Способ исследования реологических свойств эритроцитов

 

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ путем определения деформируемости и агрегационной способности обработанной эритроцитарной взвеси с последующим фотометрированием, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, взвесь эритроцитов наносят на колонку, которую предварительно последовательно заполняют О, 24 УМ раствором сахарозы в 10 ,uM трис-НС1-буфере при рН 7,4 и смесью этого же раствора сахарозы и 150jliM раствора хлористого натрия в указанном трис-буфере в соотношении 1:7, инкулируют колонку в течение 20iO,5 ч, затем сливают и фотометрируют верхнюю и нижнюю фракции колонки, определяют отношение первого значения к второму и при значении этого параметра более 15,6 определяют патологичес .кое повьшение способности эритроци (Л тов к агрегации и понижение деформируемости .

C0IO3 СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1 Ф) (5))4 А 61 В

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕ

К ABTOPCHGMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2 t ) 3236713/28-13 (22) 12.01. 81 (46) 23.07.85. Бюл. № 27 (72) Э.Е. Мхеян, I0.Ñ. Тунян, С.Э.Акопов, Г.О. Бакунц и А.С. Зограбян (7 I) Ереванский ордена Трудового Красного Знамени государственный медицинский институт (53) 616.07(088.8) (56) Swank R.Z., Hirsch Н. Zsselhard M. — Bibl. Anat., 1964, ¹ 19, р. 340. (54) (57) СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ РЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ путем определения деформируемости и агрегационной способности обработанной эритроцитарной взвеси с последующим фотометрированием, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, взвесь эритроцитов наносят на колонку, которую предварительно последовательно заполняют 0,24 РМ раствором сахарозы в IO,()М трис-НС1-буфере при рН 7,4 и смесью этого же раствора сахарозы и 150/)) М раствора хлористого натрия в указанном трис-буфере в соотношении 1:7, инкулируют колонку в течение 20-0,5 ч, затем сливают и фотометрируют верхнюю и нижнюю фракции колонки, определяют отношение первого значения к второму и при значении этого параметра более 15,6 определяют патологичес.кое повышение способности эритроцитов к агрегации и понижение деформируемости.

11682 мозга

n=55

95, 4 15, 1 миокарда

89, 1+9, 8

n=39

Здоровые доноры

22,1 6,4 68ф7,1

59,9+7,3 39,5+4,2

1 0,127 0,04

50 2 8 3 0 9 дискоцитов к эритроцитам с измененной формой (сфероциты,эхиноциты,сфероэхиноциты ).

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки реологических свойств эритроцитов — их деформируемости и способности к агрегации. 5

Цель изобретения — упрощение и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь забирают из локтевой вены

10 в количестве 3-4 мл, стабилизируют

3,8 -ным цитратом натрия в соотношении 9:1. Полученную пробу центрифугируют 10 мин при 1000 об/мин.

Осадок эритроцитов трижды отмывают в изотоническом трис-HCl-буфере (pH 7,4). Для опыта используют 1 мл плотноотцентрифугированных эритроцитов.

Разделение эритроцитов производят в градиенте плотности сахарозы. В колонку длиной 45 см и диаметром

1,6 см наливают 10 мл 0,24 М раствора сахарозы на 10 ъ М трис-НС1 †буФере (рН 7,4). Сверху, по стенке, осторожно наслаивают 60 мл смеси из

0,24(0 H раствора сахарозы и 150 М раствора NaC1 на 10 (UI" трис-НС1-буфере (рН 7,4) в соотношении 1:7. Полученный ранее 1 мл эритроцитов ос- 30

I торожно наслаивают на поверхность жидкости в колонке, причем распределение эритроцитов должно быть равномерным. Следует помнить, что эритроциты должны быть свежими. Допустимо о хранение эритроцитов при 4 С не бол ее 30 мин, Заполненную колонку, избегая встряхивания, помещают в холоцильник при 4 С на 20 ч. Необходимо стро-40 го следить за температурным режимом — допустимы колебания темперао туры не более + 1 С. По истечении времени инкубации отбирают две фракции эритроцитов следующим образом.

Первые 10 мл сливают. Следующие 5 мл собирают в пробирку (фракция 1). Затем сливают следующие 50 мл и собирают оставшиеся 5 мл (фракция 2).

Из обеих фракций берут ho 1 мл взвеси, добавляют 4 мл 10 П1М трисНС1-буфера (рН 7,4). Пробы инкубируют 30 мин при комнатной температуре, насыщают гемолизат кислородом воздуха и фотометрируют на ФЭК-56 у5 при красном светофильтре.

Из полученных данных рассчитывают величину и =D /D 100%, где п и Р

03 2 величины оптической плотности гемолизата из 1- и 2-й фракций соответственно. В таблице показаны структурно-функциональные параметры эритроцитов 1-й (нижней) и 2-й (верхней) фракций.

Величина и характеризует деформируемость и способность к агрегации эритроцитов, так как в верхнем слое колонки собираются эритроциты с измененной формой (эхиноциты), плохо деформирующиеся и с повышенной ана=собностью к агрегации, а в 1-й фракции сосредоточены дискоциты, хорошо деформирующиеся и с нормальной агрегирующей способностью.

Величина параметра у больных с патологией мозгового и коронарного кровообращения, :

Вольные с инфарктом

n=28 26, 4+10, 8

У больных с ишемическим инсультом и инфарктом миокарда, у которых неоднократно показано повышение способности эритроцитов к агрегации и понижение их деформируемости, параметр Ь достоверно выше, чем у здоровых.

Изобретение обеспечивает упрощение и ускорение способа, его доступность для любой клинической лаборатории, пригодность для проведения массовых обследований как в стационаре, так и в амбулаторных условиях.

Кроме того, способ может быть использован для контроля за эффектив1 остью лечения.

П р и м е ч а н и е. d — отношение