Способ получения белкового гидролизата

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОГО ГИДРОЛИЗАТА, предусматривающий ферментативный гидролиз эритроцитарного белка ферментом, выделенным из биомассы грибов, отличающи и с я тем, что, с целью улучшения качества гидроЛизата путем повы«шения в нем содержания аминокислот, гидролиз осуществляют ферментативным комплексом, вьщеггенным из гриба Trichothecium roseum, при 40-60 С и рН 10,0.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

\ И ЛИОН.

РЕСПУБЛИК зш А 23 3/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ЕВТСОСНСМЪ СВИЕЕТЕЛЬСТВУ (21) 3396884/28-13 (22) 07.01.82 (46) 07.08.84. Бюл. В 29 (72) Т;В. Ткешелашвили, Ц.Н.Степанова и М.Д. Дзигуа (71) Научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови им. акад. Мухадзе (53) 668.392(088.8) (56) 1. Степанова Ц,Н. Изучение биохимических свойств трихолизина— протеолитического комппекса Trichotheс1цш roseum. Авторефе канд. дис.М., МГУ, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР

Ó 860765, кл, А 61 К 37/02, 1979.

SUÄÄ 1106469 А (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ BEJIKOBOI 0

ГИДРОЛИЗАТА, предусматривающий фер" ментативный гидролиз эритроцитарного белка ферментом, выделенным из биомассы грибов, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью улучшения качества гидролизата путем повы щения в нем содержания аминокислот, гидролиз осуществляют ферментативным комплексом, выделенным из гриба

Trichothecium roseum, при 40-60 С и -рН 10,0 ° 1 11064

Изобретение относится к медицине. в частности к способу получения белкового гидролизата для парентерального азотистого питания организма.

Известен способ гидролиза соединений типа эфиров с помощью протеолитического комплекса — трихолизина, выделенного из гриба Тгicbothecium гоseum, при рН 8 $1 J.

Данный способ не пригоден для получения белкового гидролизата из эритроцитарной массы.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения белкового гидролизата, предусматривающий ферментативный гидролиз эритроцитарного белка ферментом, выделенным из биомассы грибов, который заключается в получении белкового гидролизата, где в качестве белкового, сырья используют эритроцитарную массу и гидролизуют ее грибковым ферментом Actinomyces Fradie 110 при 37ОС и рН 8,0 до свободных ами нокислот P2).

Однако в гидролизате остается еще значительное количество пептидов, т.е, происходит неполный гидролиз белка, в результате чего количество свободных аминокислот сравнительно .низкое (79,18 г/л).

Цель изобретения — улучшение качества гидролизата путем повышения в нем содержания аминокислот.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения, белкового гидролизата, предусматривающему ферментативный гидролиз

40 эритроцитарного белка ферментом, выделенным из биомассы грибов, осуществляют гидролиз ферментативным комплексом, выделенным из гриба о

Тг сЬо Ьесшт roseum, при 40-60 С и рН 10,0, 45

Сущность способа заключается в следующем.

Ферментативный,комплекс - трихолизин обладает протеолитическими свойствами..Выбор значений рН и тем50 пературы гидролиза обусловлен тем, что рН оптимумы у одного и того же фермента, определенные в присутствии различных субстратов, неодинаковы, что объясняется тем, что для воз-. никновения связи энзим-субстрат, не только энзим, но и субстрат должны быть в диссоцированном виде.

69 2

Так при рН 6-9 глубина гидролиза достигает всего 30-70%, при рН 10

90% и при рН 11-14 15-70%.

При температуре ниже 40 С общий выход аминокислот составляет 72,3%, при температуре выше 60 С 68,6%.

При интервале температур 40-60 С глубина гидролиза достигает 90%.

Содержание незаменимых и заменимых аминокислот в белковом гидролизате представлено в таблице.

Белковый гидролизат, Аминокислоты г/л, полученный способом предлагае- известмым ным

Незаменимые

2,10

3,0

Изолейцин

15,70

12,50

12,6

Лейцин

10, 12

Лизин

6,64

13,6

Фенилаланин

Метионин

5,94

2,03

3, 16

Треонин

Триптофан

Валин

5,39

1 87

11,36

13,67

Заменимые

Алании

Аргинин

10,.36

0,4

6,87

0,47

Аспарагиновая

1,44 кислота

Глютаминовая кислота

Глицин

1> 56

0,68

Следы

3,2

Гистидин

3,28

Пр олин

Серии

0,8

2,32

1,79

0,54

Цистин

Тирозин

0,12

4 68

0,63

1 40

1! 06469

Составитель В. Голимбет

Редактор А. Мотыль .Техред Ж.Кастелевич Корректор В. Синицкая

Заказ 5652/ 1 Тираж 589 Подписное

BHHHIIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 1. Верут 1 л эритроцитарной массы,,гемолизируют 1 л воды, заливают в стеклянный резервуар с автоматической мешалкой 8 л ацетона и 80 мл концентрированноф соляной кислоты, маленькими порциями добавляют в ацетон эритроцитарную массу и включают мешалку на 2 мин. Выделившийся при этом белыми хлопьями белок вместе с окрашенным ацетоном сливают в приемник, который оснащен фильтром, промывают массу чистым ацетоном до полного обесцвечивания, а затем сушат в термостате и просеива" ют через металлические сита. Из полученного белка готовят 27.-ный раствор и проводят ферментный гидролиз с помощью микробного фермента Trichothecium roseum следующим образом: белок заливают дистиллированной водой и кипятят до полного растворения (15 мин), охлаждают, доводят р до 10,0, а затем переливают в специальный реактор. Добавляют фермент по весу в соотношении 1:20= о

=Ф:С. Гидролиз проводят при 55 С и рН 10, 2 в течение 72 ч.

К реактору присоединена система фильтров, которая обеспечивает удаление всех нежелательных примесей из гидролизата..Автоматическое регулирование р, температуры, а также герметическая фильтровальная система позволяют проводить гидролиз в стерильных условиях.

Глубину гидролиза определяют соот ношением аминного азота к общему, а на аминоанализаторе "Jeol I ЬС-6AH" определяют качественное и количественное содержание свободных аминокислот.

В примере 1 глубина гидролиза доходит до 907. с сохранением всех незаменимых аминокислот, всего

97,44 г/л аминокислот.

Пример 2. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но при рН

9,0 и 40 С. Общий выход аминокислот составляет 80 г/л.

Пример 3. Способ осуществляют аналогично примеру 1, но при рН 11,0 и 60ОС. Общий выход свободных аминокислот составляет 79,64 г/л, что не превышает показателя известного способа.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет вести гидролиз белка до

90Х в то время как в известном способе глубина гидролиза доходит до 80 .

Достигнутая глубина гидролиза бел ка дает основание предполагать повышение лечебной эффективности при использовании белкового гидролизата при некоторых патологических состояниях (белковое голодание организма, гипопротеинемия различного происхождения, ожоговая болезнь, гнойно-хирургические заболевания и др.).