Способ диагностики анаэробной стоматогенной инфекции

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНОЙ СТОМАТОГЕННОЙ ИНФЕКЦИИ путем выявления антител в сыворотке крови больных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, антитела в сыворотке больных выявляют с помощью реакции агглютинации с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными Bacteriae Peptostreptococcus, и при титре выше 1:60 диагностируют анаэробную стоматогенную инфекцию.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

4 А 61 К 39/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Р

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОткРытий

1 (21) 3453258/28-13 (22) 11,06.82 (46) 07.04.85. Бюл. № 13 (72) А. И. Марченко, Т. Ф. Лихота, Н. И. Фаль, М. М. Колесников и Н. Н. Марченко (71) Киевский медицинский институт им. акад. А. А. Богомольца (53) 615.373 (088.8) (56) 1. Рабинович А. С. Хроническая очаговая инфекция полости рта. М., Медгиз, 1960, с. 166.

Ä,ß()„„ 1148621 д (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АНАЭРОБНОЙ СТОМАТОГЕННОЙ ИНФЕКЦИИ путем выявления антител в сыворотке крови больных, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, антитела в сыворотке больных выявляют с помощью реакции агглютинации с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными Bacteriae Peptostreptococcus, и при титре выше 1:60 диагностируют анаэробную стоматогенную инфекцию.

1148621

Изобретение относится к медицине, в частности, к стоматологии и клинической иммунологии.

Известен способ диагностики анаэробной стоматогенной инфекции путем выявления антител в сыворотке крови больных (1).

Однако известный способ недостаточно точен.

Цель изобретения — повышение точности диагностики.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу диагностики анаэробной стоматогенной инфекции путем выявления антител в сыворотке крови больных, антитела в сыворотке больных выявляют с помощью реакции агглютинации с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными

Bacteri ae Peptostreytococcus и при титре выше 1:60 диагностируют анаэробную стоматогенную инфекцию.

Способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики анаэробной стоматогенной инфекцич у больных, обратившихся по поводу лечения периодонтита, периоетита, пародонтоза, берут 0,5 — 5 мл крови, готовят сыворотку, которую инактивируют при

56 С в течение 30 мин и разводят в лунках полистироловых пластин в нескольких рядах физиологическим раствором (рН 7,2)

1:10 — 1:640 в объеме 0,1 — 0,5 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют 0,05О,! мл 1 — 3 -ного эритроцитарного диагностикума, который готовят заранее и хранят в виде 20 -ной взвеси до 1,5 r. при 4-5 С.

Сенсибилизацию формализированных эритроцитов осуществляют экстрактом, полученным из анаэробных микроорганизмов (на пример, Bacteriae Peptostreptococcus) по методу Лансфильд путем экстракции соляной кислотой в течение 15 мин при 90-95 С. Фиксацию молекул экстракта на поверхности эритроцитов осуществляют с помощью бифункциональных химически автивных соединений (например, глютаральдегида).

Для оценки специфичности и чувствительности способа используют следующие контроли.

Контроли сывороток: а) сыворотки кроликов, иммунизированных указанными выше антигенами анаэробных микроорганизмов (те же экстракты, которые применялись для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов); б) сыворотки крови здоровых людей без признаков стоматогенной инфекции (доноры).

Контроли антигенов: а) с указанными выше сыворотками ставят реакцию пассивной гемаглютинации с несенсибилизированными формалинизированными эритроцитами; б) с этими же сыворотками ставят РИГА с формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированные гетерологическими сывороткой здоровых людей (доноров и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными антигенами анаэробных микроорганизмов, титры составили в среднем 1:10 — 1;20. С сывороткой крови больных периоститом, периодонтитом, пародонтозом и использовании несенсибилизированных фармалинизированных эритроцитов положительную . РПГА (феномен «зон35 тика») наблюдали в разведении сыворотки в среднем 1:5--1:30 в случаях использования формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами аэробных стрептококков положительные реакции выявлялись в титрах до 1:60.

40 Сравнительный анализ результатов постановки РПГА в опытных и контрольных группах позволил считать диагностическим титром агглютинацию эритроцитов, сенсибилизированных антигенами патогенных ана45 эробов, в разведении сывороток более 1:60.

Пример 1. Больная В обратилась по поводу лечения хронического периодонтита12 зуба и дистрофически-воспалительной формы. пародонтоза I I степени в стадии обостроения

Взято 2 мл крови, готовят сыворотку, которую анактивируют при 56 С в течение 30 мин. В трех рядах лунок полистироловых пластинок сыворотку крови разводят физиологическим раствором при рН 7,2 в объеме 0,2 мл 1:10 — 1:640. К каждому разведе55 нию добавляют 0,1 мл 3>;-ных формалинизированных эритроцитов, обработанных глютаральдегидом, сенсибилизированных .солянокислым экстрактом анаэробных микро5

25 антигенами (например, анаэробным стрептококком).

Пластинки осторожно встряхивают и оставляют при комнатной температуре на 3-4 ч. после чего производят учет результатов.

Реакцию оценивают по четырех крестовой системе (++++, + + +, ++, +, -). За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворотки, дающей четкую агглютинацию на +++.

Для подтверждения иммунологических тестов у больных проводят микробиологические исследования, направленные на диагностику анаэробной стоматогенной инфекции путем выделения чистых культур.

