Диагностическое средство для определения лейкоцитов в моче

 

1. ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ, В МОЧЕ, содержащее хромоген и буферный раствор , отличающееся тем, что, с целью повышения его специфичности, в качестве хромогена оно содержит индоксильный или тиондоксильный эфир общей формулы 0-А-В где R,jRj,Rj,R - водород, галоген, алкил с 1-3 атомами углерода, низший алкоксил, арил, аралоксил, гидроксил , карбоксил карбоксиалкоксил, аралоксикарбонилалкосил , аралкил, аралкоксикарбонил, ,нитрои низшая ациламиногруппа, два соседних замесг тителя означают замещенный галогеном бензоаннелированный остаток; X атом серы или иминогруппа , замещенная остатком низшего алкила, аршта и ацила; А остаток гликокола, аланина, валина, лейцина, глицерина, изолейцина, фенилаланина , тирозина или 0-ацетилтиразина , остаток аланил-аланина или оссо остаток аланил-аланил-аланина; та связанная с атомом азота указанных в А аминокислот груп па C -Cg-алкоксикарбонила , С,-С -алкилсульфонила 96 4 формила, ацетила или дифениламино карбонила группы О -CO-CH -CH -COOH, или -С-О-С Н/гО-СНз

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (191 (111 (51)4 С 0 N 33 48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ц

К ПАТЕНТУ тителя означают замещенный галогеном бенэоаннелированный остаток;

Х вЂ” атом серы или иминогруппа, замещенная остатком низшего алкила, арила и ацила;

А — остаток гликокола, аланина, валина, лейцина, глицерина, изолейцина, фенилаланина, тирозина или 0-ацетилтиразина, остаток аланил- аланина или осостаток аланил-аланил-аланина;, — связанная с атомом азота указанных в

А аминокислот группа С1-С -алкоксиб карбонила, С -С—

-алкилсульфонила формила, ацетила или дифениламинокарбонила группы

О-А — Ц

СИЗ

СНЗ или — С-О С Н11, О СИ е

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 2853140/28-14 (22) 19 ° 12. 79 (31) Р 28 54 987. 3 (32) 20. 12. 78 (33) DE (46) 07. 10.85. Бюл. В 37 (72) Дитер Бергер, Франц Браун, Вернер Гютляйн, Манфред Кур и Вольфганг Вернер (РЕ) (71) Берингер Маннхайм ГмбХ (DE) (53) 616.07(088.8) (56) Патент Великобритании В 1128371, кл. G 01 N 33/16, 1972. (54)(57) 1. ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ В МОЧЕ содержащее хромоген и буферный раствор, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения его специфичности, в качестве хромогена оно содержит индоксильный или тиондоксильный эфир общей формулы где R .,R,,R3,R — водород, галоген, алкил с 1-3 атомами углерода, низший алкоксил, арил, аралоксил, гидроксил, карбоксил, карбоксиалкоксил, аралоксикарбонилалкосил, аралкил, аралкокснкарбонил, нитро- и низшая ациламиногруппа, два соседних замес-.

СО

Г

1 — СО-СЦ2 СН,— СООН.

Г

СО

1184444

R6

7 8 или остаток

О о с О

Ч» 4 h где С вЂ” группа -S- -С-О -С-Sce о

1 3

-С- -Я- или -С = СН-С-

» »

D — черта валентности или

С,-С -алкилен;

E — фенил, 1-нафтил, 2-нафтил, 2-фурил, 8-хинолил, 2-тиенил, З-пиридил, циклогексил или N-пиперидил;

R,R R7 и К8 могут быть одинаковы5» ми или различными и обозначать водород, прямой или разветвленный С1-С -алкил, С -С>-алкокси, нитро, гало ген, ди-С -С>-алкиламино, ацетиламино, гидроксил, бензилокси, гидрокси-С1-С, алкокси -С -Сз- алкокси, метокси-С вЂ” С -алкокси-.С -С -ал- з 3 кокси, гидрокси-С, -С > - злкил, Чувствительность теста составля;ет 200 лейкоцитов на 1 мкл. Оценку можно также осуществлять с помощью ремиссионной фотометрии при 620 нм.

