Гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты,проявляющий антиагрегационную активность и способ его получения

 

1. Гидрохлорид этилового 8-бромаденоэин-5 -карбоиовой кислоты формулы NHsCT ноос но ш п1роявляющий антиагрегацноннз активность . 2. Способ получения гадрохлорида 8-бромаденозни-5 -карбоновой кислоты, отличающийся тем, что аденозин бронируют водным раствором брома в ацетатном буфере, в получен ный 8-брсн4аденозин вводят защитную ;изопропипиденовуюгруппу, завдивбенное производное 8-бромаденозина окисляют перманганатом калиа в щелочной среде, полученную 8-бром-2,З,-0-изопропилиденаденозин-5-карбоновую кислоту подвергают кислотному гвдролизу, полученную В-бромадеяозин-5-карбоновую кислоту обрабатывают хлористым тионилом в абсолютном этиловом спирте и выделяют целевой продукт.

СООЗ СОВЕТСКИХ

Ю 5

РЕСПУБЛИК

O9l (И) С 07 Н 19/16

НОО

Ф%

° аВ

° ° (21) 3607618/23-04 ,(22) 17.06.83 (46) 07.11.84. Бюл. 1Ô 41 (72) Т.М. Ермоленко, В.А. Тимощук, Б.Б. Кузьмицкий, Л.П. Иалаева и Г.И. Реутская (71) Институт биоорганнческой химии

АН Белорусской ССР (53) 547.857(088.8) (56) 1. Патент США Ф 3855205, кл. 260.211.5, 17. 12.75.

2. Schmidt R.R. Nachat R., Schloz U. Die 5-Carboxyl-gruppe als

Sc1iutzfunktion Ье1 Nucleosidum wandlungen. Synthese vcn 2-Desoxyadenosin.

Chem. Ber. 106, 1256-1261 (1973) .

3. Stein НЛ., Somani P. PrasadRA

Cardiovascular effects of ппс1еозИ

ana1ogs. Апп. NË. Acad. Sci.> 255, 380-386, (1975) °

4. Комаров Ф.И., йосов В.A. u

Бокарев И.Н. фармакологическое воздействие на тромбоцитарное звено гемостаэа при лечении больных ИБС.

"Кардиология", 1978, т. 18, В 3, 12-18.

5. Prasad R.N.,Pung A.,Tiet je K.,: .Stein Н.Н.,Brondyk Н.D. Modif ication

of the 5-Position of Purine Nucleo sides. Synthesis апй Biological

Properties of, Alkyl АйеповЫе-5 -carboxy1ates. д. of Ned. Chem.> 19, 1180-1186р (1976) .

6. И. Jkehara, N. Kaneko.Studies

of Nucleosides and Nucleotides XLI..

Purine сус1опис1еозхйез-8. Tetra-.

hedron, 26, 4251-4259 (1970).

?. И. Ikehara ° М. Kaneko. Studies

of Nucleosides .and Nucleotides.

2-Deoxyadenosine and 3 -Deoxyadenosine (Cordycepin) . Хп. "Synthetic

Procedures in Nucleic Acid Chemistry", by Ed. M. Eorbach, R.S. Tipson, Л.ЪИ11еу-й Sons, И.-7 °, 1.опйоп, Sydney, Toronto, 1968, ч. 1, в.188.

8» ReAе .Longр R Êе Robins

1,.В. Towsend. 8-Bromoguanosine,ibid., v. 1, р. 228. (54) ГИДРОХЛОРИД ЭЖЛОЗОГО 34ИРА

8-БРОИАДЕНОЗИН-5 -КАРБОЙОВЙЙ КИЛОТЫ, ПРОЯВЛЯ10ЦИЙ АНТИАГРЕГАЦИОННЯЕ

АКТИВНОСТЬ, И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕЩ4Я (57) 1. Гидрохлорид этилового эФиРа

8-бромаденозин-5 -карбоновой кислоты

ИНзс1

ИО ОН проявляющий антиагрегапионную активность.

