Способ диагностики туберкулеза

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА , включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке с последующим определением титров противотуберкулиновых антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуемую сыворотку адсорбируют антисывороткой против сыворотки туберкулинотрицате.тьного донора.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 39/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3621672/28-13 (22) 12.07.83 (46) 07.08.85. Бюл. № 29 (72) Н. И. Архангельский и А. И. Сихарулидзе (71) Тбилисский государственный институт усовершенствования врачей (53) 615.373 (088.8) (56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.:

Медицина, 1982, с. 133 — 135.

„Л0„„1171038 А (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА, включающий добавление антигенного эритроцитарного диагностикума к исследуемой сыворотке с последующим определением титров противотуберкулиновых антител, отличающийся тем, что, с цел ью повышения точности способа, исследуемую сыворотку адсорбируют антисывороткой против сыворотки туберкулинотрицательного донора.

1171038

Изобретение относится к медицине и может быть использовано и ри диагностике ту бе р кул еза.

Способ осуществляют следующим образом.

Берут 200 мл флакон с эритроцитарной массой донорской крови 1 (О) группы, добавляют равный объем физиологического раствора (изотонической раствор хлорида натрия — 0,85о/о-ный раствор химически чистой поверенной соли рН 7,2 — 7,4) и взвесь центри руги руют при 2000 — 3000 об/мин в течение 5 — 7 мин, надосадочную жидкость выливают, осадок отмывается 5 раз 10 объемами физиологического раствора центрифугированием по 5 мин при 3000 об/мин.

Затем определяют количество осадка, из которого делается взвесь (из расчета 1,2 мл осадка на 8,8 мл физиологического растворя). К ней постепенно прибавляется 37о/<>-ный раствор формалина (из расчета 2 мл 37о/о-ного формалина ня 8 мл физиологического 20 раствора) в половине объема данной взвеси эритроцитов. Полученную формалинизированну ю взвесь взбалтывают в течение

1 ч и помещают в холодильник при 2 — 4 С

Н3 48 ч, после чего ее центрифугируют 5 мин при 30ОО ()()/XII)H. 1(олученный осадок Отмывяк>т 5 — 6 ряз Ооьемами физиологического раствора цептрифугировянием по 5 мин при

ЗООО Об мин lo !(розрячности надосадочной жидкости. Зятем из Осадка делают взвесь

{из расчста 1,2 мл осадка ня 8,8 мл физио- зс( лоп>ч cKol o раствора), к которой добавляют

37о/)-ный фОРмалин (из Расчета 1 i, 37о/о-ного формялиHH ня 100 мл взвеси), взбалтын:! "oò 1{E -15 мин. Получс«Hyio взьесь фор 13„1 HO!HIÈ ()(>В!1 1 1Н1,1Х ЧЕЛОВЕЧС СКИХ

ТоВ 1 { О ) гру I IHBI хря ни 1 13 (o!Io!LEI I BHH KP. при 35 ,(ос .)трифу гиръ !От

5 мин 1<ри 3000 o j ii!11, а полученный осадок

<) <3l ы 13>1!От 3 р lзя 1 О oo I (. м !!ми физиологичс с кого р>1(твор(1 цснтрифу I lip< ванием по 5 мин ! ри 3000 Об/мин, !!Осле чего из полученного

Ое;11 на I oòoв,!т 4 /о-Ii(1;) вз11((I> 113 физ иоло! H ICC КОМ РЯ С ГВОРЕ, К01 О() Уi<) ВЬIДЕР)Е И В;1 Ю 1 В теч Hil(. 15 мин в термостате при 37 С. Однс>временно количество раствора тяни!!а ня физиологичс.ском растворе {, 1:1000), рав- 45

»Ое vh333»«oilw осадку, сме1!!ивают с таким

)I((колич стьом (ризиологи (ескогo раствора, кяк и при получении 4%-ной взвеси, а так)h(. llo ì(ill;llo 1 113 5 м и и В 1 ер мост(>т при

37 (. . Зятем оНН смешиваются. Г!О>!уче(!ную смесь выдсрживают в термостате 13 I(чение

3О мин при 37 С, после чего центрифугируют

5 ми>1 при 3000 об/мин. Надосадоч!<ую жид1(о(! 1, BII;IHBH!o<, я ()cядок Отмывают 1 раз

10 Объс мами физиологического раствора це>гг(>ифугировянием B течение 5 мин при

3ООО об/мин и зят(м доводят физиологичес1;им раствором до исходной 4о/о-ной взвеси, Ko1 îðó1О смешивают с равным количеством буферного раствора, рН 6,4 (состав КН РО

7 мл, NaqHPOg 3 мл, физиологический раствор 100 мл).

К полученной смеси добавляют сухие очищенные туберкулины человеческого типа серии № 1 (контрольный М 2450) и бычьего типа серии ¹ 1 (контрольный № 958 Ленинградского НИИ вакцин и сывороток) из расчета 400 мкг (200 и 200 мкг) на 1 мл смеси. Затем смесь выдерживают, периодически взбалтывают в термостате 4 ч при 37 С, после чего к ней добавляют 37 /о-ный формалин (из расчета I о/о к общему объему смеси). Смесь выдерживают 30 мин в термостате при 37 С, после этого помещают на

20 ч в холодильник при 2 — 4 С. Затем смесь центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин и полученный осадок отмывают 2 раза 10 объемами 0,5о/о-ного раствора нормальной кроличьей сыворотки на физиологическом растворе центрифугированием по 5 мин при

3000 об/мин (НКС получают следующим образом: 5 мл крови, взятые из сердца кролика, помешают в термостат на 20 мин при

37 С и выделенную сыворотку центрифугируют 5 — 7 мин при 2000 об/мин; полученную надосадочную жидкость инактивируют в водяной бане при 56/57 С в течение 30 мин, после чего ее адсорбируют взвесью формалинизирова нных человеческих эритроцитов, полученных описанным ранее способом, из расчета 2 капли взвеси (из 1 — -2-миллиметровой пипетки) на 1 мл сыворотки, затем смесь центрифугируют 5 мин 1>ри 3000 Об/мин)

Из осадка готовят 10о/о-ную взвесь на физиологическом растворе и полученный эритроцинарный диагностикум в дальнейшем хранят в хоп<>дильнике при 2--4 С. Контроль диагпостикума осу!цествляется на cbIBopoTке заведомо больного туберкулезом по прсдл я 33(мОAI (11осОО д1131 HOCT11E(II TX бс рк x)1,33.

А>!Тис(!воротку получают путем иммунизации кролика человеческой сывороткой туберкулинотрицательного донора {20,<л крови, взятой из локтевой вены туберкулинОтрицятелщюго 10Hopcl, помешак>т !а 30 мин в термостат при 37 С, после чего выделенную сыворотку центрифугируют 7 мин при

3000 об/мин и полученную нядосадочную жидкость используют для иммунизации hpo лика) . Иммунизацию осугцествляют пятикратным введением, подкожно, в боковую область тела кролика, с интервалами 5 дней.

B возрастающих дозах следующих компонентов:

1 0,2 мл человеческой сыворотки с 0,2 мл физиологического раствора:

11 0,4 мл человеческой сыворотки - 0.4 мл физиологического раствора;

III 0,7 vë человеческой сыворо" ки -- адюВ3НТ (из ряеч(тя 113 м,! сыворотки 1!.0 J м.l адювянтя);

1 (> 1,О 31,! !е.1О!>ечсской Bi!30(. -I(H

B3 liT;