Тест-бумагу с подобными свойст- . вами (чувствительности 200-2000 лейкоцитов на 1 мкл) получают, если

Ю вместо 3-(Н-(бензилоксикарбонил)-L-аланилокси)-индола используют следующие субстраты, причем также можно наблюдать окраску от светлобирюзового до синего обычно бесцветИзобретение относится к клинической биохимии, а именно к диагностическому средству для определения., лейкоцитов в моче.

Цель изобретения — повышение специфичности средства для определения лейкоцитов в моче.

Пример. Фильтрованную бумагу последовательно пропитывают следующими растворами и затем высушивают при 60 С.

Раствор 1.

Динатрийтетраборат-декагидрат, г 1,91

Дистиллированная вода,мл 30

В растворе устанавливают рН 8,0 с помощью 0,1 н.соляной кислоты и дистиллированной водой доводят общий объем до 100,0 мл.

Раствор 2.

3- (Н-(Бензилоксикарбонил)-L-аланилокси -индол, мг 33,8

Ацетон, мл До,общего объема 100,0 галоген-С -С -алкил, циано» карбоксил, С,-С -алкоксикарбонил, бензилок икарбонил, карбамоил, дис-С,-С z-алкилкарбамоил,карбоксил-С,-С>-алкил,карбоксил-С,-С -алкокси, карбоксил-С,-С -алкиламино или фенил, при следующем соотношении компонентов, мас.7:

Хромоген 0,2-9,0

Буферный раствор Остальное

2. Диагностическое средство по п 1, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит смачиватель в количестве 8,9-28,4 мас.7..

3. Диагностическое средство по п.1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно дополнительно содержит окислитель в количестве 1,9-9,0 мас.7..

4. Диагностическое средство по .и. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что оно дополнительно содержит галеновую добавку в количестве 78,5 мас.7..

Получают бесцветную тест-бумагу, которая при погружении в содержащую лейкоциты мочу в зависимости от концентрации лейкоцитов окрашивается

5 в цвета от светло-бирюзового до синего. Можно обнаружить 5 000 лейкоцитов в 1 мкл мочи за 2 мин;

1000 лейкоцитов в 1 мкл мочи за

6 мин; 500 лейкоцитов в 1 мкл мочи за 10 мин; 200 лейкоцитов в 1 мкл мочи за 15 мин.

1184444

40 ной тест-бумаги и при погружении в содержащую лейкоциты мочу:

3-fN-(бензилоксикарбонил)-L-аланилокси)-4-метил-индол;

3-(М-(бензилоксикарбонил)-L-аланилокси) -5-метил-индол;

3 (N L — аланилокси) -Ь-метил-индол;

3-(М-(бенэилоксикарбонил)-L-аланилокси)-7-метил-индол;

3-(М-(бензилоксикарбонил)-L-аланилокси)-4,7-диметил-индол;

3-(N-(бенэилоксикарбонил)-Е-аланилокси1-4-хлор-индол;

3-(N-(бензилоксикарбонил)-L-аланилокси)-5-бром-индол;

3-(М-(бензилоксикарбонил)-L-ала-.. нилокси) -б-хлор-индол.

Окрашивание от бесцветного до пурпурного:

20 (3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-Ь—

-аланилокси -4-хлор-5-бром-индол;

3-1М-(толуол-4 -сульфонил)-L !

-аланилокси)-4,5,7-трихлор-индол;

3 $N (толуол 4 — сульфонил) 1 25 — алаиилокси 1 -4-хлор-5-бром-7-метилJ индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-1.—

-аланилокси)-5-окси-индол;

3-(М-(бензилоксикарбонил)-L-ала- З0 нилокси)-5-метокси-индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-5-бензилокси-индол;

3-(N-(толуол -4 -сульфонил)-L-аланилокси 1-4-карбокси-индол; д !

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-4-бензилокси-карбонилиндол;

3-(М-(толуол-4-сульфонил)-L-аланилокси -5-карбокси-метокси -индол. ! Ф !

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-5-бензилоксикарбонил-ме;гок с и-и идол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-1,- 45

-аланилокси)-6-нитро-индол;

3-(N-(толуол-4 -сульфонил)-LI

-аланилокси)-6-ацетиламино-индол;

3- (М-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси|-бензол(ц, -индол. 50

Окрашивание от бесцветного до зеленого:

l-метил-3-(N-(бензилоксикарбонил)-Ь-аланилокси) -индол;

1-бензил- 3-(N-(толуол-4 -сульфо-! нил) -L-aza mzoxcv) -индол;

1-фенил-3- 1М-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-индол.

