Способ получения митолектина (фитогемагглютинина) из семян фасоли

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИТОЛЕКТИНА (ФИТОГЕМАГГЛНЛИНИНА) ИЗ СЕМЯН BS -J2rj 3i : ФАССЛИ путем экстракции муки фасоли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом и очисткой, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени получения и повьппения активности целевого продукта, экстракцию проводят в присутствии 2 ммоль метабисульфи а натрия в течение 1 ч, высаливание . проводят сульфатом аммония с насьпцением при первом высаливании 40Z, а последуклцую очистку проводят фильтрацией че.рез сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натрия при рН 7,0.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (д) А 61 К 35/78

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Б, ь6ЫЛ е евою э .

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

l10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3543449/23-05 (22) 18.01.83 (46) 30.12.84. Бюл. У 48 (72) В.M.Ëàõòèí, А.В.:Будникова, .А.И. Романченко и А.И. Шульмина (71) Всесоюзный ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт животноводства и

Ордена Ленина институт биохимии им. А.Н.Баха (53) 616.32(088 ° 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР . й" 291710,.кл. А 61 К 35/78, l969 (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИТОЛЕКТИНА (ФИТОГЕМАГГЛИПИНИНА) ИЗ СЕМЯН

„„SU„„1131506 A

ФАСОЛИ путем экстракции муки фасоли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом и очисткой, отличающийсятем, что, с целью сокращения времени получения и повьпнения активности целевого продукта, экстракцию проводят в присутствии 2 ммоль метабисульфита натрия в течение 1 ч, высаливание .проводят сульфатом аммония с насьпцением при первом высаливании 40Х а последующую очистку проводят фильтрацией через сефадекс Г-100 в 10Х-ном растворе хлористого натрия при рН 7,0 .

В фугированию на центрифуге К-.70 (ГДР) при 4000 об/мин 10 мнн. К надосадочной жидкости добавляли растертый (для удаления крупных комков) кристаллический сульфат аммония марки

ХЧ или ОСЧ в количестве 304 г в 1 л смеси при перемешивании. Через 1 ч смесь центрифугировали 2 ч при

4000. об/мин, осадок отбрасывали, а из надосадочной жидкости второй раз высаливали белок путем добавления измельченного сульфата аммония таким образом, чтобы конечная концентрация соли (с учетом первого добавления соли) составила 380 г в 1 л смеси (с учетом второго добавления соли).

Через 1 ч перемешивания смесь центрифугировали 2 ч при 4000 об/мин (как и после первого высаливания белка), надосадочную жидкость отбрасывали, а. осадок подвергали диализу против дистиллированной воды (1:20 по объему, 3 смены воды) 48 ч. Смесь центрифугировали при 4000 об/мин 20 мин. осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость доводили до рН 5,4. Выпавший осадок удаляли центрифугированием 20 мин при 4000 об/мин, а к надосадочной жидкости добавляли бидистиллированную воду (1:10 по объему). Смесь сразу центрифугировали 1 ч при 4000 об/мин, полученный ° осадок растворяли в 10Х-ном растворе поваренной соли с рН 7 (в объеме,, равном 1/20 объема колонки с сефадексом Г-100) и проводили гельфильтрацию через колонку с сефадексом Г-100 размером 3 см в диаметре и высотой

20 см. Первый выходящий с колонки митолектиновый пик собирали и лиофильно сушили. Выход митолектина (фитогемагглютинина) составил 1,45 г из 1 кг муки семян фасоли.

Предлагаемый способ иллюстрируется табл. 1 и 2.

Таким образом, предложенный способ позволяет повысить митогенетичес.кую активность целевого продукта и-сократить время его получения.

1 1131506 2

Изобретение относится к биологии, в частности к получению биологически активного гликопротеида из семян фасоли, и может найти применение при проведении цито- и иммуно5. генетического анализа, в мембранологии, иммунологии.

Известен способ получения митолектина путем экстракции муки фасоли разбавленной соляной кислотой, двухступенчатого высаливания сульфатом аммония с последующим диализом и очисткой ацетоном (1) .

Однако известный способ не обеспечивает достаточной активности целевого продукта и является длительным и трудоемким.

Цель изобретения — повышение активности целевого продукта и сокращение времени его получения. 20

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения митолектина (фитогемаглютинина) из . семян фасоли путем экстракции муки фасоли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом и очисткой экстракцию проводят .в присутствии 2 ммоль метабисульфита нат- рия в течение 1 ч, высаливание проводят сульфатом аммония с насыщением при первом высаливании 40Х, а по следующую очистку проводят фильтрацией через сефадекс Г-100 в 10 -ном . растворе хлористого натрия при рН 7,0

Пример Семена фасоли Крас35 ноградская-15" урожая 1982 r, измельчали и просеивали через сито так, что средний размер частиц муки был 250300 мкм. К 0,5 кг муки добавляли

2 5 л холодной дистиллированной воЭ о дМ (все операции проводили при > 4 С) при перемешивании и рН смеси доводили концентрированной соляной кислотой до

1 (рН контролировали по покраснению

145 бумажки универсального р Н-индикатора)

Экстракцию проводили в присутствии

2 ммоль антиоксиданта (метабисульфита натрия) 1 ч при постоянном пере-, мешивании. Смесь подвергали центри113 1506

Таблица 1

Способ

Митогенетическая

70,1

Прототип

80,2

Предлаг аемый

Таблица 2

Время, ч

Способ

24

Прототип

Предлагаемый

Составитель Е. Колчина

Редактор М.Дылын Техред С.Мигунова Корректор В.Гирняк

Заказ 9652/1 . Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП"Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Соответствующее насыщение экстракта сульфатом аммония, 7. активность целевого продукта, 7. РБТЛ