Способ получения специфической сыворотки для идентификации жгутикового антигена н21 у еsснеriснiа coli

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЖГУТИКОВОГО АНТИГЕНА Н2 г у ES(JHERICHIA COLI, включающий иммунизацию животных антигеном с последующей адсорбцией иммунной сыворотки антигенами, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве антигена используют штамм (Б99 : : Н21м) № 41 Escherichia coli серогруппы 055:К59(В5), а адсорбцию сыворотки ведут соматическим антигенным комплексом этих бактерий.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) 01) (g1)g А 61 К 35/14

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

Н АВТОРСНОМЪГ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 3510476/13 (22) 09.11 ° 82 (46) 23 ° 03.91 ° Бюл. (71) Московский научно-исследователь-. ский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72) Ю.А Ратинер и З.В.Климова (53) 615.373(088.8) .(56) Ewing M.N. et al "Studies on

the sегоlogy of the Е.coli group".

CDC, Atlanta, Creorgia, August, 1956, Reprinted August, 1967..Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в производстве диагностических препаратов, предназначенных для серологической идентификации возбудителей эшерихиозов.

Известен способ получения специфической сыворотки для идентификации жгутикового антигена Н21 yEsche-.

richia coli путем иммунизации кроликов штаммом серовара 0111.; K58(B4):H21 с последующей ацсорбцией полученной сыворотки прогретой культурой неподвижного варианта гомалогичного штамма и живыми культураьы серовара 086:

:Кбl(В7):Hll ° . Однако этот способ сложен, поскольку требует использования для иммунизации диких штаммов с необходимостью адсорбции антител к антигенам Нll, что связано с большим расходом питательных сред и большими затратами труда.

Целью изобретения является упрощение способа.

I ! (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ Д3И ИДЕНТИФИКАЦИИ

ЖГУТИКОВОГО АНТИГЕНА Н21 у ESgHERICHIA

COLI включающий иммуниз ацию животных антигеном с последующей адсорбцией иммунной сыворотки антигенами, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве антигена используют штамм (В99

Н21м) Ф 41 Escherichia coli серогруппы 055:K59(B5), а адсорбцию сыворотки ведут соматическим антигенным комплексом этих бактерий.

Ю

Цель достигается тем, что при ,осуществлении способа получения специфической сыворотки для идентифика- ( ции жгутикового антигена Н21.у Escherichia cali, включающего иммунизацию р животных антигеном с последователь" ной адсорбцией иммунной сыворотки антигенами, в качестве антигена ис-." пользуют штамм (В99:Н21 м) Р 41

Escherichia coli серогруппы 055: К59 (В51. а адсорбцию сыворотки ведут соматическим антигенным комплексом этих бакте1 рий.

Способ выполняется следующим образом.

Антиген для иммунизации животных готовят из искусственно сконструированного штамма В99:Н2IM принадлежа- ф» щего к серогруппе 055:K59(B5), жгутиI ковый антиген которого содержит только специфический комплекс антигена Н21 и не содержит парциальных компо" кентов, общих с антигеном Hll. Поэтому адсорбция нативной сыворотки может быть ограничена только удалением

1092776

Составитель

Техред M.Äèäûê

Редактор О.Юркова

Корректор M.Càìáîðñêàÿ

Заказ 1059 Тираж 451 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101 антител к соматическим антигенам с использованием в качестве адсорбента прогретой культуры любого штамма серогруппы 055:K59(BS) либо живой или 5 формалинизированной культуры любого штамма этой серогруппы обладающего любым, кроме Н21 жгутиковым антигеном, или неподвижного Штамм В99:Н21м депонирован sa У .41 в коллекции ГИСК им Л.А. Тарасевича.

Пример. ОКН-сыворотки получают от кроликов, иммунизированных штаммом В99:Н21м и для сравнения диким штаммом Â281, принадлежащим к 15 природному серовару 055:K59(BS):Н21.

Бульонную формапинизированную культуру пропассированного предварительно через полужидкий агар штамма вводят животным внутривенно четырехкратно в 20 дозах 0,25; 0,5; 1,0 и 2,0 мп с интервалами 4 дня. Кровь берут на 7день после последней инъекции и отделяют сыворотку. Сыворотки нативные и адсорбированные проверяют на наличие 25

О К и Н-антител в пробирочных реакциях агглютинации общепринятым методом. Антигеиом для индикации Н-айти тел служат приготовленные таким же способом, как и для иммунизации 3р бульонные, формалинизированные культуры Н-тест-штаммов Международной коллекции эшерихий:11йа-44 (08 NE:Н21), Яи 4321-.41 (013зKllLçН11), Антиге нами для индикации О и К-антител слу- 35 жат соответственно прогретая 1 ч при

100 С и живая агаровая культуры неподвижного тест-штамма Международной коллекции.эшерихий Su 3912-41 с антигенной формулой 055:К59(В5}. Сыворот- 40 ку к штамму В99:Н21м адсорбируют тестштаммом Su 3912-41 или диким штаммом

В551 серовара OS5: К59(В5):Hll. Сыворотку к штамму В281 адсорбируют диким штаммом В551. Адсорбентом служат 45 агаровые культуры, выращенные на 1,57. агаре Хоттингера в чашках Петри при

37 С в течение 20 ч. Бактерии смывают с поверхности агара иэотоническим раствором хлорида натрия и убивают добавлением 0,5Х формалина. Разные до-1 зы адсорбента (доза выражается в количестве чашек, с которых получен адсорбент) осаждают центрифугированием и осадок смешивают с 5 мл сыворотки, разведенной 1:10 изотоническим раствором хлорида натрия, Смесь инкубируют 2 ч при 37 С, после чего сыворотку освобождают от бактерий центрифугированием. Полноту адсорбции контролируют посредством реакции агглютинации l определяют количество адсорбента (в пересчете на.1 мп неразведенной сыворотки ), необходимое для полной адсорбции антител, подлежащих удалению.

Сыворотка, полученная к штамму

В99:Н21м,не содержит антител к гетерологичным Н-антигенам эшерихий. Для приготовления из нее специфической чистотой Н-сыворотки требуется адсорбента и, следовательно, расхода питательных сред) B 5 раэ меньше, чем для приготовления анапогичного препарата другим способом, взятым дпя сравнения. Кроме того, при использовании предложенного способа лучше сохраняются специфические Н"антитела.

Использование предлагаемого спосо" ба получения диагностической специфической чистой Н21 сыворотки по сравнению с известным обеспечивает уменьшение расхода адсорбента и, следовательно, упрощение производственного процесса, уменьшение расхода питательных сред, посуды и затрат труда; сохранение более высокого титра специфических Н-антител и, следовательно, увеличение выхода готовой продукции (при условии уравнивания титра специфических антител в готовом препарате)

Все это обеспечивает упрощение и повышение экономичности процесса производства.