Способ диагностики функциональной недостаточности эндометрия при привычном невынашивании беременности и бесплодии

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ЭНДОМЕТРИЯ у больных при привычном невынашивании беременности и бесплодии путем исследования биоптата эндометрия, отлич-ающийся тем, что, с целью повышения достоверности получаемых результатов, определяют белковый , липопротеидный и гликопротеидньй состав водорастворимой фракции ткани эндометрия методом электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии менее пяти фракций протеинов, трех фракций липопротеинов и трех фракций гликопротеинов устанавливают недостаточность эндометрия. Ш

СОЮЗ COBETCHHX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК зсю.

14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

M ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3447149/28-13 (22) 26.05.82 (46) 15.04.84. Бюл. У 14 (72) В.А.Бурлев, Е.M.Äåìèäîâà, Н.M.Побединский, Н.Л.Пиганова, Т.Я.Пшеничникова, В.M.Сидельникова и Т.А.Федорова (7 1) Всесоюзный научно-исследовательский центр по охране здоровья матери и ребенка (53) 618.177-071(088.8) (56) 1. Топчиева В.И., Прянишникова В.А., Жемкова З.П. Биопсия эндометрия. М., "Медицина", 1978, с. 36-93, 106-111.

2. Иауреч Г. Дискэлектрофорез, теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле. М., "Мир", 1971. (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ЭНДОИЕТРИЯ у больных при привычном невынашивании беременности и бесплодии путем исследования биоптата эндометрия, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности получаемых результатов, определяют белковый, липопротеидный и гликопротеидный состав водорастворимой фракции ткани эндометрия методом электрофореза в полиакриламидном геле и при наличии менее пяти фракций протеинов, трех фракций липопротеинов и трех фракций гликопротеинов устанавливают недостаточность эндометрия.

f085589

Изобретение относится к медицине I и может быть использовано при диагностике невынашивания беременности, бесплодии и последующей патогенетически обоснованной терапии. 5

Известен способ оценки состояния эндотермия путем гистологического исследования (-1 ).

Недостатком данного способа являетвя сниженная достоверность из-за 10 выявления повреждения только на уровне клетки (идентифицируются лишь грубые клеточные изменения) и его субъективность.

Цель изобретения — повышение до- 15 стоверности определения функциональной недостаточности эндометрия.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики функциональной недостаточности 20 эндометрия у больных при привычном невынашивании беременности и бесплодии путем исследования биоптата эндометрия, в биоптате эндометрия определяют белковый, липопротеидный и гликопротеидный состав водорастворимой фракции ткани эндометрия методом электрофореза в полиакриламидном

1 геле и при наличии менее пяти фракций протеинов, трех фракций липопротеинов и трех фракций гликопротеинов устанавливают недостаточность эндометрия.

Для анализа белков, липопротеинов и гликопротеинов гомогената ткани эндометрия используют дискэлектрофорез в полиакриламидном геле с системой гелей N - 1 по Мауреру 2 1.

Способ осуществляют следующим об40 разом.

Биоптат эндометрия получают путем взятия цуга эндометрия хаммеровской кюреткой с передней стенки матки на

7-8 и (или) 21-24 дни цикла. После

45 взятия цуга эндометрия его 10-кратно отмывают в физиологическом растворе и 5-кратно — в дистиллированной воде. По окончании отмывания ткань гомогениэируют и подвергают центрифугированию при 5-8 тыс. оборотов в

50 минуту в течение 15-30 мин. Исследуемые экстракты эндометрия смешивают с 40%-ной сахарозой 1:1 и наносят на гель в количестве 0,1-0,2 мл при концентрации белка 1-50 мг/мл.

Электрофорез проводят 1,5-2 ч при силе тока 4-5 МА через столбик геля.

Электрофореэ заканчивают, когда окрашенная подвижная граница 3-4 мл от нижнего конца трубки. По окончании электрофореза гель извлекают из трубки. Белки фиксируют в 20-407.-ной трихлоруксусной кислоте 15-30 мин и окрашивают специальными красителями: ка белок, липопротеины и гликопротеины. По окончании окрашивания гель подвергают денситометрии и анализируют содержание белков, липопротеинов и гликопротеинов, исходя из того, что одной фракции {или одному пику на денситограмме) соответствует один белок.

Для окрашивания белков применяют краситель — амидочерный 10Â, подготов. ленный по следующей прописи: амидочерный 10 — 0,1 г, безводная уксусная кислота — 100,0 мл, дистиллированная вода до 1000 мл. Столбик с гелем помещают в этот раствор и выдерживают в нем 18-24 ч. После окрашивания столбик геля обесцвечивают в 10%-ной уксусной кислоте 24-48 ч или путем злектрофореза в 57-ной уксусной кислоте 1-2 ч.