2. Способ получения гидрохлорида

8-бромаденозии-5 -карбоиовой кислоты, отличающийся тем, что аденозин бромируют водным раствором брома в ацетатном буфере, в полученный 8-бромаденозин вводят защитную.

;изонропилиденовуюгруппу» защищенное производное 8-бромаденозина окисллют перманганатом калия в щелочной среде, полученную 8- бром"2,3,-О-изопропилиденаденозин-5-карбоновую кислоту подвергают кислотному гидролизу, полученную 8-бромаденозин

-5-карбоновую кислоту обрабатывают

1 хлористым тионилом в абсолютном зтиловом спирте и выделяют целевой продукт.

1122669

Соединение (П) проявляет кардиотоническую н сосудорасширяющую активность «3 3. Данных о биологической активности соединения (Ш) в литера5 туре не имеется.

Известна ацетилсалициловая кисло"

;та (1У), применяемая в медицинской практике как средство ннгибирующее тромбоцитарное звено гемокоагуляции(4 ) СООТГ ососн HO ОН проявляющему антиагрегационную активность, и способу его получения.

Известны структурные аналоги соединения (I) " этиловый- эфир аденозин-5-карбоновой кислоты (П) «1 ) и иэопропиловый эфир 8-бромаденозин"

-5 -карбоновой кислоты (Ш) «2 ).

@%2 N 2

И М (й

ИООс

М И зо (1П ) i Р1-ООС

ДО ОН

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к гидрохлориду этилового эфира 8"бромаденозин»5-карбоновой кислоты, форI мулы + % С

Известен . способ получения соединений (П) и (Ш) состоящий в следующем: аденозин (У) переводят в его изопропнпеденовое производное (У1), которое затем окисляют перманганатом калия в щелочной среде до соответствующей кислоты (УН), после чего удаляют изопропипиденовую защиту в условиях кислотного гидролиза и получают соединение (УШ), которое этернфицируют абсолютированным этиловым или изонропиловым спиртом в присутствии хлористого тнонила (SOC1 ) и получают

I соответственно эфиры аденозин-5-карбоновой кислоты (П) и (1Х) «5 ).

Однако 8-бромпроизводное (Ш) было получено только для изопропилового эфира аденозин-5-карбоновой кислоты (1Х) посредством бромнрования е го св об одным бромом в смеси диоксана и натрийфосфатного буфера«2).

1122669

NH - Вг

N И РгООС

FAO 0

iPrOOC

НО (и) ЙН

Nx:

НО ОН (T) R++C

ИИ2

1 83.ИООС

М0 ОН

ИО ОН (ХНЕ) НО ОН НО ОН (xt) (ип ) Однако такой путь синтеза непригоден для получения заявляемого гид- 20 рохлорида этилового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты (1).

Целью изобретения является изыскание нового соединения в ряду произt водных аденозин-5-карбоновой кислоты 25 с высокой антиагрегационной активностью, а также способа его получения °

Поставленная цель достигается описываемым гидрохлоридом этилового эфира 8-бромаденоэин-5-карбоновой

I 30 кислоты и способом его получения.

Способ получения соединения (I) заключается в том,— что исходный адеНО 0Н H® 0 нозин (У) бромируют водным раствором брома в ацетатном буфере. Полученный

8-бромаденозин (Х) обрабатывают абсолютированным ацетоном B присутствии п-толуолсульфокислоты. Полученный

8-бром-2, 3-0-изопропилидеиаденозин с (Х1) окисляют перманганатом калия в щелочной среде в 8-бром-2 3<0-иэопроЯ пилиденаденоэин-5-карбоновую кислоту (ХП) .. После снятия иэопропилиденовой защиты в условиях кислотного гидролиза получают .8-бромаденозин-0-карбоновую кислоту (ХШ), которую обрабатывают хлористым тионилом в абсолютном этиловом спирте и выделяют целевой продукт (1) } 122669

