Способ получения гемоглобина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3723676/28-13 (22) 11. 03. 84 (46) ° 23.01.86. Бюл. В 3 (71) Центральный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (72) А.А.Козлов, А.Л.Берковский, И.Л.Смирнова, Н.А.Горбунова и Т.А. Балакина (53) 615.361.018.51 (088.8) (56) Sehgal L.R., Rosen А.L., et

al. Eur. - furg Res., 1979, 11, (52), 43.

„„SU„„205910 А (504 А 61 К 35/14 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА путем гемолиза эритроцитов с последующим добавлением кислоты, центрифугированием и очисткой, о т л и- ч а ю шийся тем, что, с целью повышения степени очистки, гемолиз проводят 5-20 М osm раствором хлористого натрия при соотношении эритроцитов и хлористого натрия 1:81: 10, а в качестве кислоты используют аскорбиновую кислоту.

Составитель . олчина

Техред О. еце

Корректор M.Пожо

Редактор А. Козориз

Заказ 8582/6 Тираж 6 +y Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к области выделения белков из объектов биологи-, ческого происхождения,. а именно к получению гемоглобина из эритроцитов крови.

Цель изобретения — повышение степени очистки гемоглобина.

Пример. Эритроциты донорской крови, полученные после отделения плазмы и лейкоцитов, отмывали 3 раза

1 6Х-ным раствором хлористого натрия при соотношении эритроцитов : гипертонический раствор (1,6Х NaC1)

1:3. 3 л отмытых эритроцитов струйно добавляли к 24 л охлажденного до 4 С 5 M oms раствора хлористого натрия (соотношение 1:8) при перемешивании, которое продолжали после добавления еще 15 мин. К 27 л гемо. лизата.капельно добавляли при 4 С

400 мл 0,5 M раствора аскорбиновой кислоты до достижения рН 5,5. Под кисленный гемолизат пропускали со скоростью 15 л/ч через проточную суперцентрифугу, работающую в режиме накопления осадка при скорости вращения ротора 40 тыс . об/мин. Затем супернатант фильтровали через пакет

205910 2 фильтров "Миллипор" с последовательностью пластин 1,2-0,8-0,6-0,45, -0,22 г . Фнльтрат подщелачивали

0,5 M раствором едкого натра до

5 рН 7,2 и концентрировали до объема

3,5 л на ультрафильтрационной установке полых волокон ДС-30 фирмы

"Амикон", Голландия (предел пропускания по белку 10 тыс. дальтон) и

10 затем диализовали против физиологического раствора на этой же установке. Отдиализованный раствор ге— моглобина вновь фильтровали через пакет фильтров "Миллипор" и стери15 лизовали, пропуская его через сте— рипизующий фильтр с диаметром пор

0,22p .

Характеристика раствора гемоглобина по примеру.

2п концентрация 20,7X содержание метгемоглобина 1, 5Х от общего гемоглобина, 1 содержание негемоглобиновых белков. -0, 1Х, 25 общее содержание липидов 3,8Х от величины в лизате, содержание фосфолипидов — хроматографически, следы.