Способ получения гистона из растительного сырья

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИСТОНА ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ путем гомогенизации , фильтрации, центрифугирования , отличающийся тем, что, с целью повышениявыхода деле- . вого продукта, гомогенизацию проводят в среде,содержащей 0,07-0,08 моль хлористого натрия, 0,02-0,03 моль ЭДГА, 0,005-0,01 моль пиросернистокислого натрия при рН 7,4-7,6, а после центрифугирования из осадка отбирают в ерхний слой и промывают его в растворе, содержащем 0,13-0,15 моль хлористого натрия, 0,005-0,01 моль пиросернистокислого натрия при той же величине рН с последующей экстракцией целевого продукта,. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ . СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

09) (11) 4(51) (21) 3521543/28-13 (22) 14.12.82 (46) 15.02.85. Бюл. 11 6 (72) А.В.Мироненко, Л.В.Иванцов и С.Г.Романовская (71) Институт. экспериментальной ботаники им. В.Ф.Купревича (53) 615.32(088.8) (56) 1. Nadean P., Pallotta D

Lafontaine J.-G. Electrophoretic

Study of Plant Histones Comparison

with Vertebrate Histones.-Archives .of Biochemistry snd Biophysics, 1974, vol. 161, N 1, 171-177. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИСТОНА

ИЗ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ путем гомогенизации, фильтрации, центрифугирова" ния, отличающийся тем, что, с целью повышения- выхода целевого продукта, гомогенизацию проводят в среде, содержащей 0,07-0,08 моль хлористого натрия, 0,02-0,03 моль

ЭДТА, 0,005-0,01 моль пиросернистокислого натрия при рН 7,4-7,6, а после центрифугирования из осадка от-. бирают верхний слой и промывают его в растворе, содержащем 0,13-0,15 моль хлористого натрия, 0,005-0,01 моль пиросернистокислого натрия при той же величине рН с последующей экстрак- Е

O цией целевого продукта.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕ

Н АВТОРСНОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Составитель Е.Колчина

Редактор Н.Швыдкая Техред Т.Фанта Корректор И.Эрдейи

Заказ 163/4 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035", Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r Ужгород, ул. Проектная, 4

1 ll39

Изобретение относится к биохимии, а именно к способу получения суммарного гистона иэ растительного сырья.

Известен способ получения гистона иэ растений; включающий следующие

;операции: исходную ткань (луковицы

5 или проростки растений) гомогенизируют в среде, состоящей из, молы сахароза 0,25; хлористый кальций

0,003; 0,1Х тритон Х-100; трис-HCf

0,05; рН 6,0; гомогенат фильтруют через 8 слоев марли; фильтрат центрифугируют при 1000 (10 мин. Осадок суспендируют в 100 мл раствора, состоящего из 0,08 моль хлористого нат- рия, 0,02 моль ЭДТА — NaOH, рН 6,3, перемешивают полчаса и центрифугируют при 1500 $ 10 мин. Осадок суспенди-. руют, центрифугируют с последующей очисткой целевого продукта (I) .

Однако известный способ не обеспечивает достаточного выхода целевого продукта.

Целью изобретения является повышение выхода гистона.

Поставленная цель .достигается тем, что согласно способу получения гистоиа из растительного сырья путем гомогениэации, фильтрации, центрифугирования, гомогенизацию проводят в среде, содержащей 0,07-0,08 моль хлорисЗО того натрия 0,02-0,3 моль ЭДТА, 0,005-0, 01 йоль пиросернистокислого натрия при рН 7,4-7,6, а после центрифугирования из осадка отбирают верхний слой и промывают его в растворе, содержащем 0,13-0,15 моль хлористого натрия, 0,005-0,01 моль ниро-сернистого натрия при той же величине рН с последующей экстракцией целевого продукта.

Пример. Исходные семена ржи (сорт Харьковская 60) увлажняют в течение суток между слоями фильтровальной бумаги, смоченной дистиллированной водой. Затем 10 г увлажненных

45 таким образом семян гомогенизируют в

437 2 яшмовой ступке в 500 мл раствора:

0,075 моль NaC1: 0,025 моль ЭДТА;

0,0075 моль Na S О, рН 7,5 (доведен" ный с помощью NaOH).Гомогенат фильтруют через 4 слоя капроновой ткани, полученный фильтрат центрифугнруют при 2500 10 мин. Верхнич светлосерый слизистый слой полученного после центрифугирования осадка хроматин осторожно отбирают шпателем и суспендируют в 100 мл раствора: 0,075 моль

NaC1; 0,025 моль ЭДТА, 0,0075 моль

Na

10 мин. Полученный осадок хроматина суспендируют в 100 мл раствора:

0,14 моль NaC1; 0,0075 моль Na S 0, рН 7,5 (доведенный с помощью NaOH) и центрифугируют при 2500 g 10 мин.

Полученный осадок промывают таким же образом еще один раз. Из полученного осадка хроматина гистоны экстрагируют два раза 1,5 мл 0,4 н Н S0 по 30 мин с помощью стеклянного гомогеннзатора с притертыми стенками и последующего центрифугирования каждый раз при 18000g 10 мин. Супернатанты объединяют и диализуют против дистил -лированной воды в течение не более

24 ч. Полученный раствор гистонов замораживают в жидком азоте и лиофильно высушивают. Все операции при вы делении проводят при 4 С, растворы готовят на бидистиллированной воде.

Выход препарата гистонов составляет 1,15+0,14 мг.

Выход препарата гистонов из семян

«ржи на 10 г исходных увлажненных семян при известном и предлагаемом способах выделения составляет

0,5?+0,05 и 1,15+0,14 мг соответственно.

Как видно из представленных данных, предложенный способ позволяет значительно повысить выход суммарно" го гистона нз растительного сырья,