Пример 1. Получение гидрохлорида этилового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты.

t Я

10 r аденозина (37, 4 ммоль) растворяют при нагревании и перемешивании в 200 мл 0,5 М ацетатного буфера. РаТаким образом, способом, которым получают структурный аналог (Ш), соединение (Г) получить невозможно, поскольку непосредственное бромирование этилового эфира аденозин-5-карбоновой кислоты (П) приводит к гидролизу эфирной группировки и получаемая при этом смесь продуктов не содержит целевого соединения. Было установлено также, что невозможно пробромировать и аденозин-5-карбоновую кислоту (УИ) известными способами С63-(81.

Невозможность получения этилового

I эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой 15 кислоты бромированием этилового эфира

Г аденозин-5-карбоновой кислоты обьясняется свойствами конечного продукта — его крайней нестабильностью в водной среде. В связи с этим был 20 получен предлагаемвм способом не этиловый эфир 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты, à его гидрохлорид.

Если гидрохлорид этилового эфира

8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты обработать водным раствором, содержащим бикарбонат натрия в количестве, необходимом для нейтрализации

HCf то вместо образования ожидаемого продукта - этилового эфира 30

8-бромаденозин-5-карбоиовой кислоты— происходит его полное разложение, По данныи ТСХ образуется 8-бромаденоэин-5-карбоновая кислота. В присутствии даже следов влаги гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-5"-карбоновой кислоты постепенно разлагается. Все методы введения брома основываются на бромировании в водных средах. Поэтому даже, если и 40 происходит бромирование, то образовавшийся этиловый эфир 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты сразу разлагается .

Таким образом, практически невоэ- 4 можно получить гидрохлорид этилового эфира 8-бромаденозин-5 -карбоиовой кислоты. В связи с этим разработан синтез предпагаемого соединения (i), исходя из 8-бромпроизводных адено50 зина (Х) и(Х1) с получением промежуточных новых соединений (ХП) и (ИП). створу дают остыть до комнатной температуры, после чего при тщательном перемешнвании прибавляют к нему по каплям раствор Э мл брома (58 ммоль) в 300 мл воды. Через 3 ч избыток брома разлагают добавлением сульфита натрия до исчезновения красной окраски и раствор нейтрализуюг 5 н. NaOH до рН 7. Колбу помещают на ночь в холодильник. Выпавшие кристаллы отфильтровывают, промывают водой, спиртом и эфиром, сушат и получают,9,7 r (28 ммоль1 8-бромаденозина. Т.пл.

163 С (разл.), выход 75%..

К суспензни 8-бромаденозина (5,0 г 14,45 ммоль высушен над Р 0 в вакуумном эксикаторе) в 800 мл абсолютированного ацетона прибавляют и-толуолсульфокислоту (27,3 г, 144,5 ммоль) . Реакционную смесь перемешивают 2 ч и выливают затем в

400 мл воды со льдом, содержащей

28 r бикарбоната натрия. Для удаления ацетона раствор упаривают при пониженном давлении на ротационном испарителе. По мере удаления ацетона начинается выделение кристаллического продукта, плохо растворимого в воде. Его отфильтровывают, сушат и получают 4,7 r (12,2 ммоль) 8-бром-2,3 -0-изопропипиденаденозина, Т.пл.

221-222ОС, выход 84%.

К суспензии 8-бром-2,3-0-изопропиI лиденаденозина (2,0 г, 5,15 ммопь в 540 мл воды) добавляют 0,86 r КОН и порциями в течении часа КМп04, (3,32 г, 21 смоль). Реакционную смесь перемешивают трое суток. Непрореаги— ровавший перманганат калия разрушают

30%-ной перекисью водорода, двуокись марганца отфильтровывают, промывают горячей водой, объединенные фильтра- ° ты концентрируют до 200 мл и подкисI ляют 10%-ной соляной кислотой до . рН=4. Выделившиеся кристаллы отфильтровывают, сушат и получают 1,52 r (3,8 ммоль) 8-бром-2,31-0-изопропилиденаденозин-55-карбоновой кислоты, Т.пл. 245-247 С (разл }, выход 73,6%, молекулярный вес 400.

