому эФфекту является способ приготовления посевного материала для выращивания бактерий, предусматривающий получение исходной суспензни микроб- 45 ных клеток. Способ заключается в том, что приготавливают суспензию . микробов путем смыва с плотной среды.

Затем эта суспензия подращивается от нескольких часов до нескольких суток в жидкой питательной среде и только после этого производят основное культивирование в ферментерах для .получения высокой биомассы (3) .

К недостаткам способа относится то, что он трудоемок, особенно вто-. рая стадия, часто требует приготовления особых жидких питательных сред и режимов выращивания, .а также длителен. бО

Цель изобретения - упрощение и .. + ускорение процесса.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу приготовления посевного материала для выращивания бактерий, предусматривающему получение исходной суспензии микробных клеток, исходную микробную суспензию обрабатывать оэоновоэдушной смесью до достижения концентрации озона в ней 0,01-1 5 мг/л с последующим выдерживанием суспенэии в течение 20-30 мин.

Способ. осуществляют следующим образом.

Культуру микроорганизмов, например бактерий, петлей переносят с косяка (плотная питательная среда, на которой хранится культура) в буфер, физраствор или же в жидкую питательную среду, содержащую минеральные соли, микроэлементы и источники углерода, и ресуспендируют. Приготовленную таким образом суспензию обрабатывают путем барботажа оэоновоздушной смесью. После этого производят выдержку суспензии в течение

20-30 мин при оптимальной для данного штамма микроорганизма температуре. Посевной материал после этого можно использовать для дальнейшего культивирования.

Данная обработка увеличивает концентрацию клеток в посевном материале эа счет того, что, видимо, озон резко стимулирует. деление клеток микроорганизмов в суспензии посевного материала, что благотворно сказывается также и на их активности при дальнейшем культивировании.

Пример 1. Культуру Pseudomonas seryngaI переносят с косяка петлей в 10 мл физраствора и ресуспендируют. Приготовленную суспензию обрабатывают путем барботажа оэоновоздушной смесью до тех пор, пока концентрация озона в ней не достигнет

0,01 мг/л. После этого суспенэию помещают на 30 мин в термостат с температурой 28"С. Увеличение количества клеток в посевном материале регистрируют путем высева на полноценную плох- " ную питательную среду (MOA) и подсчета колоний.

Пример 2. Выполняют аналогично предыдущему, только бактериальную культуру ресуспендируют в мясопептонном бульоне (МПБ), конечная концентрация озона в смеси при обработке составляет 0,2 мг/л и время выдержки составляет 20 мин. Параметры и метод учета количества клеток в суспенэии идентичны примеру 1.

Результаты влияния параметров обработки посевного материала на выход микроорганизмов приведены в таблице.

1076443

Время подращи" вания, мин

Среда для суспенэий микроорганизмов

Время выдержки в мин при огпамальвой температуре

Пример

110

109

0i 01

1 Физраствор

2 Мясопептонный бульон (МПБ) 164

151

0,2

0,6

136

141

3 Фосфатный буфер

Мясопептонный бульон

118

121

1,2

106

107

1 5

Физраствор

П р и м е ч а н и е: Исходное количество клеток в суспенэии до обработки

95- 105

Таким образом, реализация предлагаемого способа по сравнению с известным позволяет увеличить количество клеток в посевном материале без подращивания на ВО% за короткий промежуток времени, в то время как реализация общепринятого способа требует затрат питательной среды и в 3-4 раза большего времени, кроме того, необходимо специальное оборудование. для подращивания (качалка-инокулятор).

Составитель B. Голимбет

Редактор Е. Папп Техред М.Тепер Корректор B. Бутяга

Заказ 651/23 .Тираж 522 Подписное

BHHHtlH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Суммарная доза озона в смеси, мг/л

Количество клеток в посевной суспензии (конечное) в 1 млх100

Контроль (прототип) с подращиванием в МПБ,количество клеток