Указанными способами обследовано 69 больных периоститами, периодонтитами, пародонтозом. У 76,2 -обследованных обнаружены как антитела к анаэробам, так и чистые культуры этих микроорганизмов . Причем, высокие -титры антител (1:60 — 1:320) наиболее часто выявлены к антигену анаэ-. робного стрептококка.

При постановке РП ГА с иммунной кроличьей сывороткой и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированнымн антигенами анаэробных микроорганизмов, титры составили в среднем 1:640 — 1:2400; с

1148621

ВНИИПИ Заказ 1774/3

Филиал ППП «Патент», r. организмов. К разведения:с *сыворотки первого ряда добавляют формалинизированные эритроциты, сенсибилизирова нные антигеном анаэробного стрептококка, к разведе-. ниям сыворотки второго ряда сенсибилизированные -Bact. Fraqtlis, третьего — Bact.

Melan inoqenicus. В первом ряду положительная РПГА наблюдалась в титрах 1:

320, во втором — 1:40, в третьем 1:20.

При микробиологическом исследовании содержимого корневого канала 12 зуба больной В, идентифицирован анаэпобный стрептококк типа Bact. Peptostreptoc и аэробный стрептококк типа В. Streptoc из патологического зубо-десневого кармана выделен бактероид типа Bact..Fraqilis и анаэробный стрептококк типа Bact Peptostrept.

11. пользование рациональной терапии, в частности; антимикробных препаратов, к которым специфич; . ки чувствительна анаэробная флора, выделеннач у данной больной, привела к быстрой ликвидации воспали- тельных явлений, прекратилось гноетечение из зубо-десневого кармана. !

L2 зуб вылечен в три посещения.

Пример 2. Больной P. обратился по поводу лечения обострившегося хронического пер иодонтита 6l зуба.

Для исследования берут 2 мл крови, полу чают сыворотку. Через 3-4 ч по описанному выше способу положительная РПГА с сывороткой крови и формалинизированными эритроцитами, сенсибилизированными антигенами анаэробных микроорганизмов, отмечена к антигену анаэробного стрептококка в титре 1:20, антигену Bact. Fragiles 1:10, антигену Bact Melaninog 1:20, что отрицает наличие анаэробной стоматогенной инфекции. У данного больного при микробиологическом исследовании анаэробных микроорганизмов не выявлено.

На практике рекомендуется проводить

РПГА с сывороткой больных в разведении с 1:20 до 1:6400 с использованием формалинизированных эритроцитов, сенсибилизированных антигенами анаэробного стрептококка (типа Bact Pep tostreptococcus) Результаты постановки РИГА с формалинизированными эритроцитами, несенсибилизированными и сенсибилизированными антигенами аэробного стрептококка, антигенами бактероидов типа Bact Fragilis u Bact Melaninosenicus; а также приведенные в примерах микробиологические исследования служат лишь для подтвреждения специфичности и чувствительности основной реакции.

Анализ амбулаторных историй болезни

42 больных с клиническим и микробиологическим диагнозом хронический обостривший25 зо

55 ся Heðèoäoíòèò с явлениями периостита, выз ванный анаэробным стрептококком (типа

Peptostrept) показал, что бактериологические исследования с целью уточнения диагноза продолжались 7 сут, а этиотропное лечение больных было начато на 8-е сут от обращения за медицинской помощью. К этому времени у 11 больных (25,) под влиянием общепринятых методой лечения наступило выздоровление. У 31 больного (75ф явления воспаления нарастали и были ликвидированы только после назначения целенаправленного этиотропного лечения (на

12 — 13-е сут от обращения больных за медицинской помощью) .

При использовании предла гаемого способа диагностики стоматогенной анаэробной инфекции сроки диагностики и лечения больных резко сокращены. Анализ 28 амбулаторных историй болезни на случай стоматогенной анаэробной инфекции, подтвержденные предлагаемым способом, показал; что результаты лабораторного исследования были получены уже в день обращения за.медицинской помощью, что позволило»a следующий день начать целенаправленное этиотропное лечение, и 25 больных (89 ) выздоровело в течение 5-7 сут от начала лечения.

Таким образом, при использовании предложенного способа диагностики стоматоген.ной анаэробной инфекции сократилось время лечения (с 12 до 5-7 сут) у 64 /обольных.

Кроме того, положительный эффект предлагаемого изобретения состоит в значительном удешевлении и упрощении метода исследования.

Новизна предлагаемого способа диагностики стоматогенной анаэробной инфекции по сравнению с известным (микробиологический метод) состоит в вьл1влении .антител в титре более 1:60 к антигенам анаэробных стрептококков путем проведения реакции между сывороткой крови больных и фикоированными эритроцитами, сенсибилизированными антигенами наиболее распространенных штаммов анаэробных стрептококков (например, Strept. micros. interm.), использование которых в 67%случаев обеспечивает диагностику анаэробной инфекции при периодонтите, периостите и пародонтозе.

Таким образом, изобретение дает значительный экономический и социальный эффект, оно позволяет быстро и точно в течение 3-4 ч диагностировать анаэробную стоматогенную инфекцию, проводить более эффективное лечение и профилактику стоматологических заболеваний, снизить нетрудоспособность и ускориТь реабилитацию;

При данном способе диагиостики.нет необходимости в дорогостоящей аппаратчре и питательных средах.

Тираж 722 Подписное

Ужгород, ул. Проектная, 4