Амино-3-(5-дезокси-5-аденозил)тиопропилфосфонистая кислота для ингибирования процесса биометилирования

Авторы патента:

C07F9/48 - фосфонистые кислоты (R-P(OH)₂); тиофосфонистые кислоты

A61K49 - Препараты для исследований на живом организме

A61K31/7028 - соединения, содержащие сахаридные радикалы, присоединенные к несахаридным соединениям гликозидными связями

Амино-3-

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ

Н,АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

H0 OH

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3478760/23-04 (22) 01. 06.82 (46) 30.09.85. Бюл. Ф 36 (72) P.M.Хомутов, Л.Л.Завалова и В.И.Сырку (71) Институт молекулярной биологии

АН СССР (53) 547.341(088.8) (56) Coward I.K., Grooks P.À. Trans-

- methylation, Usdin, Borchardt, 1979, с. 215-223.

Робер-Жеро М.Ледерерэ. Итоги и перспективы развития биоорганической химии и молекулярной биологии.

"Наука", М., 1978, с. 111-127. (54) АМИНО-3-(5 -ДЕЗОКСИ-5 -АДЕНОЗИЛ)

ТИОПРОПИЛФОСФОНИСТАЯ КИСЛОТА ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОЦЕССА БИОМЕТИЛИРОВАНИЯ, „„SU„„1120671 (sl)4 С 07 F 9/48, С 07 Н 19/16. (») Амино-3-(5 -дезокси-5 -аденозил) тиопропилфосфонистая кислота формулы

Н 11 р СН СН2 СН2 8

Н0 Н2 для ингибирования процесса биометилирования. С:

1120671

Изобретение относится к химии фосфорорганических соединений, а именно к новоч амино-3-(5 -дезоксиt

5 -аденозил)-тиопропилфосфонистой кислоте формулы 1 5

i) „

HO OH которая может быть исполь ована для 20 ингибирования процесса биометилирования.

Известно использование в качестве ингибитора метилаз 5 -аденозилгомоцистеина (5АН), который возникает как естественный продукт ферментативной реакции.

Однако высокая активность Ферментов клетки, быстро трансформирующих

4АН, препятствует использованию посвЂ 30 леднего in vivo.

Известно также использование в качестве ингибитора метилаз 5 -дезоксиJ

5 -SвЂ” - изобутилтиоаденозина и туберцидинилгомоцистеина.

Указанные ингибиторы обладают слабым эффектом, либо действуют недостаточно избирательно, что особенно нежелательно.

Цель изобретения вЂ” повьпрение эф- 40 фективности ингибиторов метилтрансфераз.

Поставленная цель достигается .описываемым соединением формулы 1, которое по эффективности действия 45 г(ревышает известные ингибиторы биометилирования.

Соединение формулы 1 получают взамиодействием оксима я -ацетилтиопропилового альдегида с фосфор в 50 новатистой кислотой при кипении с последующим алкилированием полученного продукта 5 -хлор вЂ (-дезоксиаденозином в присутствии металлического натрия в жидком аммиаке., 55

Пример 1. 1-Амино-3-(5 вЂ дезокси-5 -аденозил)тиопропилфосфонистая кислота (1).

К 10 мл кипящего метанольного раствсра 3,96 г (60 ммоль) НзР02 медленно прибавляют 4,4 r (30 ммаль) оксима (":,-ацетилтиопропионового альдегида в 15 мл метанола. Смесь кипятят 2 ч, упаривают в вакууме и растворяют в воде, р--меркапто-с ами:нопропилфосфонистую кислоту выдевЂ” ляк(т хроматографией на Дауэксе 50W

"8 (100 вЂ 2 меш, Н+-форма, 120 мл) .

Выход 1,67 r (367), т.пл. 198 С, Rg =0,41 (ТСХ, Силуфол UV25 система А), R g 0,31 (система Б) .0.47 r (3 ммоль) 1 -меркапто-с -аминопропилфосфонистой кислоты растворяют в

30 мл жидкого аммиака и прибавляют небольшими порциями при перемешивании сначала натрий до сохранения голубой окраски в течение 20 мин, (( а затем 0,85 г (3 ммоль) 5 -хлор-5 дезоксиаденозина. Спустя 7 ч аммиак упаригают, остаток подсушивают в вакууме, растворяют в 15 мл воды, подкисляют до рН 6-7 соляной кислотой, концентрируют в вакууме и выделяют хроматографией на Дауксе

50W 8 (100-200 меш, Н*-форма, 180 мл) с промывкой водой и элюцией соединения 1 0,63 г (52K), т.пл.

