Способ получения ферментных препаратов

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРЪЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ из семенников убойных животных, включающий измельчение семенников, экстракцию и отделение жмыха с последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а-ю щ и и с я тем, что, с целью более полного использования сырья и расширенияассортимента получаемых ферментных препаратов, а также интенсификации процесса, экстракцию проводят дистиллированной водой, из по- . лученного экстракта выделяют фермент лидазу путем подкислеиия до рН 4,05 -4,12 и термообработки при 40-43 С с последующим выделением фермента хроматографией на ионообменникё , а из жмыха, полученного после экстракции, выделяют фермент ронидазу . . , 2, Способ по п.I , отличающийся тем, что выделение ронидазы из жмыха осуществляют повторным экстрагированием раствором уксусной кислоты при рН 4,8 - 5 с последующим отделением экстракта, его центрированием, стерильной фильтра (Л цией и сушкой. cz 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при хромато1графическом выделении лидазы сорбцию осуществляют на катионите КУ-30100 М при рН 4,12 - 4,2, а десорбцию о при рН 7,2-7,3.. X) о 4;

СО1ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) З(51) А 61 К 37/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ б ч

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3465133/28- 1-3 (22) 06.07.82 (46) 07.05.84. Бюл, 9 17 (72) Г.Г.Шилов, Н.Д.Мамонов, 3i.И.Стекольников и О.С.Бахтарова (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промьппленности (53) 577.15 (088.8 ) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Ф 566875, кл. А 61 К 37/48, 1876.

2. Авторское свидетельство СССР

В 111012, кл. А 61 К 35/48, 1956.

3. Авторское свидетельство СССР

У 827068, кл. А 61 К 37/48, 1978. (P4)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНЫХ ПРЕПАРАТОВ из семенников убойных животных, включающий измельчение семенников, экстракцию и отделение жмыха с последующим вьщелением целевого продукта, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью более полного использования сырья и расширения.ассортимента получаемых ферментных препаратов, а также интенсификации процесса, экстракцию проводят дистиллированной водой, из по- . .лученного экстракта выделяют фермент лидазу путем подкисления до рН

4,05 — 4,12 и термообработки при

40-43 С с последующим выделением фермента хроматографией на ионообменнике, а из жмыха, полученного после экстракции, выделяют фермент ронидазу.

2, Способ по п.l о т л и ч аю шийся тем, что вьщеление ронидазы из жмыха осуществляют повторныМ экстрагированием раствором уксусной кислоты при рН 4,8 — 5 с последующим отделением экстракта, его концентрированием, стерильной фильтрацией и сушкой.

3. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что при хроматцграфическом выделении лидазы сорбцию осуществляют на катионите КУ-30100 М при рН 4,12 †4,2, а десорбцию при рН 7,2-7,3.

1090407

Однако жмых, остающийся после 40 экстракции семенников и содержащий, действующее начало препарата ронидаза, утилизируют, а не используют. Кроме того, указанный способ получения .лидазы длителеи (до 72 ч).

Целью изобретения являются более полное использование сырья и рас.ширение ассортимента получаемых . ферментных препаратов, а также интен. .сификация процесса.

Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения препаратов иэ животного сырья. 5

Известен способ получения фермента лидазы из семенников крупного

1 рогатого скота путем автолиза ткани семенников, обработки лизата ацетоном. растворения осадка в воде и приготовления лекарственной формы препарата (1j

Известен также способ получения фермента ронидазы из семенников убойных животных путем экстракции сырья О,1 н. водным раствором уксусной кислоты при перемешивании, отделения экстракта от жмыха и последующего высушивания j2)

По известным способам получения ферментов лидазы и ронидазы в качестве исходного сырья берут семенники крупного рогатого скота, а остающийся после экстракции жмых, являющийся действующим началом препарата ронидаза, не используют, а утилизируют.

Известен также способ получения лидазы иэ семенников убойных животных, включающий измельчение семенников, экстракцию уксусной кислотой, ЗО отделение жмыха от экстракта с последующим вьделением лидазы из экстракта путем осаждения ацетоном, фильт. рации, растворения осадка, вторичной фильтрации, переосаждения в ацетон, промывки и сушки ацетоном, растворе-ния и приготовления лекарственной формы препарата (3) Укаэанная цель, достигается тем, что согласно способу получения фер- ментных препаратов, из семенников убойных животных, включающему измель. чение семенников, экстракцию и отделение жмыха с последующим выделением целевого продукта, экстракцию проводят дистиллированной водой, из полученного экстракта вьделяют фермент лидаэу путем подкисления до рН

4,05 — 4,12 и термообработки при 4043 С с последующим выделением фермен; та хроматографией на ионообменнике, а из жмыха, полученного после экстракции, выделяют фермент ронидазу..

