Способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содержащего фосфолипццы, раствором метилирующего агента с последунмцим газокроматографическим анализом отличающ и и с я тем, что, с целью упрощения и сокращения времени анализа, слой сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметнламмония.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

pe) G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ @

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3328122/28-13 (22) 29.07.81 (46) 07. 05. 84. Бюл. N 17 (72) А.Л.Перцовский и Л.Б.Сугак (71) Белорусский научно-исследова-. тельский санитарно-гигиенический институт (53) 616.07(088.8) (56) 1. Chalvardjan А. Biochem. I, 1964, 90. р. 518. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИИРНОКИСЛОТНОГО СОСТАВА ФОСФОЛИПИДОВ пу„,SU„„1091066 А тем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента; содержащего фосфолипиды, раствором метилирующего .. агента с последующим газохроматографическим анализом .о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения и сокращения времени анализа, слой сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметиламмония.

Составитель Н.Валеева

Техред Т.Дубинчак Корректор В.Бутяга

Редактор Л.Филь

Заказ 3073/40 Тираж 823 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ПЛП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная. 4

11 10910

Изобретение относится к аналитической химии и биохимии и может быть использовано при количественном определении жирнокислотного состава фосфолипидов.

Известен способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содер- 10 жащего фосфолипиды, раствором метилирующего агента с последующим газохроматографическим анализом (1 3.

Недостатком известного способа является сложность и длигельность 1$ анализа.

Цель изобретения вЂ” упрощение и сокращение времени анализа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения жирнокислотного состава фосфолипидов путем экстракции липидов, отделения их методом тонкослойной хроматографии, обработки слоя сорбента, содержащего фосфолипиды, раствором метилирующего агента с последующим газохроматографическим анализом слоя сорбента обрабатывают раствором хлористого тетраметиламмония в щелочной смеси метанол-хлороформ, отделяют сорбент, повторно добавляют щелочной раствор хлористого тетраметиламмония.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску силикагеля с фосфолипидами

3S помещают в колбу на 20 мл, в которую добавляют 5 мл смеси растворителей хлороформ-метанол (1:1), содержащую смесь гидрата окиси калия и хлористого тетраметиламмония с концентрацией каждого по 5 мг/мп. Смесь встряхивают в течение 10 мин, растворитель фильтруют.и добавляют к нему 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора едкого кали и хлористого тетраметиламмония, раствор концентрируют под вакуумом или в токе азота до 0,1 мл и алик66 ъ вотную часть (1 мкл) вводят в испаритель хроматографа.

Пример. Ткань печени крысы (1 г) экстрагируют 20 мл смеси хлороформметанол по Фолчу, после чего экстракт липидов в количестве 10-12 мг, в пересчете на сухое вещество наносят на стеклянную пластину с силикагелем для тонкослойной хроматографии.

Разделение липидов проводят в системе гексан-эфир-ледяная уксусная кислота (75:25:2).

Полосу фосфолипидов соскребают с пластины. Затем к силикагелю добавляют 1,5 мл смеси растворителя хлороI форм-метанол (1:1), содержащий смесь едкого кали и хлористого тетраметиламмония (каждый в концентрации

5 мг/мл). Смесь взбалтывают в течение 10 мин, отфильравывают силикагель. К раствору добавляют 0,4 мл хлороформ-метанольного раствора смеси едкого кали и хлористого тетраметиламмония {при необходимости раствор концентрируют под вакуумом) и аликвотную часть (1 мкл) вводят в испаритель хроматографа. "Вырухром" с пламенно ионизационным детектором.

Используют колонку длиной 2 м, заполненную силанизированным хромосорбом с 57. полидиетиленгликольсукцината. .Температура колонки 200 С, детектоо ра 300 С, иснарителя 330 С. Газ-носитель вЂ” аргон. Испаритель хроматографа заполняют на 1/3 кусочками мелкораздробленной проволоки из нержавеющей стали.

Количественный расчет проводят методом внутренней нормализации по площадям пиков.

Использование способа в биохимических исследованиях при определении жирнокислотного состава фосфолипидов позволит сократить время анализа до

25 мин. Способ прост в исполнении, исключает использование агрессивных реактивов.

Способ определения жирнокислотного состава фосфолипидов

Способ определения концентрации билирубина в желчи // 1091064

Способ окраски кровеносных сосудов внутренних органов на гистологическом препарате // 1091058

Способ окраски гиалуроновой кислоты в тканях глаза // 1091056

Способ определения моноформазана в ткани на гистологическом препарате // 1091054

Способ определения содержания гидроперекисей липидов в биологических тканях // 1084681

Устройство для определения реакции мышечной ткани на раздражение // 1084680

Способ определения дигидротестостерона и его производных в масляной смеси // 1083116

Способ выделения специфического фактора уш // 1082338

Способ определения фаголизосомальных структур клетки // 1081542

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750