Способ определения клеточного иммунитета

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОЧНОГХ ) ИММУНИТЕТА, включающий вьщеление лейкоцитов из крови, культивирование их и подсчет властных клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, культивирование лейкоцитов в концентрации 1,5-10 - 2,0-10 осуществляют на предметных стеклах при 4-8°С в течение 1 - 2 ч.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСИИХ

РЕСПУБЛИН (I9) (51) 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

Г1О ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1 "> )K6 « !,, I (21) 3559961/28-13 (22) 28.02.83 (46) 23.08.85. Бюл. Р 31 (72) А.Н. Красюк, Н.А. Панченко и В.Н. Федорич (7i) Ордена Трудового Красного

Знамени институт физиологии им. А.А. Богомольца и Институт зоологии им. И.И. Шмальгаузена (53) 615. 375 (088. 8) (56) Новиков Д.К., Новикова В.И.

Кпеточные методы иммунодиагностики.

Минск, Белорусь, 1979. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА, включающий выделение лейкоцитов из крови, культивирование их и подсчет бластных клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени определения, культивирование лейкоцитов в концентрации

1 5 ° 10 - 2,0 10 осуществляют на с

9 о предметных стеклах при 4-8 С в течение 1 — 2 ч.

1 117403

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к цитологическим способам определения реакции трансформации лейкоцитов в краткосрочной культуре in vitro, что ха- 5 рактеризует состояние клеточного иммунитета организма, и может быть использовано в клинических медицинских и ветеринарных лабораториях.

Цель изобретения — повьппение точности и сокращение времени определения клеточного иммунитета.

Пример 1.. У исследуемого донора берут иэ локтевой вены кровь в объеме 1-2 мкл в предварительно обработанную гепарином пробирку (8 — 10 ед/мл). С момента забора крови и ее доставки время не должно превышать 1 — 2 ч.

Кровь отстаивают в течение 30 — 20

40 мин при комнатной температуре..

Затем взвесь лейкоцитов в плазме переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при 800 об/мин.

Плазму отсасывают при помощи пас- 25 теровской пипетки и к лейкоцитам добавляют питательную среду, состоящую из среды 199 и 35-40Х-ной аутологичной плазмы. Конечная концентрация лейкоцитарных клеток должна 30 составлять 1 5 .10 - 2,0 -10 в 1 мкл

6 суспензии. В случае, если содержание нелимфоидных элементов более 707, их необходимо выделить отдельно и добавить в необходимой пропорции.

Суспензию клеток наносят а виде капель на обезжиренное предметное стекло и помещают во влажную камеру.

Инкубируют лейкоциты при 4-8 С в течение 1-2 ч.

Стекла вынимают из камеры, осторожно споласкиваютдистиллированной во.qoA,âûñóøèâàþò на воздухе, фиксируют и окрашивают ро Паппегейму..Подсчитывают числобласттрансформированных лимфоцитов (по включению ЗН-тимидина) и транформированных клеток нелимфоидной природы. После инкубации число трансформированных лиифоцитов у здоровых людей 427, трансформированных клеток So нелимфоидной природы 21Х, При выписке: количество эритроци тов 4,5 10 л, гемоглобин 136 г/л, Пример 2. Больная К.,28 лет.

Диагноз: ревматизм, активная форма, II-III степени рецидивирующий ревмокардит. Жалобы на боли в суставах и в области грудной клетки слева, периодическое повьппение температуры. Болеет с пяти лет. Объем движений в коленных

3 2 суставах ограничен, суставы болезненны, припухлость кожи над суставами, субфебрильная температура, комбинированный митральный порок.

При поступлении: количество эритроцитов 4 ..10 л, гемоглобин 110 г/л, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов

8,8 10 л, РОЭ 27 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Количество лимфобластов 577., трансформированных клеток нелимфоидной природы 767.

Больная принимала лечение: капли

Стражеско, бисептол, фуразолин, димедрол, адонизид, комплекс витаминов.

В результате проведенного лечения состояние больной улучшилось и в удовлетворительном состоянии она была выписана.

При выписке; количество эритроцитов 4,2 ° 10 л, гемоглобин 113 г/л, ц.п. 0,8, количество лейкоцитов

6 .10 л, РОЭ 10 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобласты 417, трансформированные нелимфоидные клетки 35Х.

Анализ препаратов по предлагаемомуспособу показал, что изменение количества трансформированных клеток лимфоидной и нелимфоидной природы коррелирует с изменением клинического состояния больной.

Пример 3. Больная К., 23 года, поступила 02.12.82, выписалась

24.12.82 r. Диагноз: ревматизм, активная форма, 1. ст., рецидивирующий миокардит. Жалобы на боли в суставах и в области грудной клетки слева, субфебрильную температуру, слабость.

Заболевание началось 1,5 мес назад после острой, ангины. Хруст в суставах, .болезненность при сгибании, объем движений в суставах ног ограничен.

При поступлении: количество эритроцитов 4,4 10 л, гемоглобин

133 г/л, ц.п. 0,9, количество лейкоцитов 8,3 -10 л, РОЭ 8 мм/ч, ревмоб проба отрицательная. Лимфобластов 687., трансформированных нелимфоидных клеток 437.

В стационаре больная получила лечение: аскорутин, пенициллин, аналь- . гин, олеотетрин, делагил. В результате проведенного лечения состояние больной существенно улучшилось и она в удовлетворительном состоянии была выписана из стационара .

1174033 4

Соотношение количества ДНК-синтезирующих клеток в культуре стимулированной ФГА и по известному и предлагаемому способам представлено в таблице.

3 ц.п. 0,9, количество лейкоцитов

5,8 -10 л, РОЭ 6 мм/ч, ревмопроба отрицательная. Лимфобластов 51Х трансформированных клеток нелимфоидной природы 27Х.

Снижение степени трансформации лейкоцитов при выписке свидетельствует о нормализации клеточной иммунологической реактивности, что коррелирует с улучшением общего состоя- 10 ния больных и с другими лабораторными анализами.

Таким образом, предложенный способ (таблица) позволяет в более короткие сроки (1-2 ч, а по известному 1

72 ч) с более высокой точностью определить состояние клеточного иммунитета и использовать его в качестве экспресс-метода при диагностике и подборе лекарственной терапии. 2О

Длительно инкубаци об

Предлагаемый

62,415,6

62 9+4, 4

63ф1й1- 2

63) 1+1,2

63, 1+1,2

Нет

О, 2+О, 02

14, 012 2

56,0+3,1

72

Составитель Г. Крюкова

Техред М. Надь

КорректорЕ. Рошко

Редактор С. Саенко

Подписное

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 5090/5 Тираж 722 .

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, ?москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5