Способ защиты грамотрицательных бактерий от теплового воздействия

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„Я0„„1214754 А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) (57) СПОСОБ ЗАЩИТЫ ГРАИОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ ОТ ТЕПЛОВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ с использованием защитных добавок, вводимых в бактериальную суспензию до действия температуры, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения выживаемости клеток грамотрицательных бактерий при 55о

60 С, в бактериальную суспензию перед действием высокой температуры вводят аминобензгидразид в концентрации 1-5 ° 10 М.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3731791/28-13 (22) 24.04.84 (46) 28.02.86. Бюл. Р 8 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов (72) С.Д.Иванов, Л.М.Алексин, С.В.Куликов и О.В.Добролеж (53) 663.11(088.8) (56) Corry I. The effect of water

activity on the heat resistance of

facteiia. In "Mater relations of

foods". London — New Jork — Бап

Francisco, Acad. Press., 1975, р. 325.

Беккер M.Е., Дамберг Б.Е., Рапопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов.

Рига, Зинатне, 1981.

Ю04 С 12 N 1/00, 1/04 //

//(C 12 N 1/00, С 12 R 1:185;

1:42 °

14754

Продолжение табл.l

20

Т а б л и ц а 2

Кратность увеличеКонцентрация

АБГ в суспен зии

Контроль

Опыт ния выживае40

Т а блица 1 мости бактерий

Кратность увеличения

-6

1 ° 10 М

2,2 10

2,8 к10

3,0 10

11,5"10 5,2

12,0 ° 10 4,4

4,5 «10 5,6

Опыт числа

Контроль

-5

2к10 M

5 10 М живых

1 клеток

1 .12

Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам защиты микроорганизмов от теплового воздей ствия при получении бактериальных препаратов.

Целью изобретения является разработка способа повышения выживаемости клеток грамотрицательных бактерий при тепловом воздействии, при температуре 55-60 С.

Сущность изобретения заключается в том, что для повышения выживаемости клеток грамотрицательных бакте.— рий при 55-60 С используют в качестве защитного средства аминобензгидразид (АБГ), который добавляют в бактериальную суспензию до воздействия температуры в концентрации 1-5 ° 10 м.

Пример 1. B независимых сериях опытов культуры клеток Escherichia coli M-17 с различной исходной активностью подвергались температурО 0 ным воздействиям 60 - 2 С в течение

5 мин или 55 С в течение 15 мин, Раствор АБГ добавляется до конечной концентрации 10 5 M. Исходная концентрация бактерий составляла 5" . 10 клеток/мл. Соотношение клеток

13 и протектора составляло 10 клеток/

/моль АБГ.

Оценка жизнеспособности проводилась путем высева культур на агар Эндо. В контрольных пробах вместо

АБГ добавляли эквивалентные количества физиологического раствора.

Результаты влияния АБГ на выживаемость бактерий после тепловых воздействий представлены в табл.1.

Число колонкообразующи единиц после тепловых воздействий

3,4+0,4 10 11,0 -1,0 10 3,2

2,9+0,2 «10 12,0+-1,5«10 4,0

2,2 0,1 л10 11,5t1,5 «10 5,2

4 2,8+0,2 <10 12,0+2,0 10 4,4

5 3,3<0 3 к10з 8 0 0,8 «10з 2,4 б 7,9 0,6 10 4,5+0,4 "10 5,7

Пример 2. В культуральную жидкость, содержащую взвесь клеток

Е.cali M-1.7, вносили добавки АБГ в различных концентрациях. Соотноше25 ние клеток и протектора составляло

1,0-0,2 10 клеток/моль АБГ.

Результаты влияния различных концентраций АБГ на выживаемость бактерий после тепловых воздействий представлены в табл.2.

Биологическая концен трация (КОЕ) после прогрева

При концентрациях АБГ менее

-6

55 5x10 M наблюдается увеличение числа живых клеток лишь в 1,5 раза по сравнению с контролем, а повышение

;концентрации АБГ до 0,7-1,0 ° 10 М. 1214754

Т а блица 3

Физиологический раствор + 5х10 M

АБГ

436

Физиологический раствор + 10 глицерина

Составитель В.Соина

Редактор Л.Повхан Техред С.Мигунова Корректор А.Зимокосов

Заказ 857/38 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 увеличивает выживаемость бактерий в 5,5 раза.

Пример 3. Было проведено сопоставление защитного действия

АБГ с применяемыми в практике протекторами. Результаты влияния АБГ и глицерина на жизнеспособность клеток Е.coli M-17 после их прогрева при 55 С в течение 15 мин представлены в табл.3.

Физиологический 2,75+0,15«10 раствор 100

Пример 4. В условиях примера 1 проводились опыты по определению влияния АБГ на защиту от теплового воздействия Serratia шагсезсепз.

Полученные результаты показали, что число колониеобразующих единиц при добавке 10 М АБГ составляет после нагрева 5,0 0,9« 10, тогда как беэ добавок АБГ эта величина равна 1, 1+

10 О, 4 «10э

Предлагаемый способ, предусматривающий использование в качестве протектора аминобенэгидразида позволяет повысить выживаемость клеток грамотрицательных бактерий после теплового воздействия почти вдвое по сравнению с применяемым в практике протектором-глицерином.

Использование в качестве защитной добавки аминобензгидразида в значительно меньших концентрациях по сравнению с глицерином позволяет получить более чистые бактериальные препараты, что имеет большое значение для их дальнейшего использова" ния.