Способ определения половой эякуляторной активности самца комара

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГОЛОВОЙ ЭЯКУЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТИ .СМЦА КОМАРА, включаощий его совместное содержание с самками и определение количества извергаемой семенной жидкости, о тл и ч а ю щ и йс я. тем, что, с целью повьшения точности способа, совместное содержание самца и самок осуществляют в течение 50-70 мин, количество извергаемой семенной жидкости оценивают путем сравнения количества секрета в придаточных железах у прокопулировавшего и девственного самцов, а половую эякуляторную активность определяют по количеству i извергаемого самцом белка секрета в процессе одной копуляции.

89 01) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

NUW

РЕСПУБЛИН ау) А 01 К 67 00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТЬИ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВЧОРСНОМЪГ СЮДВТЙЛЬСТВ У

r - 11%РЭЧ(а 1я

М ФЙ5 2 ЭЗРАЛ (21) 3510497/30-15 (22) 12.11.82 (46) 30. 10. 84. Бюл. У 40 (72) P.È.Ëà÷èíîâà, Н.Ф.Захарова и О.В.Захарченко (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И.Марциновского (53) 595.70(088.8) (56) 1. Jones I.Ñ. Wheeler, 1965, Biol Bull. Woods Holi 129 р.134-150.

2. Craig I.Â. Jr, 1967, Science

Wash, 156, р. 1499.

3. Jvadz R.W. Craig .А.В. Jr, 1970, Mosquito News 30, Р 3, р. 355. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛОВОЙ

ЭЯКУЛЯТОРНОЙ АКТИВНОСТИ САМЦА КОМАРА, включающий его совместное содержание с самками и определение количества извергаемой семенной жидкости, о тл и ч а ю шийся. тем, что, с целью повыыения точности способа, совместное содеркание самца и самок осуществляют в течение 50-70 мин, количество извергаемой семенной жид-. кости оценивают путем сравнения количества секрета в придаточных железах у прокопулировавшего и девственного самцов, а половую эякуляторную активность определяют по количеству извергаемого самцом белка секрета в процессе одной копуляции.

120949 2 влечение сперматек и бурсы из самок и определение методом фазово-.контрастного микроскопирования степени наполненности их эякулятом, т.е. секретом со сперматозоидами (много-мало) (3) .

Недостатком этого способа является оценка эякулята по совокупности входящих в его состав компонентов, а не раздельно по сперматозоидам и

10 секрету придаточных желез. Кроме того, эякулят оценивается не в абсолютных значениях, а в относительных единицах с помощью символов, которые означают полное (++) или частичное

I5 (+) заполнение эякулятом сперматек и бурсы, либо отсутствие его в сперматеках (-) и бурсе (о).

Цель изобретения — повышение точности способа.

20 Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения половой эякуляторной активности самца комара, самца содержат совместно с самками в течение 50-70 мин, коли25 чество извергаемой семенной жидкости оценивают путем сравнения количества секрета в придаточных железах у прокопулировавшего и девственного самцов, а половую эякуляторную активЗ0 ность определяют по количеству извергаемого самцом белка секрета в процессе одной копуляции.

Предлагаемый способ был испытан

I, на желтолихорадочном комаре Aedes аедур 1, культивируемом в лаборатории.

Пример 1. Определение количества белка секрета, извергаемого из придаточных желез самцов Ае.aegypв процессе первой копуляции.

В контроль брали 25 девственных самцов 3-х дневного возраста, рассаженных по одному в садок. В опыт брали брачные пары: 50 девственных самцов того же возраста и 50 самок

5-ти дневого возраста, рассаженных попарно в садок. Через 1 ч из самок выделяли и вскрывали сперматеки. Из

50 самок у 40 в сперматеках были сперматозоиды у 10 — нет. Следовательно, из 50 самцов прокопулировало 40, каждый из которых опознан по осемененной самке.

1

Изобретение относится к медицине и сельскому хозяйству, в частности к размножению насекомых, и может быть использовано при разработке оптимальных методов массового культивирования комаров, в токсикологии, при разработке методов борьбы и оценке эффективности мероприятий против . насекомых — переносчиков возбудителей паразитарных болезней.

Самец насекомых при копуляции извергает в половые пути самки семенную жидкость (эякулят), в состав которой входят сперматозоиды и секрет половых придаточных желез.

Секрет половых придаточных желез самца. играет жизненно важную роль в процессах нормального размножения насекомых. Самцу он необходим для активации спермы, сохранения ее подвижности, для переноса спермы в самку при копуляции. Самке он необходим для нормального оплодотворения яиц, обеспечения жизнеспособности и нормального развития эмбриона, а также ля стимуляции яйцекладки. Без сек;ета придаточных желез самец не в. состоянии осеменить самку, а самка дать потомство.

Известен способ определения половой эякуляторной активности самца комара по количеству попавших в самку сперматозоидов. Способ основан на извлечении из прокопулировавшей самки органов половой системы(сперматек, бурсы) и подсчете в них числа сперматозоидов 1

Однако этот способ очень трудоемкий и неточный, так как подсчет сперматозоидов (в среднем 20.000 в каждой!,. 10 самке) проводится визуально и с большим приближением.

