Способ определения антиэритроцитарных антител

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИЭРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ путем взаимодействия исследуемых эритроцитов с аглютинирующим агентом, отличающийся тем, что, с целью повышения чувст.вительности способа, в -качестве аглютинирующего агента используют формалинизированную:суспензию Staphylococcus aureus, и исследуемые эритроциты обрабатьтают иммунной сывороткой против глобулинов человека или чистыми антителами, полученными из антиглобулиновой сыворотки. сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) 4(s1) А 61 К 39 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

110 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA (21) 3543429/28-13 (22) 19.01.83 (46) 30.06.85. Бюл. Ф 24 (72) М.И; Койфман, Т.Н. Васильева, Н.И. Оловникова и. А.М. Оловников (71) Ордена Ленина институт химической фиэики АН СССР и Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (53) 615.375(088.8) (56) Идельсон Л.И. и др. Применение агрегатгемаглютинационной пробы и других методов для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии с отрицательной пробой Кумбса. — Проблемы гематологии и переливания крови, 1975, У. 8, с. 56-60 (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИЗРИТРОЦИТАРНЫХ АНТИТЕЛ путем вэаимодействия исследуемых эритрвцитов.с аглютинирующнм агентом, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повыще» ния чувствительности способа, в качестве аглютинирующего агента используют формалинизированную суспенэию

Staphylococcus aureus, и исследуемые эритроциты обрабатывают иммунной сывороткой против глобулинов человека или чистыми антителами, полученньвии иэ антиглобулиновой сыворотки.

1 1163864 г

Пример 1. Отмытые от сывороантитела против 1gG человека (концентрация антител 0,0075 мг/мл). Эритро-30

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения физиологического состояния организма, и может быть применено в иммуногематологии и изосерологии.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа определения антиэритроцитарных антител. точных белков эритроциты донора 0(1)

Rh(+) сенсибилизируют различными разведениями антиреэусной сыворотки (титр в пробе Кумбса 1:64) при 37 С в течение 30 мин. Сенсибилизированные in vitro эритроциты отмывают от несвязавшихся белков антирезусной сыворотки и инкубируют с антиглобулиновой сывороткой в соотношении

1:3 при 37 С в течение. 30 мин. Одну каплю 20Х-ной взвеси отмытых от несвязавшегося белка эритроцитов смешивают с одной каплей 5Х-ной взвеси формалинизированного staphylococcus

anreus (штамм Соуп Т) и в течение

10 мин регистрируют визуально наличие или отсутствие четкой агглютинации.

Пример 2. Применяют чистые циты донора 0(1)Rh(+) сенсибилизируют разведениями антирезусной сыворотки при 37 С в течение 30 мин. Затем отмытые от несвязавшейся антирезусной сыворотки эритроциты инкубируют с чистыми антителами, выделенными из антиглобулиновой сыворотки, при 37 С в о течение 30 мин. Одну каплю 20Х-ной взвеси эритроцитов, отмытых от несвяэавшегося белка, смешивают с одной каплей 5Х-ной суспензии Staphylococcus aureus и регистрируют наличие или отсутствие агглютинации.

Как установлено в модельных опытах, чувствительность предлаваемоro способа (БГ-теста) превышает чувствительность АГА-пробы в антиглобулиновом варианте в 3-6 раз при использовании антиглобулиновой сыворотки и в 10-20 раэ при использовании чистых антител.

Пример 3. Больная Ц. О., 4 года 3 мес., поступила в клинику

12 января 1982 r. по поводу анемии неясного генеза в состоянии средней тяжести. Из анамнеза известно, что с октября 1980 r. девочку периодически госпитализировали в больницу

25 по поводу низкого содержания гемоглобина, где ставился диагноз железодефицитной анемии. При поступлении в больницу отмечено наряду с низким содержанием гемоглобина (эритроцитов 1500000, Нв 33 ед) увеличение печени, пальпируется селезенка. Прямая проба Кумбса отрицательная.

Одну каплю исследуемых эритроцитов больной, отмытых от сывороточных белков, инкубировали с тремя каплями антиглобулиновой сыворотки при

37 С в течение 30 мин, отмывали от а несвязавшихся белков. Одну каплю

20Х-ной взвеси эритроцитов смешали с одной каплей 5Х-ной формалинизированной суспензии Staphylococcus

aureus отметили четкую агглютинацию. Таким образом, с помощью БГ-теста, у ребенка выявлено наличие антиэритроцитарных аутоантител; что позволило поставить диагноз аутоиммунной гемолитической анемии. Назначено лечение. В анализе крови от

8 февраля 1982 r. эритроцитов 2400000, Нв-48 ед.

Предлагаемый способ (БГ-тест) позволяет просто и надежно проводить дифференциальный диагноз больных с клиническими признаками гемолиза, что имеет важное значения для оценки прогноза болезни, решения вопроса о дальнейшем исследовании и выбора метода лечения.

Чувствительность предлагаемого

БГ-теста при использовании антиглобулиновой сыворотки превышает чувствительность пробы Кумбса в 16-32 раза, а при использовании чистых антител — в 128-256 раз. Специфичность предлагаемого способа проверяли исследованием 78 доноров и 23 больных с различными формами анемии неиммунного генеза (железодефицитная анемия, болезнь Маркиафавы Микелли, наследственная микросфероцитарная анемия, анемия, обусловленная дефицитом глюкоз-б-фосфатдегидроreнаэы).

Предлагаемый способ высокоспецифичен и чувствителен.

Оценка реакции не представляет затруднений. Способ прост в выполнении. Все это существенно расширяет возможности применения предлагаемого способа в клинической иммуногематологии и изосерологии и в биологии для иммунологических исследований на. биологических объектах.