Способ определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯОДЕЙ СПОСОБНОСТИ ЭЯКУЛЯТА путем определения ферментативной активности эякулята, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в пробе определяют активность креатинфосфокиназы , гйдрооксибутиратдегидрогеназы , лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношение гидрооксибутиратдегид рогеназы к лактатдегидрогеназе и при снижении этого соотношения менее 1,0 и одновременном повышении активности креатинфосфокиназы от носительно нормы определяют нарушение оплодотворяющей способности эякулята.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (191 (11) 4(so А 61 В 10 00. ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OfHPÛÒÈÉ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3625283/28-13 (22) 13.07.83 (46) 15.04.85. Бюл. В 14 (72) В.А. Бурлев, Л.А. Урошлева и В.А. Дергачева (71) Всесоюзный научно-исследовательский центр по охране здоровья матери и ребенка (53) 616.07(088.8) (56) 1. Лабораторная диагностика мужского бесплодия, Методические рекомендации Министерства здравоохранения СССР, И 10-8/52, 12.06.79 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯ1(ЩЕЙ СПОСОБНОСТИ

ЭЯКУЛЯТА путем определения ферментативной активности эякулята, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, в пробе определяют активность креатинфосфокиназы, гидрооксибутиратдегидрогеназы, лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношение гидрооксибутиратдегидрогеназы к лактатдегидрогеназе и при снижении этого соотношения менее 1,0 и одновременном повышении активносTH креатинфосфокиназы относительно нормы определяют нарушение оплодотворяющей способности эякулята.

6 11499

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лабораторной диагностике мужского бесплодия и последующей патогенетичес- кой терапии.

Известен способ определения нарушения оплодотворяющей способности эякулята путем определения ферментатив:-ой активности эякулята 1).

Недостатком известного способа явЛяется его низкая точность.

Цель изобретения — повышение. точности способа, Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения нарушения оплодотворяющей способности зякулята, включающему определение ферментативнои активности зякулята, в пробе Определяют ак1ивность креатинфосфокиназы, гидроок.-.к- -„;:; .бутиратдегидрогеназы, лактатдегидрогеназы, рассчитывают соотношение гидрооксибутиратдегидрогеназы к лактатдегкдрогеназе и при снижении этого соотношения менее 1,0 и одно- д временном повьилении активности креатинфосфоккназы относительно нормы

Определяют нарушение сплодОтвОряющей способности эякулята.

СпОсоб Осуществляют следующим соразОмо

В пробе эякулята определяют активность ферментов: креатинфосфокиназы (КФК),гидрооксибутиратдегидрогеназы (ГБДГ) к лактатдегидрсгеназы (ГЩГ). ЗБ

Определение креатинфосфокиназы, гкдрооксибутиратдегкдрогеназы, лакта ;--дегидрогеназы осуществляют спектрофотометрически по изменению оптической плотности субстрата при 340 нм в те- 40 чение 1 мин при 37 С для ГБДГ.И ЛДГ и при 25 С для КФК.

Для определения креатинфосфоккна= зы реакционная смесь содержи 20 мкл исследуемого Образца эякулята, кота- - З рый предварительно разводят физиологическим раствором 1:20 (рабочий раствор), к .525 мкл субстрата, содержащего 100 ммоль 3-этаноламинового буфера, рН 7,0, 35 ммоль/л креатин- 56 фосфата, 20:мчаль/л глюкозы, 9 ммоль/г глютаткона,,О ммоль|л уксуснокислого магния, 1 ммоль/л АДФ,,0,6 ммоль/л НАДФ, 10 ммоль/л АИФ, 11у2 кЕ/л MNHo глюкОзо-.б-фОсфатде- H гидрогенаэы, 1,2 кЕ/л мин гексокинаэы., Полученную смесь перемеаявают к кнкубируют при 25 С s тененке 5 мин.