Наидено, %. С 39,09, Н 3,66

В 19,92.

С„, Н„,о,И Вг

Вычислено, %. С 39,00 Н 3,30, В 20,00. у(Н 1 6 12 с; Н S,7Og; Н, 5,60gg;

Н 4,72g) Х,у 6,0 Гц. Х у2,0 ГцуАмакс

0,1 í.NaOH 266 нм (Е 1,72 10 ммоль "см ).

7 I 1226

2,5 г (6,25 ммоль) 8-бром-2,3 -0-изопропилнде наденозни-5-карбоновой кислоты прибавляют в один прием в

250 мл 1 н. HCf. и перемешивают при о

70 С в течение 25 мин. Затем раствор 5 быстро охлаждают.и нейтрализуют до рН 4-5 í.NaOH. Раствор концентрируют до 120 мл,при этом образуется хлопьевидный осадок. Его отфильтровывают, промывают водной, сушат и получают

1,73 г (4,81 ммоль) 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты. Т.пл. 185 С

I о (разл), выход 77Х, молекулярный. вес 378.

Найдено, Х: С 31,60; Н 3,36; 1S

Вг 21,53.

С,о Н „,О Н,Вг 1Н,О

Вычислейо, %: С 31,75; Н 3,17;

Br 21,16.

d(H., 594g; Н 5в04 gg; Н 20

4 53 gg; H+ 4 38 g) Х1т 6 ОГц з = 5,0 Гц: Z у, = 3,5 Гц,Л,Р20

2, 69 нм (Я 1, 80 10 ммоль "см- ) .

К 0,8 г (2,22 ммоль) 8-бромаденозин-5 -карбоновой кислоты добавляют 50 мл абсолютированного этилового спирта и затем при перемешивании. и охлаждении льдом - 0,5 мл хлористого тионила. Смесь перемешивают 1 ч при 0 С и 30 ч нри комнатной темпе- 30 ратуре. Раствор концентрируют в вакууме до 15 мп, охлаждают и прибав" ляют к нему 300 мл холодного эфира.

Образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакуумном эксикаторе, получают 0,85 r (1,81 ммоль) гидрохлорида этилового эфира 8-бромаденозин-1-карбоновой кислоты. Т. пп. .108-110 С, выход 82%, молекулярный вес 460,5. 49

Найдено, Х: С 35,31; Н 4,61

С7,Вг 24, 4 1.

С„ И <>C

Вычислейо, Х: С 35 70; H 4,46;

СХВг 24,54. 45

5,05 Гц 1„, МеО

= 262 нм (Я 2, 03 ° 10 ммоль см™) °

Выход на исходный аденозин 29,3Х.

Структурный аналог (П) в условиях прямой тест-системы в конечной концентрации 10 И проявляет двухфазное действие на агрегацию тромбоцитов, вызываемую АДФ. Соединение (П) оказывает прямое антиагрегациоиное дейст вие, снижая íà 77Х степень агрегации тромбоцитов в течение первой минуты после добавления агреганта. Затеи статистически,достоверный< антиагрегационный эффект отмечается иа 25 гаюПредлагаемый способ является единственным способом получения гидрохлорица этилового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты. Спо-. соб основан на доступном отечественном исходном аденозине.

Соединение (Z) в конечной концентрации 10 И снижает свертываемость крови, изменяя статистически достоверно все показатели тромбоэластограммы, что косвенно подтверждает влияние его на функциональную активность тромбоцитов. Подобного эффекта на установлено для структурного аналога (соединение II). Соединение (Т) обладает высокой антиагрегационной активностью и в условиях: применения прямых тест-систем. Соединение (f) в концентрации 10 М на 50-85Х снижает степень АЛФ вЂ” инду" цированной агрегации тромбоцитов.