Окрашивание от бесцветного до сине-зеленого:

1-ацетил-3- (М- (толуол-4 — сульфо-. нил)-L-аланилокси) -индол.

Окрашивание от бесцветного до красного: !

1-бензоил-3-(М-(толуол — 4 -сульфонил) -L-aaav oxcn)-индол.

Окрашивание от бесцветного до фиолетового:

3-1М-(бензилоксикарбонил)-глицилокс и) -индол;

3- jN- (толуол-4 -сульфонил) -глицил-. окси) -индол;

3- (N- (толуол-2 -сульфонил)-L-ааанилокси)-индол:

Э

3-(М-(толуол-3 -сульфонил)-L-asxaнилокси) -и идол;

3-(М- (толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-индол; !

3- fN- (толуол-4 -сульфонил)-D-ала— нилокси)-индол;

3-(N-(бенэилоксикарбонил)-Р,L-аланилокси)-индол;

3-(N-(бенэилоксикарбонил)-L-валилокси)-индол;

3-1М(толуол-4 -сульфонил)-L-валилокси) -индол;

3-1М (бензилоксикарбонил)-L-лейцилокси) -индол;

3-(N-(бензилоксикарбонил)-L-изолейцилокси) -индол;

3-1М-(бензилоксикарбонил)-L-фенилаланилокси)-индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-Ь-фенилаланилокси) -индол;

3-(N-.(àöåòèë-L-тирозилокси)-индол;

3-(N-бензоил-L-тирозилокси)-индол;

3(N-(бензилоксикарбонил)-L-тироэил- окси -индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-L- тирозилокси)-индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-О-ацетил-L-xvpos orcc ) -индол;

3- (N- (бензилоксикарбони и) -L-аланил-L-аланилокси)-индол;

3-(М-(толуол-4 -сульфонил)-D-аланил-L-aaa woxczg-индол;

3-tN-(бенэилоксикарбонил)-L- àëàнил-L-аланил-аланил-L-окси1-индол ! ! В

3-(N-(толуол-4 -сульфонил)-р-аланил-D-аланил-L-аланил-окси)-индол;

3-(N-формил-L-аланилокси)-индол;

3-(N- ацетил-.L-аланилокси)-индол;

3-(N-сукцинил-L-аланилокси)-индол;

3-(N-бензоил-D,L-аланияцокси)—

-индол;

1184444

3- (N-фталоил-L-аланилокси) -индол;

3-(И-(этоксикарбонил)-L-аланило к си) -инд ол;

3-(И-(трет-бутилоксикарбонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(N-(3,6 -диоксана-н-гептилоксикарбонил) -L-аланилокси1-индол;

3-(N-(циклогексилоксикарбонил)-L аланилокси)-индол;

3- 1М-(фенилоксикарбонил)-L-аланилокси) -индол;

3-(М-(4 -метил-бензилоксикарбонил)-Ь-аланилокси(-индол;

3-IN-(4 -метокси-бензилоксикарбонил)-Ь вЂ” аланилокси)-индол;

3-tN (4 -нитро-бенэилоксикарбонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(N-(N-(пнперидино)-оксикарбоHHJI)-L-аланилокси)-индол;

3-(И-(фурил-(2 )-метоксикарбонил -Ь-аланилокси)-индол; (3-jN- (тиенил-(2 )-метоксикарбонил)-L-,àëàíHJIoêñHI — индол;

3-(И-(бензилтиокарбонил) — L àëàнилокси) — индол;

3-Ъ-(метансульфонил)-L-аланилок4.

CHj-ИНДОЛр

3-(И-(бенэилсульфонил)-L-аланилок си) -индол;

3-(И-(бенэолсульфонил)-L-аланил- окси)-индол; !

