Способ диагностики аллергии
СПОСОБ ДИАПЮСТИКИ АЛЛЕРГИИ путем инкубации лимфоцитов крови. пациентов в присутствии специфического аллергена с последующим подсчетом стимулированных клеток, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, аллерген используют в концентрации 0,01-0,05 мкг/мл, а лимфоциты обрабатывают 0,0005-0,0б1%-ным раствором хлортетрациклина до и после инкубации и при, увеличении количества флуоресцирующих клеток на 828% диагностируют специфическую аллергию.
С0О3 ССВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
151)4 Абl В 1000
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21). 3611709/28-14 (22) 27.06.83 (46) 15 ° 12 ° 85..Бюл. Р 46 (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (72) А. Г. Чучалин, Ю. "К. Новиков, Н. А. Бражникова, Л..Г. Коркина и В. К. Трескунов (53) 619.375(088.8) (56) Halpern В, Ку N.Т, Amache N. J.
of Allergy, 40, с. 168.
„„Я0„„1197640 A (54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ путем инкубации лимфоцитов крови. пациентов в присутствии специфического аллергена с последующим подсчетом стимулированных клеток, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повьппения точности способа, аллерген используют в концентрации
0,01-0,05 мкг/мл, а лимфоциты обрабатывают 0,0005-0,00IX-ным раствором хлортетрациклина до и после инкубации и при, увеличении количества флуоресцирующих клеток на 828% диагностируют специфическую аллергию.
1197640 пособ
Ф.И.О, галяонный ст.
Котиков С.В.
17 лет
ДП 111 .108 (дом. пыль) .Бронхиальная
-астма атоп,ф.
23 +++
Тимофеевка
Саркисян .Знатнов
68 +++
28
Бронх. астма Тимофеевка, Береза
54
Отрицательный
Способ относится к медицине и может быть применен при диагностике и лечении бронхиальиой астмы.
Целью изобретения является повышение точности способа.
Способ осуществляется следующим образом.
Обычным образом берут у больного
2-3 мл венозной крови. Забор производят н присутствии 40 ед/мл гепарина. Разводят кровь в 3 раза фосфатным буфером и в градиенте плотности фиккола-верографина выделяют суспензию чистых лиимфоцитов. Доводят концентрацию клеток в суспензии до 5 10 мл "(среда 199 является средой цпя хранения исследования кпето1::) . В лунки стандартного иммунологическогд плато разливают по
0,05 мл суспензии лимфоцитов. Добавляют туда 5 мкл исследуемых аллергенов. В Одну лунку контрольную1 вносят 5 мкл физиологического растнора. Помещают плато в термостат и инкубируют при 37 С в течение о
60 мин. Затем содержимое лунок пастеровской пипеткой переносят в центрифужные пробирки, добавляют в каждую пробирку по 5 мл среды !99 и центрифугируют при 180gx10 мин.
Таким образом .отмывают избыток аллергена, не связавшегося с лимфоцитами, Осадок, который содержит клетки, связавшие аллерген, ресус1. пендируют н 0,05 мл бесцветной сре« ды Хенкса. Добавляют в каждую пробирку по 0,01 мл раствора хлортетрациклина в модифицированной среде
Хенкса„ содержашей 0,6 мИ СаС1 .
Концентрация раствора зонда 5 «
«10 моль/л. В такой концентрации хлортетрациклин не обладает цитотоксическим действием на лимфоциты.
Через 5-10 мин каплю окрашенной суспензии лимфоцитов наносят на предметное стекло,.накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе, Длина волны щ возбуждающего света 360 нм, света флуоресценции 540 нм. В образовавшемся препарате живых окрашенных лимфоцитов часть клеток ярко флуоресцирует зеленым светом, часть остается неокрашенной. Подсчитывают число флуоресцирующих лимфоцитов на каждые 100 клеток в суспензии.
При обследовании предлагаемым способом контрольной группы здоровых добровольцев (7 человек) оказалось, что количество флуоресцирующих лимфоцитов без инкубации их с аллергенами колеблется от 2 до 12Х, Предварительная инкубация клеток с ал аллергенами домашней пыли и растительного происхождения не приводила к достоверному изменению числа cseтящихся лимфоцитов. У больных с бронхиальной астмой (атопическая форма) наблюдалась выраженная динамика, которая заключалась в увеличении качества флуоресцирующих лимфоцитов после инкубации их специфическим аллергеном.