169 С, Rf=0,59 (ТСХ, система A), Н =:0,14 (ТСХ, система Б) 05дцО 83 (система С) (система А вЂ” изопропанол:аммиак:вода 7:1:2, система Б н-бутанол:ледяная уксусная кислота: вода 12:3:5, система С вЂ” муравьиная кислота: ледяная уксусная кислота:вода 2:8:90, рН=1,9). IIMP в

D О (б, м.д.) 2,1 м (2Н, СН2), 2,9 м (2Н, СН2), 3,2 м(1Н, СН), 6,94 м (1H, Н вЂ” P, J H p 526 Гц), 7,94 с (1Н, Н-Ado); 8,02 с (1Н, H-Ado), (с(7ектрометр XL-100-15, Var ian CIIIA), 3 ÄÄ 260 нм (Specord

UV VIS ГДР), A25((A2(,((=0,80, и рКЗ 7,57 (автом.титратор "Radiometer" Дания). Соединение формулы

1 вЂ” белое, хорошо растворимое в воде и спирте вещество, устойчивое при хранении.

Пример 2; Испытание 1-амивЂ” но-3-(5 -дезокси-5 -аденозил)тио(/ пропилфосфонистой кислоты (SAH-P )

3 в реакции метилирования тРНК.

Частично очищенную тРНК-метилтрансферазу получают из печени крысы. Определение активности фермента проводят, используя 14(0-C((1-БАИ

1120671

Таблица 2

1/Ч (1/ имп/мин )

104

Скорость реакции (v), имп/минч

<10

Концентрация

SAH-Pg

М .1Ф

Концентрация

SAM, M 10

3,5

4,6

5,8

1,0

6,85

7,5

8,3

1,85

2,00

0 50 500

2,00 к „ (и) Аналог

0,75 4,45

1,00 4,00

1,50 3,70

2,00 3,28

ЗО 2,0

2,25

2,50

«Я+

1, 2.10

2,7

3,05

5-Аденозилгомоцистеин, S АН

1,7 10 2,5 10

0 6,76.

0 25 6,76

1,5

0,50 6,25

3,6.10

1,6

Туберцидинилгомоцистеин

0,75 5,55

1,00 5,55

1,50 4,76

1,75 5,00

2,00 4,76

2,25 4,17

2,5

2,1

2,0

2,4

2,50 4,35 (52.,m Ci /mM, "Amercham") в качестве меченого субстрата и суммарную тРНК из Е.Со1 как акцептор метильных групп. Для определения активности фермента в 0,1 мл смеси, содержащей (в мкмоль) 2 трис. НС<, рН 8,2, 0,4 дитиотреитола, 1,5 гексаметилендиамина, 40 мкг тРНК и 10" 14(gp>g,SAM, вносят фермент (6 мг белка) и инкубируют пробу в течение 30 мин при 37 С, 10 затем реакцию останавливают добавлением 2 мл охлажденного 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и выдерживают пробу в течение 15 мин в ледяной бане. Образующуюся суспензию фильтруют через миллипоровые фильтры (СЫНПОР-З, Хемапол"), которые затем высушивают и определяют их радиоактивность в толуольном сцинтилляторе на радиометре Intertechnique SL-30. 2О

Испытания известных соединений проводят аналогично.

В таблице представлено действие наиболее эффективных ингибиторов ферментативного метилирования вЂ” дан- 2 ные по испытаниям.

Таблица 1

1-Амино-3-(5 -дезок-! си-5 -аденозил)-тиопропилфосфонистая кислота, SAH-P>

5 -Дезокси-5 вЂ .5-изо(I бутилтио-аденозин, SIBA

ФРезультаты исследований авторов заявки. 50

К-=константа ингибирования, т.е. ф константа диссоциации комплекса фермент-ингибитор (величина, обратная сродству фермента к ингибитору).. 55

Зависимость скорости метилирования тРНК от концентрации ингибитора представлена в табл. 2.

0 2,85

0,25 2,75

0 75 1,73

1,50 1,53

1,75 1,33

2,00 1,20

0 5,40

0,25 5,00

) ) 2067!

Составитель В.Мякушев

Редактор Л.Письман Техред С.Мигунова

Корректор M.Äåì÷èê

Заказ 6645/4 Тираж 353

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная„ 4

Из представленного видно, что функциональные свойства данного соединения сводятся к эффективному конкурентному ингибированию тРНК-метилазы и являются более выраженными по сравнению с аналогичными свойствами известных ингибиторов фермента.