Для вЫявления липопротеинов применяют окрашивание гелем красителем— судан черный В следующего состава: судан черный  — 1,2 г, 1н раствор NaOH — 20 мл, дистиллированная вода — 380 мл, этиловый спирт до

1000 мл. Смесь выдерживают 48-9б ч о при 37 С и фильтруют. Продолжительность окрашчвания геля 2-3 ч. Обесцвечивание фона проводят в 507.-ном спирте 18-24 ч.

Для выявления гликопротеинов столбики геля обрабатывают 17.-ным водным раствором иодной кислоты 10-15 мин.

Затеи промыва|от проточной .водопроводной водой 20-30 мин и 10-15 мин дистиллированной водой. Столбики геля помещают в реактив Шиффа на 15-30 мин при комнатной температуре. Состав реактива Шиффа: 0,5 г парафуксина растворяют в 15 мл 1н НС1 при поме; шивании и доводят до 85 мл дистиллированной водой с растворенньп и в ней 0,5 г метабисульфита калия. Смесь выдерживают в темноте 24 ч, после чего добавляют О,З г активированного угля в порошке, встряхивают 2-3 мин и дважды фильтруют. Обесцвечивание геля проводят в растворе матебисульфита калия (600 мл дистиллированной воды, 30 мл 1%-ного метабисульфита калия, 30 мл 1н НС1) 15-20 мин и

1085589

Составитель В. Кузин

Редактор Т. Митейко Техред М.Надь

Корректор Ю. Макаренко б

Заказ 2102/4 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

30-40 мин в проточной и дистиллированной воде.

Денситометрию окрашенных столбиков геля проводят на приборе производства

Саг1ке зя j ena ГДР. Для этого их 5 помещают в кювету для денситометрии и записывают в виде графика показатель оптической плотности при длине волны 560 нм. Расчет денситограмм осуществляют по наличию числа пиков и их выраженности (площадь пика).

Пики фракций, не отличающиеся от фоновых значений оптической плотности геля, не учитываются.

Пример 1. Вольная П. 37 лет, 15 страдает привычным невынашиванием беременности. В анамнезе 1 преждевременные роды на 32 неделе беременности и 4 самопроизвольных выкидыша в сроки 8-10 недель беременности. Pe" зультаты обследования вне беременности: группа крови — В(Ш), резусположительная, несовместимости по резусу-фактору и системе АВО с кровью мужа не выявлено. Ректальная температура двухфазная, уровень стероидных гармонов в крови в течение менструального цикла в пределах нормы.

При гистеросальпингографии трубы проходимы. Гигтологическое исследование ЗО соскоба эндотермия, произведенного на 22 день менструального цикла— фаза секреции. У больной на 7 и 24 дни цикла исследовано состояние эндометрия по предлагаемому способу. Ус- З тановлена недостаточность гликолипопротеиновой фракции эндометрия, что указывает на его функциональную неполноценность.

Примеpro-4р да. В анамнезе 6 самопроизвольных выкидышей в сроки 5-27 недель беременности, 1 преждевременные роды мертвым плодом. Обследование вне беременности: группа крови В(Ш), резус-положительная, несовместимости по резусуфактору и АВО с-кровью мужа не выявлено. Ректальная температура двухфазная. Гистология эндометрия на

23 день.менструального цикла — фаза секреции. Исследование биоптата эндометрия предлагаемым способом на 7 и

22 дни менструального цикла выявил снижение уровней фракций протеинов, липидопротеинов и гликопротеинов, что свидетельствует о функциональной недостаточности эндометрия.

Таким образом, с помощью предлага емого способа возможно установить функциональную недостаточность эндометрия в тех случаях, когда известный способ (гистологическое исследование) не обнаруживает изменений в эндометрии.

Впервые разработан способ диагностики функциональной недостаточности эндометрия в той группе у женщин, страдающих привычным невынашиванием беременности и бесплодием, в которой установить причину патологического процесса на основании комплекса современных клинико-лабораторных данных не представляется возможным.

Предлагаемый способ позволяет диагностировать функциональную недостаточность эндометрия при патологии репродуктивного процесса (привычное невынашивание и бесплодие неясного генеза) и выбрать или провести коррекцию терапии. Правильно подобранная терапия позволяет у 78Х женщин с привычным невынашиванием пролангировать беременность и получить жизнеспособного новорожденного и у 23 женщин с бесплодием наступила беременность.