Антиагрегационный эффект наблюдается в течение 25 мин регистрации динамической функции тромбоцитов и свидетельствует о прямом продолжительном действии соединения (f).

Весьма существенно, что соединение (Т) не влияет на спонтанную дезагрегацию тромбоцитов . не препятствует распаду тромбоцитарных агрегатов по сравнению с контролем.

В условиях целостного организма соединение (Т) в дозе 10 мг/кг (1Х от максимально переносимой дозы при внутривенном введении) снижает степень агрегации тромбоцитов на 57Х продолжительностью 5-6 мин. По величине эффективной дозы соединение (f) в 5 раз превосходит активность фармакологического стандарта, вызывая при этом более выраженный антиагрегационный эффект. Соединение (Е) обладает выраженной антикоагуляциои" ной активностью, абсолютно нетоксично, практически не влияет на важней» шие физиологические функции организма, хорошо растворимо в воде.

Следовательно, оно имеет существенные преимущества по сравнению с «ис" лотой ацетипсалициловой не только по эффективности, но и цо безопасности.

Соединение (Т) пригодно для разработки быстродействующюс жкарственных форм для внутривенного введения при неотложной антиагрегационной терапии в экстремальных условиях.

69.2 вбккцв 1

Sj892j0 337,5®2,4 3338,312,3 91,Ы,5 48,5+4,6 2э320,4 103у 7+21 8

Вектреаь 37,2И 2

Сеаяике юе (2) 20,5з3,5 16,5з2 8 123,2ф2,6 168,7239 84,2+1 9 36,323,5 1,6ф8,3 60,329,5

6, 65 " 8;05 c9 -OS 4 0,85

3Ьктуфяв

Coegysse» кке (И) 35 628,7 10 622 3 315,6233,4 99в623 в5 89е6 2э2 41 ° 4 ° 8 1 ° 720j3 76в6218е5

37f2233j9 8,621,9 333j823y 7 96,6+0,8 88,0+1,8 43,2+3 О, 1,820,3 78,1 24,9

9 11226 нуте опыта, который вероятно обусловлен продуктом распада соединения (Й).

Структурный: аналог, уступая по глубине и продолжительности действия изучаемому соединению (I), оказывает весьма сильное влияние на важнейшие физиологические функц3ы организма.

Следовательно, соединение (И) абсолютно непригодно в качестве потенциального антикоагулянта, так как спо- 30 собно вызывать целую гамму побочныс эффектов, весьма опасных дпя жизнедеятельности организма в условиях диссемииированного внутрисосудистого свертывания крови. 15

Стандартное фармакологические средство - кислота ацетилсалицйловая в концентрации ИГ+И проявляет менее выраженное антиагрегационное действие, уступая активности изучаемого соеди- 2О нения более, чем в 10 раз. В усповиях целостного сфганнзма кислота ацетилсалициловая в дозе 55 мг/кг (5X от СД .) проявляет сопоставимую по величийе антиагрегационную актив- 25 ность. Следовательно, только индексы широты терапевтического действия àîåдинения (1) (94) и Фармакологического стандарта (1У) (20) могут служить несомненным доказательством цреимущества изучаемого вещества. При этом следует учитывать широкий спектр фармакологической активности кислоты ацетилсалициловой, только оральный способ применения, медпенное развитие антиагрегацнонного эффекта, непригодность препарата в качестве средства в неотложной терацни.

В табл. 1 приведено влияние производных аденозин-5 -карбоновой .кислоты (соединение 1 и Т1, 10 И) на свертывающую систему крови белых крыс инвитро по данныи тромбоэластограммы, в табл. 2 — влияние производ3в3х (соединение I u f1).аденозии-5-карбоновой кислоты (1(Г Ц) и ацетилсалицкповой кислоты (30 "М) на АДФ вЂ” индуцированную агрегацню тромбоцнтов белых крыс в опытах инвитро.В табл.3 дано влияние соединения f (10 мг/кг внутрнбрюшинно) и ацетилсалицнповой кислоты (55 мг/кг внутрибрюшиино) на степень агрегац3ы тромбоцнтов (агрегнрующий агент —. АДФ) в опытах на белых крысах (вещества вводили за

20-30 мин до начала исследования).