3-(N (4-бром-бензолсульфонил)-Ь—

-аланилокси) -индол

У

3- (И вЂ” (4 -нитро-бензолсульфонил)—

-L-аланилокси)-индол;

3- (И- (4 -диметиламино-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(N-(4 -ацетиламино-бензолсуль40 фонил)-Ь-аланилокси)-индол;

3- fN-(4 -н-бутил-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-tN-(4-трет-бутил-беызолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(N-(4 -н-октил-бензолсульфонил)-L-aJIaHHJIOKcH)-индол;

3-(И-(4 -окси — беэолсульфонил)-L-аланилокси1-индол;

3-(N (4 -метокси-бензолсульфо50 нил)-Ь-аланилокси)-индол;

3-(И-(4 -бенэилокси-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

I И

3-4N-(4 -(2 -окси-этокси)-бенэолсульфонил)-Ь-аланилокси -индол;

t tI

3-(N-(4 -(3 -окси-э -окси-н-пентилокси)-бензолсульфонил) -L-аланилокси)-индол;

3ф — (4 -(3", б" — лн кси-н-гептилокси)-бенэолсульфо))ил)-Ь-аланилокси -индол, lt

3-(М- (4 -(2 -окси-атил)-бенэолсульфонил)-L-аланилокси -индол;

4 Л Г Л

3-(И- Ь4 -(2 — 14 -нитро-бензил:окси -этил)-бенэолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(И + -(2 -хлор-этил)-бензолсульфонил)-L-аланилокси -индол;

3-(N (4 -ацетил-бенэолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-fN-(4 -циано-бензолсульфонил)-Ь-аланилокси)-индол;

3-(N-(4 -карбокси-бенэолсульфонил)-L-аланилокси) -индол;

3-|N-(4 -метоксикарбонип-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(М-(4 -бензилоксикарбонил-бен-! золсульфонил)-L-аланил-окси)-индол; !

3-(И-(4 -карбамоил-бенэолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-{N- (4 — (диме тилкар баме ил) -бунзолсульфонил) -L-аланилокси) -индол;

3-tN-(4 -карбоксиметил-бенэолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(М-(4 -карбоксиметокси-бенэолсульфонил)-L-аланилокси1-индол;

3-ЬИ-(4 -карбоксиметиламино-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол;

Г I

3-(N-)4 †(бенэилоксикарбонил-метиламино)-бензолсульфонил)-L-аланилокси -индол;

3-(И-(4 -фтор-бензолсульфонил)-L-аланилокси| -индол;

3-(И-(4 -фторсульфонил-бенэолсульфонил)-Ь-аланилокси)-индол;

3- fN-(4 -сульфамоил-бензолсульфонил)-Ь-аланилокси)-индол;

3 †-метил-N-(толуол-4 -сульфо-! нил)-L-аланилокси1-индол;

3-(М-ацетил-И-(толуол-4 -сульфонил)-L-àëàíèëoêñH)-индол;

3-(М-(2,4,6 -триметил-бензолсульфонил)-(,-аланилокси)-индол;

3-(И-(бифенил-4 -сульфонил)-L-!

-аланилокси1-индол;

3-tN-(нафталин-2 -сульфонил)-L-аланилокси)-индол;

3-(И-(4 -ацетиламино-нафталин-Ь—

-сульфонил)"L-аланилокси1-индол ! t

3-(М-(5 -диметиламино-нафталин-! — 1 -сульфонил)-Ь-аланилокси)-индол

) ! Ф

3-(N-(хинолин-8 -сульфонил)-L-аланилокси) -индол;

3-(И- (пиридин-3 -сульфонил)-L-аланилокси)-индол;

1184444

Составитель Н. Хрусталева .

Техред А.Кикемезей Корректор Е. Сирохман,Редактор А. Шишкина

Заказ 6288/57 Тирах 896 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП.™Патент", r. Ухгород, ул. Проектная, 4

3-(N-(2 -нитро-бензолсульфонил)-L-аланилокси)-индол.

Окрашивание от хелтого до зеленого:

3-(Я-(1 -метил-2-бензоил-винил)-L"аланилокси -индол;

3-IN-(5 5 -диметил-3 -оксо-циклоУ гексен-1 -ил)-аланилокси)-индол;

3-(N-(дифенилкарбамоил)-L-аланилокси)-индол;

3-(И-(ди-(4 -ннтробензил)-фосфорил)-L-аланилокси -индол; (3-(N-(ди-(4 -бромбензил)-фосфо> рил)-L-аланилокси)-индол;

3-PN-(толуол-4 -сульфонил)-L-аланилокси)-5-бензил-индол;

3-(М вЂ” (толуол-4 -сульфонил)-Ь-аланилокси)-5-фенил-индол;

3-(К-(толуол-ч -сульфонил)-Ь-аланилокси)-5-метокси-индол.