Способ получения целлюлолитического ферментного комплекса из фильтрата культуральной жидкости гриба @ @ @ @ 2220

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУ БЛИН

21 А1 (19) (11) ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3770952/28-13 (22) 30.07.84 (46) 07.07.86. Бюл. У 25 () Институт биохимии и физиологии (71) н микроорганизмов АН СССР (72) О.П.Белецкая, А.Л.Панин, Г .С.Иванова, И.С.Кулаев, О.Н.Окунев и Е.Л.Головлев (53) 577.15.07 (088 ° 8) (56) Иванова Г.С., Белецкая О.П., Окунев О.Н., Головлев Е.Л., Кулаев И.С. Фракционирование целлюлозного комплекса гриба Asp.terreus. — В.кн.: Прикладная биохимия и микробиология, 1983, т,l9, с. 362-268. (5D 4 C 12 N 9/42// С !2 Я 9/42, С 12 R 1 66 (54) (57) 1; СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЛ10ЛОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТНОГО КОМПЛЕКСА

ИЗ ФИЛЬТРАТА КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ

ГРИБА ASPERGILLUS TERREUS ВКМ;

F 2220 путем ионообменной хроматографии, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и удешевления процесса, хроматографию проводят на карбоксильном катионите на неполисахаридной основе типа КМТ или КРК, или Биокарб, или КМ 2п и комплекс элюируют в интервале рН

4,6 — 5,6.

2 ° Способ по п.l о т л и ч а юшийся qeM, что сорбцию осущест- . вляют при рН 4,0-4,5.

<О

560-1 700

9,4-19,4

6,2-30

Эндоглюканаза

Экзоглюкозидаэа

Целлобиаза

Эндоглюканаза . 21000

Экзоглюкозидаза 274

Целлобиаза 220

45

ВНИИПИ Заказ 3668/26 . Тираж 490

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

4 124252

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения целлюлолитического комплекса ферментов гриба Aspergillus terreus BKM

F 2220. 5

Цель изобретения — повышение выхода и удешевление процесса, Сущность способа заключается в том, что в качестве сорбента для извлечения целлюлолитического комп- !и лекса гриба А.terreus ВКМ F 2220, состоящего из пяти ферментов (двух целлобиаз и трех эндоглюканаз) используется карбоксильный катионит типа КМТ или КРК, или Биокарб, или

КМ 2п, в то время как в известном способе — сульфопропильный катионит sp-сефадекс (фирма Pharmacia; карбоксиметильный катионит фирмы

Pharmacia можно использовать только для извлечения целлобиаз, остальнь1е компоненты комплекса на нем не сорбируются). Сорбцию ведут при рН 4,04,5.

Пример 1. Гриб ° А.terreus

BKM F 2220 выращивают, мицелий отфильтровывают и отбрасывают. Целлюлолитический комплекс ферментов из фильтрата культуральной жидкости гриба сорбируют на колонке с карбоксильным катионитом КМТ 24 в 0,01 М ацетатном буфере при рН 4,0 со ско2

Ф ростью 150 мл/см ч. Промывают исходным буфером (2,5 л/л сорбента) и затем элюируют IM раствором ацетата

35 натрия. Комплекс элюируется в интервале рН 4,6-5,6 с выходом 1007., Пример 2. Целлюлолитический комплекс ферментов из фнльтрата культуральной жидкости сорбируют на . катионите KPK 1-8п в 0,05 М ацетатном буфере при рН 4,5 со скоростью

100 мп/см ч. Промывают 0,05 M ацетатным буфером vH 4,5 (2,5 л/л сопбента). Затем комплекс элюируют

2М ацетатом натрия со скоростью

51 мл/см ч. Комплекс ферментов элюируется в интервале концентрации элюирующего раствора 0,4-!М с выходом 100Х, при этом удаляется 997 балластного белка.!

Удельная активность препарата, ед. /г,".

Пример 3. Полученный, как описано в примере 2, комплекс нодвергают дополнительной очистке, как описано в примере 1. Выход 100Х, Удельная активность препарата, ед./г::

Пример 4. Целлюлолитический комплекс гриба Asp, terreus ВКМ

2220 .получают, как описано в примере 1, на колонке с карбоксильным катионитом Биокарб Г-15. Выход целлюлолитического комплекса 1007.

Пример 5. Целлюлолитический комплекс гриба Авр. terreus ВКМ 2220 получают, как описано в примере 2, на колонке с катионитом КМ 2п. Выход целлюлолитического комплекса IOOX.

Результаты аналогичные приведенным в примерах 1,2 4 и 5 — выход целлюлолитического комплекса IOOX получены нри использовании различных марок катионитов типа КМТ, типа КРК, типа Биокарб, а именно : типа КМТ—

КМТ, КМТ-24; типа KPK — KPK-1 — Iп, KPK-1-2п,, KPK-1-5п, KPK-1-8п, KPK-1— 12п, KPK-1 — 16п,KPK-1-20п, KPK-1-24п, KPK-1-20т-100; типа Биокарб — Биокарбы Г-5, Г-, 8, Г-IО, Г-I5, Г-20, Г-40, Э-5, Э-8,, Э-IО, Э-15 Э-20, Э-40, Биокарб .Д.

Использование предлагаемого способа позволит увеличить выход с 82 до 1007 и снизить затраты на сорбенты.для хроматографии, вследствие чего снизится. стоимость сорбента для получения комплекса ферментов. Кроме того использование сорбентов на твердой основе позволяет увеличить скорость протока через колонку с

1,5-5,1 до 100-150 мл/см.ч и, таким

O. образом, сократить время очистки препарата ферментов.