В табл. 4 и 5 дано влияние соедаке ния (1) на свертывающую систему кроем белых крыс йри введении в дозе

10 мг/кг внутрибрюшинно за.20 мин до забора крови.

Таким образом, гидрохлорид эткнового эфира 8-бромаденозин-5-карбоновой кислоты обладает ЩНВ3е4ущест» вами в аитиагрегациоином эффекте перед известными структурными соединениями, и предлагаемый способ . позволяет нопучить новое соединение (3,).!!22669!

Таблица 2 ин и дезагрегацн» троибоцнтое е э, leis

Соединение, группа имеют на

Иакснмаль аг лег ацнн ень гэегац

22е 526е 3

Контроль 29, 324,0 43,8ЭЭ, 1 26, 522,4 22,926у 1 45 322, Э

Соедине« нме (l>

14;2 4, 2 15, 5т 7,6 9, 2Э2, 4 3,521,8 19,0т 5,9

19,7э5,9 а 0,01

«З4 ° 7

-65,3

-51, 5

-64,6

15) 4 7,2 17, 7+5, 1 1,3+4,2

16,5+5,2 с0 02

-64, Э

28, 1ф2,2

52, 6+2 ° 5 43, 1+Э, Э 25,8+2,2

Кислота ацетилсалицилоВал

25,224,0 37,8+3,6 24, 1э3,3 10,723,0 38,623, 1 27,9g4,2

-42,9 -28) В -44, 1 -58)3 "28,4 с 0901

Х эффеята

Табл кца 3

Со гр

42,822s 3 27, Kfs 6

29,525,2 35,824,8 23,726,9 14,3 6,1

10, 12! ° 3 3,820 9

Соединение (j>

21,31 4,5

25,1+4,7

-41,3

18, 7+6,6

15,444,2

"57,0

Х э44ията

Контроль сО,О1

20,325,5 29,%еЭ,Ь 28,324,3 23,122,9

40,482,8 17,Q4,5

8,813,9

«68,9

Кислота ацецмлс алицмловал

6,623,2

20,6ф7,2

-49,0

13,225 9

13, 125,0

«55,6

cO OS

2- э44ията

Таблица 4

Соедииеиме груила иивотныя

13,9Э1,1 6,9 0,5 91 ° 5,7 77 ° 8Э5,6 70,9т5,6 S6,712,8 2 ° 8Э0,2 135,3214,2

Контроль

Соединение (2>

28,022,8 14,0т3,2 104,625,4 78,4Е7,4 64 ° 4ф10,1 46 ° 787,0 1sЭt0s3 1021822 ° f

+101,4 -53 6

Р C 0,001

Cll 0,0!

Й эф8еята

Соединениее (П>

Х э@фанта

Контроль

6,424, 1

-77,4

44, 126, 1

27,Щ5,7

-42 ° 1

53, 822,7

f122609 таблйце 5 гле4 щваовмй брыяолнз»»»ин иыовое с

55» 824»2

4В,3,О

22,5ео»6

22»520»6

Составитель Ю. Белоусов

Редактор Г. Волкова Техрвд Т,Дубинчак. Корректор 1 о»Р

° Ю

Заказ 8094/22 Тираж 380 Подлисное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР ло делам изобретений и открытий

1f3035, Иосква, Ж-35, Рауаская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 э

Кары «5,3У,Е

СефдиввщУв (2) 11«»622»б и з«секте ИЗ 2

Р СО»О5 (28» 7+О, 2 з,зап,«

+3О,О со,оп>

Z,2+O,4

I0 3фп»5

+43»f со,оп1