40 2

Затем при 340 нм измеряют изменение оптической плотности в 1,0 см кювете через 1,0 мин. в течение 3 мин, Активность фермента рассчитывают по формуле: д.А/мин х 3524 Е/л и выражают в международных единицах Е/л, Для определения гидрсоксибутиратдегидрогеназы реакционная смесь содержит 20 мкл раствора зякулята, разве.пенного 1:20 физиологическим раствором, и 630 мкл сусбстрата, содержащего 3,0 ммоль/л натриевой соли

X-кетобутирата, О, 18 ммоль/л НАД Н, и 50 ммоль/л фосфатного буфера, рН

7,5, Полученную смесь перемешивают, инкубируют при 37 С в течение 1,0 мин, а затем прк 340 нм измеряют измене-. ние оптической плотности через

1,0 мин в 1,0 см кювете в течение

3 мин, Активность фермента рассчипо формул l а A./èèè х 5000 Е/л и выражают в международных единицах

Е/л.

Для определения лактатдегидрогеназы реакционная смесь содержит 20 мкл зякулята, разведенного 1:20 физиологическим раствором, и 630 мкл субстрата, содержащего 0,6 ммоль пирувата, 0 ;8 ммоль/л НАД Н,, 50 ммоль/л фосфатного буфера, рН 7,5, Полученную смесь перемешивают, кнкубируют при

37 C в течение .1,0 мин и измеряют изменение оптической плотности в

1 О см кювете в течение 3 минут, Активность рассчитывают по формуле:

АА/мин х 492 Е/л к выражают в международных едкнииах Е /л .

Рассчитывают стиошение величины активности ГБДГ к ЛДГ к при повышении активности КФК относительно нормы (более 950 Е/л) к отношении

ГБДГ/ЛДГ менее 1,0 диагностируют.

П р i K & е р 1< Больной Б > сбсле дсвлн пс повод,. бесплодного брака, 2> ле», « ракткчески здоров вторич ные половые признаки выважены Ис следов ние = якулята псказалО нормаль исе содержание сперматозоидов, их жизнеспособность, подвижность 89Х лейкоциты единичные, слизи нет.

Проба Курпрока-Миллера положительная, проба Симса-Гунера положительная, микрсагглютинация по Баскину отрицательная. Данные предлагаемого способа: креатинфосфокиназа 1230 Е/л, ГБДГ/ЛДГ 0,89. Заключение: снижение Оплодотворяющей способности эякулята. Проведенное лечение псз1149940

Составитель Н. Валеева

Редактор А, Ревин Техред Т.Дубинчак Корректор Е, Сирохман

Заказ 1986/3 Тираж 722 Подписное

ВНЙИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Филиал ППП "Патент", г . Ужгород, ул, Проектная, 4

3 волило нормализовать КФК, ГБДГ, ЛДГ. Через 2 месяца после лечения у супруги наступила беременность.

Л р и м е р 2. Больной К., обследован по поводу бесплодного брака, 27 лет, практически здоров.

Первичные и вторичные половые признаки выражены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальную оплодотворяющую способность.

Определение КФК, ГБДГ, ЛДГ показа ло, что активность КФК составляет

949 Е/л, а соотношение ГБДГ к ЛДГ

1 равно 1, 1, что указывало на отсутствие изменения оплодотворяющей способности эякулята. Рекомендовано

В комплексное обследование и лечение супруги. В последующем у нее наступила беременность.

Пример 3. Больной П., обследован по поводу бесплодного брака, 25 лет. Практически здоров, Первичнйе и вторичные половые при5 знаки выражены. Исследование эякулята по прототипу выявило нормальную оплодотворяющую способность. Определение КФК, ГБДГ, ЛДГ показало, что активность КФК была 951 Е/л, а соотношение ГБДГ к ЛДГ равно

0,99, что указывало на снижение оплодотворяющей способности зякулята.

Рекомендовано комплексное лечение, после проведения которого у супруги наступила беременность.

Использование предлагаемого способа в медицинской практике повышает точность диагностики до

77,7Х. Кроме того, способ прост в исполнении, может быть осуществлен в лабораторных условиях,