Способ определения активности оксидазы- @ -аминокислот

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

C12Q1/02 - использующие жизнеспособные микроорганизмы

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

CNNV

РЕСПУБЛИК (5!) 4

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

l10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЮЗЪСТВУ (21) 3642649/28-14 (22) 03.06.83 (46) 15.03.86. Бюл. Ф 1О (71) Университет Друкбы народов им. Патриса Лумумбы (72) Т.Т.Березов, E.Â.Ëóêàøåâà, И.П.Смирнова и С.Х.Хадуев (53) 577.158(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР Ð 1163268, 2 1.04.83 °

„„SU„„12 1-7879 вЂ” - А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ОКСИДАЗЫ-L -AMHHOKHCJIOT путем инкубации фермента в среде, содержащей фосфатный буфер, L-лизин, пероксидазу и субстрат пероксидазы с последующим измерением оптической плотности, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени определения активности, инкубацию проводят при рН 7,5, а в качестве субстрата пероксидазы используют ферроцианид калия.

Составитель Н.Гуляева

Редактор Т.Парфенова Техред С.Мигунова Корректор Т.Колб

Заказ 1083/31 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к биохимии, а именно к биохимическим способам определения активности ферментов, в частности оксндазы-Ь-аминокислот.

Цель изобретения . вЂ” сокращение времени определения активности.

Пример. Для определения активности взяли раствор фермента, выделенного из Trichoderma sp., после частичной очистки фракционированным осаждением сульфатом аммония, и разбавили его в 100 раз. Определение ферментативной активности осуществляли в кювете спектрофотометра. Реакционная смесь содержала, об.7:

Натрий-фосфатный буфер

0,1 М, рН 7,5 76

L-лизин 0,1 М 4

Пероксидаза 0,04Х 1

Ферроцианид калия 0,1 М 4

Раствор оксидазы-L-аминокислот 15

Реакцию нницируют добавлением раствора фермента.

Смесь инкубировали при комнатной температуре 5 мин,после чего добав17879 ляли 25Х-ную трихлоруксусную кислоту до концентрации 3 .. Измеряли оптическую плотность раствора при .420 нм (D «,=0,21). В кювету контроля вмес-!

5 то раствора L-лизина внесли буферный раствор. Через 5 мин оптическая плотность в кювете контроля составляла П ь =0,022. Нашли разность оптических плотностей

D=D pas -Dep =О, 2 1-0, 02 2=0, 188 °

3а единицу активности фермента. (Е) принято такое его количество, которое катализирует, образование

1 мкМ перекиси водорода в минуту при. о

15 25 С. Калибровочную кривую построили, принимая ойтическую плотность окрашенного продукта вЂ” феррицианида калия, равной 1040 М см " .

20 По калибровочной кривой определили, что концентрация фермента в реакционной смеси составляет 0,038 Е/мл, Учитывая степень разбавления, вычислили, что ферментативная активность раствора после осаждения сульфатом аммония и диализа составляет 0,038

«6,7 100=25,5 Е/мл.