Флуоресцентный краситель для микроорганизмов и растительных тканей

 

Применение перхлоратов пирими/ до | ,2-а J бенэимидазолия в .качестве флуоресцентного красителя для микроорганизгюв и растительных тканей .

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

C0Uh

РЕСПУБЛИК аи ав

ggy G О1 1l 1/28 А 61 В 10/00

Г6СУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3462763/28-13 (22) 05.07.82 (46) 15.11.84. Бюл.И 42 (72) Н.А.Дмитриева, С.Г.Благородов, Л.Н.Чернавская, Э.А.Звездина и И.П.Жданова (7!) Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им.М.А;Суслова и Ростовский-на-Дону научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены (53) 61 -091.8 (088.8) (56) I. Михайлов И.Ф.,Дьяков С.И.

Лиминесцентная микроскопия. M. 1961, с. 77-)01.

2. Авторское свидетельство СССР

У 490801, кл. С 07 51/36, опублик. 1975. (54) ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЙ КРАСИТЕЛЬ ДЛЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ И РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЕЙ. (57) Применение перхлоратов пиримнi до 1,2-à j бензимидазолия в .качестве Флуоресцентного красителя для микроорганизмов и растительных тканей.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ " - .:::< н свтссснсм свидствъствт «..!." т:

1 l 124 I

Изобретение относится к микробиологическим исследованиям, а именно к использованию флуоресцентных красителей при исследовании микроорганизмов и растительных тканей.

Известны флуоресцентные красители для микроорганизмов и растительных тканей, обладающие сине-зеленой флуоресценцией. Одним из лучших красителей является 2-(4-аминофенил)-5-(2-бенэтиаэолил) бенэтиазол(примулин) (1 ).

Недостатком такого красителя являются его высокая рабочая концентрация (0,01-0,02 X) и узкий рабочий диапазон рН ((7, так как при рН )7 появляются два вида флуоресценции за счет различной дисперсности частиц).

Известно вещество перхлорат пиримидо 11,2 — а) бензимидазолия, которое описано в литературе в качестве химического реактива Г2 ).

Целью изобретения является снижение рабочей концентрации раствора флуорохрома и расширение рабочего диапазона рН.

-Цель достигается применением перхлоратов пиримидо $1,2-а)бензимидазолия в качестве флуоресцентного красителя для микроорганизмов и растительных тканей.

Пример 1. Пиримидо () 2 -а) бензимидазолий имеет структурную формулу

R З5 I0 (й)

Ц

R — Cg н д а- c í

I а -с,н а -е н

11ля растительных тканей используются соединения (Е) и (ЕЕ) . Готовят 45 препарат эпидермиса лука на покровном стекле в капле воды, далее наносят 0,5 - 1,О мл 0,0025%-ного спиртового раствора соединения (I)

Через 5-10 мин раствор сливают, пре- gp парат промывают дистиллированной водой или 25%-ным этиловым спиртом.

Иикроскопируют в ультрафиолетовом, спектре. Ядро и оболочка дают яркую сине-зеленую флуоресценцию. у

97 2

Пример 2, Готовят препарат эпидермиса алое. Окрашивают при помощи соединения (II) в течение

5-10 мин. Промывают дистилированной водой и микроскопируют в ультрафиолетовом свете. Клеточные оболочки ядер и устьиц дают яркую сине-зеленую флуоресценцию (см.табл.l).

Интенсивность флуоресценции при окрашивании растительных тканей соединениями (I) и (II) перхлоратов пиримидо (I,2-а) бензимидаэолия приведена в табл.1.

Как видно из табл.1, растительные ткани бкрашиваются в диапазоне концентраций красителя 0,0012 — 0,005%.

При более высоких концентрациях красителя происходит выпадение его кристаллов.

Пример 3. Для окрашивания микроорганизмов готовят мазки из культуры, сушат над пламенем горелки. Затем мазок заливают 0 5-1 мл

0,0025%-ного спиртового раствора соединения (Е). Через 10 мин раствор красителя сливают, промывают дисти- лированной водой и микроскапируют в ультрафиолетовом свете. Иикробные клетки дают ярко-сине-зеленую флуоресценцию (см.табл. 2).

Интенсивность флуоресценции

Penici1lium sp при окрашивании соединениями (Е) и (II) перхлоратов пиримидо (1,2-àf бензимидазолия приведена.в табл. 2.

Окрашивание микроорганизмов и растительных клеток производится при различных рН красящих растворов, что не влияет на качество флуоресценции (рН от 3 до 9).

Таким образом, применение в качестве флуорохромоя перхлоратов пиримидо )I,2-а 3 бензимидаэолия дает воэможность окрашивания микроорганизмов и растительных клеток в более низких (в 4-6 раз по сравнению с прототипом) концентрациях, а также проводить окраску в более широком диапазоне рН красящего раствора, что значительно расширяет область применения красителя. Кроме того, препараты, окрашенные данным красителем, при хранении не утрачивают интенсивность свечения.

1124197

Таблица!

Соединение

Структура

Ядро

0,0

Оболочка

0

Цитоплазма

0

Устьица

Таблица 2,Структура Соединение. Мнцелий

Спорангии

Составитель Л. Стебаева

Техред Л.Коцюбняк

Редактор M.Áàíäóðà

Корректор Г.Решетник

Заказ 8271/33 Тирах 822.

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рауяская наб., д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4