Вьделение ронидазы из жмыха осуще ставляют повторным экстрагированием раствором уксусной. кислоты при рН

4,8-5,с последующим отделением экстракта, его концентрированием, стериль. ной фильтрацией и сушкой.

При хроматографическом выделении лидаэы сорбцию обычно проводят на катионите КУ-30-100 М при рН 4,124,2, а десорбцию при рН 7,2-7,3.

Способ позволяет одновременно извлечь два фермента иэ одной порции сырья, решить проблему создания безотходной технологии, тем самым интенсифицировав процесс эа счет рационального использования сырья, сокращения и упрощения процесса выделения лидазы — одного иэ получаемых продуктов, ускорить процесс в целом. !

Технологическая схема предлагаемого способа получения ферментных препаратов из семенников убойных животных может быть представлена в следующем виде.

Семенники крупного и мелкого рогатого скота (замороженные при (-18 )- (-20 С)

Измельчение на дробилке

Измельчение на куттере

Экстракция (рН 6,8-7,2, жидкост" ный коэффициент 1:1, время 28-32 мин при постоянном перемешивании, экстрагент-;дистиллированная вода)

Отделение жмыха! 090407

Экстракт

Концентрирование

Сушка

Подкисление экстракта уксусной кислоты до рН 4,05 - 4,12

Прогрев .экстракта до 40-43 С не о более 25 мин при постоянном перемешивании

Охлаждение с последующим отделением осадка

Сорбция осветленного экстракта на ионообменной смоле (РН 4,12-4,2)

Отделение балластных веществ промывкой смолы ацетоном и ацетатным буфер .ным раствором

Отделение фермента лидазы промывкой подщелоченным раствором (РН 7,27,3) дистиллированной воды

При! отовление лекарственной формы препарата лидаза

Длительность этого процесса 36 ч.

Пример 1. 100 кг замороженных семенников крупного и мелкого рогатого скота измельчают на дробилке (куски размером до 50 мм) и затем на куттере (размер частиц не более

1 мм )в холодильной камере при температуре не выше — 15 C переносят сырье в реактор (емкостью 250 л, открытого типа, с рубашкой для подо- грева, нижним спуском, мешалкой якорного типа со скоростью вращения

60-70 об/мин), заливают 100 л дистиллированной воды, смесь прогревают

40 и перемешивают для равномерного распределения частиц сырья в экстрагенте (5 — 1О мин), отмечают начало экстракции и регистрируют температуру смеси (0-2 С), через 28 мин выключают мешалку и подают смесь на

45 сепаратор типа "yestpgalea" или

Laval", после отделения жмыха экстракт переносят в емкость (на з

250 л, открытого типа, с рубашкой для быстрого подогрева н охлаждения, с нижним спуском), добавляют 800 мл уксусной кислоты и подогревают нри постоянном перемешивании температуо

t ру доводят до 40 С не более 25 мин и сразу охлаждают до 8-10 С в течее ние 1,5-2 ч, а затем экстракт фильтруют на воронках с бумажными фильтрами и подают на колонку, заполненЭкстракция (раствором уксусной кислоты РН 4,8-5,0, жидкостный коэффициент 1:0,3, время 2-2,5 ч)

Отделение мезги

Стериальная фильтрация Приготбвление лекарственной формы препарата ронидаза ную смолой КУ-30-100 М в течение 1ч, по л чего колонку промывают 350 л ацетона (1,5 ч) и 40 л-ацетатного буфера (0,2 н. раствор) в течение

0,5 ч (водный раствор ацетона подают на регенерацию), а фермент лидазу отделяют промывкой смолы 50 л дистиллированной воды, подщелоченной водным раствором аммиака до РН 7,2, в течение 1,5 ч, полученный раствор фермента (элюат) передают на стерильную фильтрацию, разливают во флаконы (количество раствора фермента во флаконе определяется после выявления специфической активности элюата), осуществляют сублимационную сушку, укупоривают и маркируют флаконы. При этом на выход лидазы 310-320 флаконов из 1 кг сырья с активностью .64 усл.ед. в 1 флаконе. Оставшийся после экстракции лидазы жмых (количество 33-34 кг) переносят в реактор емкостью 150 л, открытого типа, с якорной мешапкой (120-130 об/мин) и нижним спуском, заливают 100 л раствора уксусной кислоты (450 мл