В табл. 1 приведены результаты .обследования больных бронхиальной астмой предлагаемым способ и ранее известными методами постановки кожных и ингаляционных проб.
Таблица 1
1197640
Продолжение табл.!
Стародубо34
27
ДПФ98
Шерсть кошки Отрицательный—
Отрица- Положительный тельный
Малоушкина
Шерсть кошки, 4
Береза 4
Шапошников
ДП В 112 12
Шерсть кошки 12
+++
Отрицательный—
13 Отрица- Отрицательный
8 тельный—
Домагин
ДП У 125 7
Тимофеевка, 7
Шерсть кошки 7
+++ Положительный
Болкунов
ДП 9 108 4
Михайлова
ДПУ 95, Тимофеевка
Отрица, тельный
24
+++
+++
Шатуновская
Положительный
+++
12 +
30 ++
ДП 1Ф 108
Положительный
18 ++
Кацман
ДП 111 112
))) Резко28
Федоров
ДП 9 112
Дроздова
Здоровая Инкубация с аллергенами без динамики
Бражникова
То же
Новиков
Ефремов
Иавраев
Иасуев
Гервазиев
Сулефманов
Сибиров
Шалигинов
Шалимова
ДН У 101
ДП У 108
ДП 111 101 ДП Ф 101
СлабопоЭтожительный
Отрицательный положи тельный
Положительный
1 197640
Т а б л и ц а 2
Известный способ
Предлагаемый способ
Аллерген
Диагноз
Ф,И.О свет. клеток
Кожная проба
Ингаляционный до инкубации после тест инкубации
24 ++++
Риносинусопатия Тимофеевка
Зарайский
Рогачева 12 ++
Береза, ольха
28 ++++
Тимофеевка
ДП 11t 130
Эритромицин
Горбунов
Разоренов
Дерматит
14
Филатов
12
Новачков
Пенициллин
Олеандомицин 2
Евстратова
Поляков
Анафилакт, 26
Пенициллин шок
Зтаэол
Койлов
Шульман
Пенициллин
Hs табл, I видно, что .совпадение результатов ингаляционнога и кожного тестов наблюдаются лишь в 60Х случаев (6 иэ 10). Использование предлагаемого способа показывает, что увеличение количества флуоресцирующих клеток после инкубации с соответствующим аллергеном на 8 и более процентов в 90Х случаев (9 из )О) совпадает с положительной реакцией ингаляционной пробы. Незначительные изменения числа светящихся клеток (в сторону увеличения или уменьше- ,ния) соответствуют отрицательному результату в ингаляционном тесте.
В случае одновременной постановки
:каждой пробы и предлагаемого способа увеличение количества свеТаким образом, инкубация лимфоцитов с аллергеном, к которому они сенсибилизированы, приводит в 100Х тящихся клеток íà 8Х и более соответствует положительной реакции в 11 случаях из 17 (64 ). Здесь расхождение возникает, возможно, иэ-эа ложно положительных кожных проб. Незначительные изменения в числе флуоресцирующих лимфоцитов в 1ОО случаев совпадает с отрицательной кожной пробой, В табл. 2 приведены результаты использования предлагаемого способа у больных риносинусопатией, лекарственной аллергией, дерматитами, Видно, что инкубация лимфоцитов со специфическим аллергеном приводит к увеличению количества флуоресцирующих клеток более чем на 8, случаев к изменению количества светящихся клеток в суспенэии на 8 и более процентов. Инкубация лимфо1197640
Составитель П. Бонарцев
Редактор Т. Иитейко Техред Ж.Кастелевич Корректор. 1 демчик
Заказ 7645/4 . Тираж 721 . Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР . по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.. 4/5
Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4, цитов с неспецифическими аллергена-
1 ми не приводит к столь значительным изменениям числа флуоресцирующих клеток. Лимфоциты крови здоровых доноров не реагируют на инкубацию со всеми исследованными аллергенами изменением количества флуоресцирующих клеток.