Известен способ определения количества секрета придаточных желез, необходимого для моногамии. Способ включает получение экстракта из конца брюшка, содержащего продаточные железы, разведение экстракта, микроинъекции в самку и выражение количества секрета, вызывающего монога- 50 мию у самки, в эквивалентах (1/2, 1/4, ... 1/128 часть железы), а не . в абсолютных значениях (2) .

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения половой 55 эякуляторной активности самца комара, в основе которого лежит совместное содержание самца с самками, изИз 25 девственных и 40 прокопулировавших самцов выделили придаточные железы в физиологическом растворе Aedes Из них экстрагировали секрет 1,28 М раствором NaCl,îïðåäåëèли количество белка в экстракте. Для

3 11 этого выделенные железы перенесли в пробирку с 1, 28 М раствором NaC1 и.поместили на 24 ч в холодные условия.

Надосадок отделили от осадка центри-. фугированием при 800 об/мин в течение 10 мин и определили в нем колию чество белка по методу Lowry в модификации Hartree.

Установили,что в придаточных железах содержится: у 25 девственных самцов — 18,9 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,756 мкг белка/особь. у 40 однократно прокопулировавших самцов — 15,8 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,395 мкг белка/особь.

Белка секрета в придаточных железах у однократно прокопулировавшего самца.меньше по сравнению с контролем на 0,361 мкг (0,756 мкг — 0,395 мкг=

= О, 361 мкг) .

Следовательно, половая эякуляторная активность самца Ае.Aegypti npu однократной копуляции составила в среднем 0,361 мкг белка секрета на самку.

Пример 2. Определение количества белка секрета, извергаемого самцом Ае.aegypti при многократной копуляции.

В контроль брали 25 девственных . самцов, как в примере 1. В опыт брали гаремы: 25 самцов, к каждому из

Которых подсаживали по 10 самок 5-ти дневного возраста (acего 250 самок).

Через час из самок выделили и вскрыли сперматеки. Из 250 самок у 110 в сперматеках .были сперматозоиды, следовательно 25 подопытных самцов совершили 110 копуляций, в среднем каждый самец копулировал 4,4 раза.

Из 25 девственных и 25 прокопулировавших самцов выделили придаточные железы в физиологическом растворе

Aedes, из них экстрагировали секрет ш определили количество белка, как в примере 1.

Установили, что в придаточных же,лезах содержится: у 25 девственных самцов — 18,6 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,744 мкг белка секрета/особь, у 25 многократно прокопулировавших самцов — 2,5 мкг белка секрета, т.е. в среднем 0,1 мкг бел20949 4 ка/особь. Белка секрета в придаточных железах самца, осеменившего 4,4 самки, меньше по сравнению с девственными на О, 644 мкг (О, 744 мкг — О, 1 мкг

= 0,644 мкг). На одну самку пришлось в среднем 0,146 мкг белка секрета (0,644 мкг белка : 4,4 копуляций

= 0,146 мкг белка). Следовательно, половая эякуляторная активность сам10 ца при многократной копуляции составила в среднем О, 146 мкг белка секрета на самку.

Видно, что половая эякуляторная

15 активность самца непостоянна. Она истощается при многократной копуляции,так как на .каждую осемененную ccw ку приходится в среднем 0,146 мкг белка секрета (пример 2), вместо

2р 0,361 мкг белка у самок из брачной пары (пример 1).

В таблице суммированы результаты опытов, поставленных на самцах Ае.aegypti 3-х дневного возраста с нормаль25 ной копулятивной активностью (4,2 «

0,3 самки), из которых видно, что предлагаемый способ является чувствительным и обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов.

В предлагаемом способе совместное содержание самца с самками осуществляется в течение 50-70 мин, поскольку установлено, что в этот период самцы в гаремах полностью реализуют свою

35 половую потенцию. Способ позволяет определить максимальную половую эякуляторную активность самца комара о брачным парам и истощение ее в зависимости от числа осемененных самок.

Предлагаемым способом возможно определить количество секрета, вызывающее моногамию у самки. Так максимальное количество эякулнруемого самцом секрета (0,361+0,11 мкг белка) можно

4 рассматривать как верхний предел значений, вызывающих моногамию у самки

Aedes aegypti Способ может быть использован с диагностической целью для выявления в репродуктивной сис5Э теме самца тончайших нарушений, которые могут существенно повлиять на репродуктивный потенциал самки и брачное поведение.

1120949

ЧислО ОпытОВ

Число совершенных самцом копуляций

Количества белка секрета (мкг) в половых железах самца Аейез aegy-

pti до копуляции

М+м

4,2 0,3

Редактор И.Касарда

Заказ 7834/2 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий. 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

0,75010,05

0,75020,05

Количество белка секрета (мкг), извергаемого в составе эякулента в самку М м м, Х

0,361+0,011 3,1

0,146>0,017 11,6

Составитель В.Адамушкин

Техред З.Палий Корректор Л.Пилипенко