СН СООН на 100 л воды), рН смеси при этом должно составлять 4,8 (корректировку РН производят уксусной кислотой или водным раствором аммиака) экстракц по проводят при непрерывном перемешивании и 18-20 С, через 2 ч о смесь сепарируют (сепаратор "Vest1090407

Составитель О.Скородумова

Редактор Г.Гербер Техред М.Гергель Корректор В. Бутяга

Заказ 2976/7 Тираж 688

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное ул. Проектная, 4

phalea" или "oc -Ьачо1", а затем концентрируют в вакуум-выпарной установке (" Olso" или "Luwa") до объема 10-11 л, подвергают стерильной фильтрации и сушке в сублимационной 5 установке. Количество порошка 520585 г с активностью не ниже 256 усл. ед. в 100 мг. Затем в активный порошок вносят тальк иэ расчета получения 32 усл.ед, в IOO Mr, ïåðåìåøèâàют в шаровой мельнице в течение

2-2,5 ч. Полученный порошок расфасовывают во флаконы из расчета по

5 r порошка в 1 флакон. Выход лекарственной .формы 410-440 флаконов. 15

Пример 2. Берут 100 кг замороженных семенников крупного и мелкого рогатого скота, измельчение ведут так же, как в примере 1. Экстракцию проводят при 4 С в течение 20

32 мин, смесь сепарируют, к экстракту добавляют 850 мл уксусной кислоты и подогревают при постоянном перемешивании до 43 С (прогрев не более о

25 мин), а затем охлаждают до 6 С 25 в течение 2,5 ч последующим отделением ocàäêa. на воронках с бумажными фильтрами. Процессы сорбции и отделенг.- балластных веществ те же, что и в примере. I.фремент лидазу отделяют 3б промывкой смолы 55 л дистиллированной воды, подщелоченной водным рас. твором аммиака до рН 7,3, десорбцию проводят в течение 2 ч. Процессы фильтрации, сушки и приготовления лекарственной формы те же, что и в примере l. При этом выход лидазы

31 5-330 флаконов из 1 кг сырья из расчета 64 усл.ед. в I флаконе.

Технологические процессы полученияо 40 ронидазы из жмыха те же, что и в примере I. .Выход лекарственной формы ронидазы 4,5-420 флаконов.

Пример 3. Берут 100 кг .замороженных семенников крупного и

Юэлкого рогатого скота, иэмельчение ведут так же, как и в примере I.

Зкстракцию проводят при 3 С в течео

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, яие 30 мин, смесь разделяют на сепараторе, добавляют к экстракту 825.мл уксусной кислоты и прогревают пои непрерывном перемешивании до 42 С не более 25 мнн, а затем охлаждают в течение 2 ч до 8 С с последующим

-о отделением осадка на воронках с бу-. мажными фильтрами, после чего проводят сорбцию и отделение балластных веществ по примеру 1, а десорбцию фермента лидаэы проводят 50 .л дистиллированной воды, подщелоченной водным раствором аммиака до рН 7,25 в течение 1,5 ч. Процессы фильтрации, сушки и приготовления лекарственной формы те же, что и в примере 1. При этом выход лидазы 310-320. флаконов и. 1 кг сырья с активностью 64 усл.

-ед. В качестве экстрагента для извлечения ронидазы из жмыха используют дистиллированную воду, подкисленную уксусной кислотой (420 мл уксусной кислоты на 100 л воды), рЯ сиеси при этом .должно быть 5 экстракцию проводят по примеру 1, а затем смесь переносят на фильтрационные мешки (ткань Ф 2) и колируют в течение

18 ч, остальные операции по примеру

1. Приготовление лекарственной формы ронидазы — по примеру 1. Выход ронидазы 400-415 флаконов.

Из перерабатываемых отечественной промышленностью 25 т семенников крупного рогатого скота для производства лидазы по действующей технологии получают 7 млн. флаконов лидазы в год. По предлагаемой технологической схеме можно получить дополнительно из 25 т семенников 1 млн. флаконов лидазы и 32 тыс. флаконов ронидазы в годе Причем трудовые затраты, стои-. мость реактивов и использование оборудования примерно такие же, как и при Производстве лидаэы по действующей технологии.

Экономический эффект от внедрения предлагаемого способа 78960 руб. в год.